徐霞，張延珍，王慧蘭，江慧芳，張敏芳

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子癇前期并發(fā)臟器受累的孕婦血清及胎盤氧化應激損傷水平研究

徐霞，張延珍，王慧蘭，江慧芳，張敏芳

【摘要】目的：探討分析并發(fā)不同臟器受累的子癇前期孕婦血清及胎盤氧化應激損傷水平。方法：選擇2012年12月—2014年12月于福建醫(yī)科大學附屬協(xié)和醫(yī)院產(chǎn)科住院分娩的30例子癇前期并發(fā)臟器受累的孕婦作為研究組，30例子癇前期未并發(fā)臟器受累的孕婦作為對照1組，另選同期正常晚期妊娠孕婦30例作為對照2組。應用紫外比色法檢測血清及胎盤組織中谷胱甘肽過氧化物酶（GPX）活性、過氧化氫酶（CAT）活性、脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物丙二醛（MDA）水平；WST法（Total Superoxide Dismutase Assay Kit with WST-1）檢測血清及胎盤組織中超氧化物歧化酶（SOD）的活性水平。結果：①研究組及對照1組孕婦血清及胎盤組織中GPX、CAT、SOD活性水平均低于對照2組，且研究組均低于對照1組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。②研究組及對照1組孕婦血清及胎盤組織中MDA水平均高于對照2組，且研究組高于對照1組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。③研究組及對照1組孕婦血清及胎盤組織中MDA水平與GPX、CAT及SOD活性水平均呈負相關（P＜0.05）；對照2組孕婦血清及胎盤組織中MDA水平與GPX、CAT及SOD活性水平未見明顯相關性（P＞0.05）。結論：血清及胎盤氧化應激損傷增強可能是子癇前期發(fā)病的重要因素，且可能促使子癇前期孕婦并發(fā)臟器受累，血清及胎盤組織中抗氧化酶活性水平下降可能是血清及胎盤氧化應激損傷水平升高的原因。

【關鍵詞】先兆子癇；妊娠并發(fā)癥；氧化性應激；谷胱甘肽過氧化酶；過氧化氫酶；超氧化物歧化酶；丙二醛

作者單位：350001福州，福建醫(yī)科大學附屬協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科

（J Int Obstet Gynecol，2016,43：39-42）

子癇前期是嚴重影響母兒健康的妊娠期特有的疾病，是導致孕產(chǎn)婦和圍生兒死亡的主要原因，子癇前期嚴重者可導致心、肝、腎、腦等臟器損害，因此對子癇前期應加強孕婦重要臟器功能的監(jiān)測及圍生兒監(jiān)護，及時發(fā)現(xiàn)和掌握疾病發(fā)展的進程，以免發(fā)生危及母嬰生命的并發(fā)癥。子癇前期發(fā)病原因尚未明確，有關氧化應激損傷在子癇前期發(fā)病中的作用備受關注[1]。氧化應激是指機體內(nèi)氧化和抗氧化之間的不平衡狀態(tài)即過氧化狀態(tài)，氧化與抗氧化失衡時，可發(fā)生氧化應激損傷，誘導妊娠合并癥或并發(fā)癥的發(fā)生，如妊娠期高血壓疾病、流產(chǎn)、胎膜早破、胎兒生長受限等，血清及胎盤組織是子癇前期患者氧化應激損傷的主要部位。本研究通過檢測血清及胎盤組織不同氧化及抗氧化酶的活性水平，探討分析并發(fā)不同臟器受累的子癇前期孕婦血清及胎盤氧化應激損傷水平。

1　對象與方法

1.1研究對象選擇2012年12月—2014年12月于福建醫(yī)科大學附屬協(xié)和醫(yī)院產(chǎn)科住院分娩的30例子癇前期并發(fā)臟器受累的孕婦作為研究組，其中并發(fā)腎臟受累14例，肝臟受累10例，血液系統(tǒng)受累3例，腦部受累1例，心力衰竭2例；30例子癇前期未并發(fā)臟器受累的孕婦作為對照1組；另選同期正常妊娠晚期孕婦30例作為對照2組。3組孕婦年齡、孕周、孕前體質(zhì)量指數(shù)（BMI）及產(chǎn)前BMI比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。子癇前期的診斷標準參照《婦產(chǎn)科學》[2]，研究組及對照1組孕婦均因有剖宮產(chǎn)指征行剖宮產(chǎn)術分娩，對照2組因有剖宮產(chǎn)史、產(chǎn)道異常、胎位異常或社會因素而均行剖宮產(chǎn)術分娩；3組孕婦行剖宮產(chǎn)時均未臨產(chǎn)、胎膜未破。3組孕婦為單胎妊娠，均排除其他妊娠并發(fā)癥和內(nèi)外科合并癥。入組研究對象均獲知情同意后簽署知情同意書。

表13　組一般情況比較?。╯）

表13　組一般情況比較?。╯）

組別　年齡（歲）孕周（周）孕前BMI （kg/m2）孕期BMI （kg/m2）研究組　27.0±3.9　32.1±2.6　21.7±5.5　26.9±2.1對照1組　26.8±3.8　32.6±1.9　20.7±2.4　25.9±3.2對照2組　28.9±4.1　38.0±1.5　21.2±3.1　27.3±3.0 F（P）　1.23（0.89）　1.56（0.72）　1.34（0.79）　1.46（0.81）

1.2研究方法

1.2.1標本采集3組孕婦均于空腹狀態(tài)下采集肘正中靜脈血3 mL，室溫靜置30 min后，3 000 r/min離心15 min，分離血清，置-70℃冰箱保存?zhèn)溆茫?個月之內(nèi)用于測定相關指標，其中子癇前期患者在治療前采集血樣。于剖宮產(chǎn)時采集胎盤組織，待胎盤娩出后在無菌條件下立即取臍帶根部4塊胎盤組織分別為1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm，避開出血、梗死及鈣化區(qū)，冷生理鹽水漂洗去掉血樣，用無菌紗布吸干水分，裝入事先經(jīng)高溫高壓的1.5 mL EP管中，立即投入液氮冷卻后，轉(zhuǎn)-70℃低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2谷胱甘肽過氧化物酶（GPX）及過氧化氫酶（CAT）活性水平和丙二醛（MDA）水平測定采用紫外比色法測定，試劑均購自上海碧云天公司，按說明書進行操作，用酶標儀（美國杜雷公司）分別在450 nm測定吸光度，進行比色定量，以每毫克蛋白質(zhì)中的酶活性單位（U）表示酶活性水平，即U/mg；每毫克蛋白質(zhì)中的MDA量（nmol）表示MDA水平，即nmol/mg。

1.2.3超氧化物歧化酶（SOD）活性水平測定應用WST法測定，試劑盒購自上海碧云天公司，按說明書進行操作，按試劑說明書順序?qū)⒃噭┘尤?6孔板中，37℃孵育20 min，用酶標儀（美國杜雷公司產(chǎn)品）在450 nm測定吸光度，進行比色定量以得出酶活性水平。

1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學處理。定量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，3組間比較采用方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。血清及胎盤組織中MDA水平與GPX、CAT及SOD活性水平的相關性分析采用Pearson相關分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1各組孕婦血清及胎盤組織中GPX、CAT、SOD活性水平比較研究組及對照1組血清及胎盤組織中GPX、CAT、SOD活性水平均低于對照2組，且研究組均低于對照1組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01）。見表2和表3。

表2　3組血清中GPX、CAT及SOD活性水平比較（U/mg±s）

表2　3組血清中GPX、CAT及SOD活性水平比較（U/mg±s）

組別　GPX　CAT　SOD研究組①　40.32±3.45　16.89±4.01　059.09±11.01對照1組②　59.39±4.12　18.23±2.89　090.12±14.26對照2組③　76.10±3.55　53.90±3.81　115.09±16.12 F（P）　16.34（0.003）　19.34（0.001）　24.14（0.001）組間比較t（P）①∶②?。?.89（0.001）　－2.89（0.008）?。?5.12（0.000）①∶③　－11.89（0.000）?。?6.89（0.000）?。?5.90（0.000）②∶③?。?.94（0.009）?。?.73（0.001）　－7.36（0.000）

表33　組胎盤組織中GPX、CAT及SOD活性水平比較（U/mg，±s）

表33　組胎盤組織中GPX、CAT及SOD活性水平比較（U/mg，±s）

組別　GPX　CAT　SOD研究組①　51.53±5.40　16.02±4.39　056.31±10.34對照1組②　66.42±5.10　21.24±3.13　088.34±14.32對照2組③　87.10±4.00　49.59±3.23　109.22±15.21 F（P）　11.75（0.008）　17.98（0.003）　23.10（0.001）組間比較t（P）①∶②?。?.92（0.000）?。?.32（0.001）　－13.39（0.001）①∶③?。?4.19（0.000）?。?6.13（0.000）?。?8.23（0.000）②∶③?。?.34（0.001）?。?.81（0.000）?。?.12（0.001）

2．23組孕婦血清及胎盤組織中MDA水平比較研究組及對照1組血清及胎盤組織中MDA水平均高于對照2組，且研究組均高于對照1組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表4。

表43　組孕婦血清及胎盤組織中MDA水平比較（±s）

表43　組孕婦血清及胎盤組織中MDA水平比較（±s）

組別　血清MDA（nmol/mg）　胎盤組織MDA（nmol/mg）研究組①　178.09±23.22　128.89±19.19對照1組②　91.56±14.09　90.37±15.09對照2組③　53.11±10.79　67.08±13.19 F（P）　19.12（0.001）　20.45（0.002）組間比較t（P）①∶②　17.92（0.000）　11.02（0.001）①∶③　27.61（0.000）　22.67（0.000）②∶③　9.09（0.000）　6.56（0.000）

2.33組孕婦血清及胎盤組織中MDA水平與GPX、CAT、SOD活性水平的相關性研究組及對照1組孕婦血清及胎盤組織中MDA水平與GPX、CAT及SOD活性水平均呈負相關（均P＜0.05）；對照2組孕婦血清及胎盤組織中MDA水平與GPX、CAT及SOD活性水平未見明顯相關性（均P＞0.05）。見表5和表6。

表53　組孕婦血清中MDA水平與GPX、CAT、SOD活性水平的相關性分析　r（t，P）

表63　組孕婦胎盤組織中MDA水平與GPX、CAT、SOD活性水平的相關性分析　r（t，P）

3　討論

3.1子癇前期并發(fā)臟器受累的孕婦抗氧化酶活性水平變化及其意義氧化應激是指機體內(nèi)活性氧簇（ROS）生成與抗氧化防御系統(tǒng)之間的不平衡狀態(tài)，表現(xiàn)為ROS自由基生成超過抗氧化防御系統(tǒng)，或者抗氧化劑活性降低[3]。目前認為氧化應激參與子癇前期的發(fā)生，氧化應激反應是子癇前期由基本病理生理變化階段發(fā)展至器官損害階段的重要聯(lián)系紐帶。氧化應激損傷時，機體主要靠GPX、CAT、SOD 3種抗氧化酶發(fā)揮氧化防御作用，其中CAT主要存在于過氧化物酶體中，SOD及GPX主要存在于線粒體中。GPX是體內(nèi)廣泛存在并能夠特異地催化谷胱甘肽對過氧化氫的還原反應，從而起到保護細胞結構和功能穩(wěn)定的作用。SOD是一種存在于體液中的抗氧化酶，可清除超氧陰離子，保護組織免受超氧陰離子的損傷。

如果抗氧化作用隨著氧化應激的增強而增強，氧化應激損傷可能就沒有那么嚴重，而事實正好相反。本研究發(fā)現(xiàn)研究組及對照1組血清及胎盤組織中GPX、CAT、SOD活性水平均低于對照2組，且研究組均低于對照1組，與其他研究結果一致[4-6]。正常妊娠伴隨氧化應激，孕婦體內(nèi)抗氧化物質(zhì)可及時清除ROS自由基，使得ROS自由基的生成和降解處于平衡狀態(tài)，因此對孕婦并無有害影響。當ROS自由基生成過多，損傷抗氧化酶，導致抗氧化酶活性水平下降，使得氧化與抗氧化失衡，氧化應激損傷增強，促使子癇前期的發(fā)生和發(fā)展。子癇前期可累及各臟器功能改變導致各種并發(fā)癥的發(fā)生，其通常發(fā)生于妊娠中晚期、分娩期及產(chǎn)后早期，子癇前期無論何種器官受累均表示病情嚴重。當氧化應激損傷加強，抗氧化酶活性水平進一步下降時，促進子癇前期病情進展，損傷累及各臟器而致各種并發(fā)癥。

3.2子癇前期并發(fā)臟器受累的孕婦MDA水平變化及其意義氧化應激的毒性效應是產(chǎn)生大量氧化中間產(chǎn)物，如超氧陰離子、過氧化氫、羥基等自由基，這些物質(zhì)與脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、DNA結合產(chǎn)生過氧化反應，破壞細胞與組織的結構和功能。MDA是過氧化脂質(zhì)的降解產(chǎn)物，而過氧化脂質(zhì)是自由基與脂質(zhì)作用的產(chǎn)物。本研究發(fā)現(xiàn)研究組和對照1組血清及胎盤組織中MDA水平均高于對照2組，且研究組均高于對照1組及對照2組，提示氧化應激損傷增強可能參與了子癇前期臟器受累。該結論與Gohil等[7]和Can等[8]的研究一致。

3.3子癇前期并發(fā)臟器受累的孕婦MDA與GPX、CAT、SOD活性水平的相關性及其臨床意義氧化應激損傷時，GPX、CAT、SOD 3種抗氧化酶發(fā)揮氧化防御作用[9]。本研究發(fā)現(xiàn)子癇前期并發(fā)或未并發(fā)臟器受累孕婦的血清及胎盤組織中，抗氧化酶活性水平與線粒體氧化應激損傷產(chǎn)物——MDA水平均呈負相關。正常妊娠伴隨氧化應激，機體抗氧化酶活性水平呈代償性升高。當胎盤氧化應激損傷加重，抗氧化酶不能代償損傷，且ROS直接損傷抗氧化酶，均導致抗氧化酶活性水平下降，氧化應激損傷增強，損傷產(chǎn)物增加。提示子癇前期患者體內(nèi)存在較低的抗氧化能力和較強的脂質(zhì)過氧化反應，也證實了在子癇前期病理生理機制中脂質(zhì)過氧化反應起著重要作用。

總之，子癇前期并發(fā)臟器受累的孕婦血清及胎盤組織中抗氧化酶活性水平下降，MDA水平升高，且抗氧化酶活性水平與MDA水平呈明顯負相關。這提示血清及胎盤組織中抗氧化酶活性水平下降、MDA水平升高可能是子癇前期并發(fā)臟器受累的重要因素。

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[本文編輯王昕]

Study on Oxidative Stress Injury Levels in Serum and Placenta of Pre-eclampsia in Pregnant Women Complicated with Organ Involvement

XU Xia，ZHANG Yan-zhen，WANG Hui-lan，JIANG Hui-fang，ZHANG Min-fang.Department of Obstetrics and Gynecology，F(xiàn)ujian Medical University Union Hospital，F(xiàn)uzhou 350001，China Corresponding author：ZHANG Yan-zhen，E-mail：xuxiadeyouxiang@aliyun.com

【Abstract】Objective：To investigate oxidative stress injury levels in serum and placenta of pre-eclampsia（PE）in pregnant women complicated with organ involvement.Methods：30 PE patients complicated with organ involvement who were admitted to Fujian Medical University Union Hospital for delivery from December 2012 to December 2014 were chosen as study group,30 patients without organ involvement were chosen as control group one,another 30 normal pregnant women at the same time were chose as control group two.Ultraviolet colorimetry was used to detect glutathione peroxidase（GPX）and catalase （CAT）activity in maternal serum and placenta,as well as the malondialdehyde（MDA）level.WST was used to detect superoxide dismutase（SOD）activity in serum and placenta.Results：①Mean maternal serum and placenta GPX，CAT and SOD activity were significantly decreased in the study group and control group one as compared to control group two,study group were also lower than the control group one,both of the difference had statistical significance（P＜0.05）.②Mean maternal serum and placenta MDA were significantly elevated in the study group and control group one as compared to control group two,and the study group were also higher than the control group one,both of the difference had statistical significance（P＜0.05）.③Mean maternal serum and placenta MDA concentration were negatively correlated with the levels of GPX，CAT and SOD in study and control group one（P＜0.05）.No obvious correlation was found in the control group two.Conclusions：Serum and placenta enhanced oxidative stress damage may be an important factor in the onset of PE,and can lead to PE women concurrent organ involvement.Antioxidant enzyme activity in serum and placental tissue levels drop may be the cause of the elevated levels of serum and placenta oxidative stress injury.

【Keywords】Pre-eclampsia；Pregnancy complications；Oxidative stress；Glutathione；Catalase；Superoxide dismutase；Malondialdehyde；

通信作者：張延珍，E-mail：xuxiadeyouxiang@aliyun.com

收稿日期：（2015-09-06）