劉彩雙， 劉衛(wèi)云， 黨曉偉， 秦博文， 馬秀芬(承德護(hù)理職業(yè)學(xué)院， 河北 承德 067000)

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SIAH2和HIF-1α蛋白在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義?

劉彩雙， 劉衛(wèi)云， 黨曉偉， 秦博文， 馬秀芬
(承德護(hù)理職業(yè)學(xué)院， 河北 承德 067000)

摘 要:目的:通過(guò)檢測(cè)喉鱗狀細(xì)胞癌組織、聲帶息肉、癌旁組織中SIAH2和HIF-1α蛋白的表達(dá)，為喉鱗狀細(xì)胞癌發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)，并為其早期診斷和治療提供幫助。方法:收集喉鱗狀細(xì)胞癌患者的石蠟包埋組織60例，同時(shí)收集聲帶息肉、癌旁石蠟包埋組織各30例，應(yīng)用法免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)SIAH2和HIF-1α蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:SIAH2蛋白和HIF-1α蛋白在癌旁組織、聲帶息肉以及喉鱗狀細(xì)胞癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為10%、33.3%、70%和3.3%、30.0%和66.7%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；SIAH2蛋白和HIF-1α蛋白的表達(dá)與喉鱗狀細(xì)胞癌患者的分化程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期有關(guān)(P＜0.05)。喉鱗狀細(xì)胞癌中SIAH2和HIF-1α蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論:SIAH2和HIF-1α蛋白可能與喉鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病有關(guān)，并對(duì)喉鱗狀細(xì)胞癌的侵襲性生物學(xué)行為有促進(jìn)作用，聯(lián)合檢測(cè)二者可為預(yù)測(cè)腫瘤的生物學(xué)行為以及患者的預(yù)后提供幫助。

關(guān)鍵詞:SIAH2； HIF-1α； 喉鱗狀細(xì)胞癌

SIAH2蛋白作為一種E3泛素連接酶，能夠促使底物蛋白發(fā)生泛素化降解，目前研究指出SIAH2可以通過(guò)SIAH2/ PHD/ HIF-1α信號(hào)通路發(fā)揮促癌作用。本研究通過(guò)檢測(cè)SIAH2和HIF-1α蛋白的表達(dá)，探討二者在喉鱗狀細(xì)胞癌中的臨床病理意義。

1　資料與方法

1.1臨床資料:收集2015年6月至2015年12月承德護(hù)理職業(yè)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科喉鱗狀細(xì)胞癌石蠟包埋組織60例，同時(shí)收集聲帶息肉、癌旁石蠟包埋組織各30例。60例患者中男52例，女8例；年齡26～80歲，平均59.2歲；聲門(mén)型45例，非聲門(mén)型15例；高分化19例，中分化21例，低分化20例；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者40例，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者20例；無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移著37例，伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者13例；臨床Ⅰ期17例，臨床Ⅱ期15例，臨床Ⅲ期15例，Ⅳ期13例。所有患者術(shù)前均無(wú)其他原發(fā)腫瘤，并且未進(jìn)行放化療，均接受手術(shù)切除治療，并經(jīng)兩位副高以上病理醫(yī)師確診為喉鱗狀細(xì)胞癌。

1.2方 法

1.2.1免疫組織化學(xué)染色(PV二步法):將組織切片置于高壓鍋，檸檬酸鈉溶液熱修復(fù)，滴加一抗(SIAH2稀釋度為1:100，HIF-1α為工作液無(wú)需稀釋)，4℃孵育過(guò)夜。滴加通用型兩步法檢測(cè)試劑盒(PV-9000)，室溫孵育15min。滴加現(xiàn)配制的DAB顯色液，適時(shí)終止顯色。以上個(gè)步驟均嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.2.2統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料組間比較采用x2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

2.1SIAH2蛋白在癌旁組織、聲帶息肉及喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義，見(jiàn)表1。

表1　SIAH2蛋白在癌旁組織、聲帶息肉以及喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)

表2　SIAH2蛋白的表達(dá)與喉鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系

2.2HIF-1α蛋白在癌旁組織、聲帶息肉以及喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義，見(jiàn)表3。

表3　HIF-1α蛋白在癌旁組織、聲帶息肉以及喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)

表4　HIF-1α蛋白的表達(dá)與喉鱗狀細(xì)胞癌臨床及病理特征的關(guān)系

2.3喉鱗狀細(xì)胞癌中SIAH2和HIF-1α間的相關(guān)性: SIAH2與HIF-1α蛋白在喉癌中的表達(dá)經(jīng)Spearman相關(guān)性分析得出rs＝0.295(P＝0.017)，兩種蛋白在喉鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)呈正相關(guān)。

3　討 論

近年來(lái)，泛素化修飾的研究日趨完善，泛素化修飾通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期影響著細(xì)胞的增殖和凋亡過(guò)程，當(dāng)泛素化降解的過(guò)程失調(diào)時(shí)，腫瘤細(xì)胞凋亡和增殖等生物學(xué)過(guò)程發(fā)生改變，最終促使了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[1]。SIAH2是泛素連接酶E3家族的成員之一，研究發(fā)現(xiàn)，SIAH2作為一種癌基因在胰腺癌細(xì)胞株Bx-PC3、Panc-1以及肺癌細(xì)胞株BZR、A549中的表達(dá)水平升高，而且通過(guò)抑制SIAH2的表達(dá)，可以使腫瘤的生長(zhǎng)過(guò)程受到抑制[2，3]。孟媛[4]等證實(shí)SIAH2蛋白在乳腺正常組織、原位癌、浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中的陽(yáng)性表達(dá)率依次升高，而且與乳腺癌的組織學(xué)分級(jí)密切相關(guān)。劉瑤等[5]研究表明SIAH2蛋白在肝癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為78%，明顯高于相應(yīng)癌旁組織中的14%，并與肝癌的TNM分期密切相關(guān)。肖海等[6]研究結(jié)果顯示，當(dāng)SIAH2受到抑制后，肝癌細(xì)胞的增殖受到抑制，細(xì)胞周期被阻滯在G1期，而其細(xì)胞凋亡過(guò)程受到了促進(jìn)。以上研究結(jié)果表明，SIAH2作為一個(gè)癌基因，參與了多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

HIF-1是一種異源二聚體，主要是由HIF-1α亞基和HIF-1β亞基組成，HIF-1α主要存在于細(xì)胞核中，胞漿中的HIF-1α含量極少且?guī)缀醪话l(fā)揮生物學(xué)功能。但是如果HIF-1α穩(wěn)定性增強(qiáng)或表達(dá)量增加，HIF-1α不斷地積聚，并且逐漸由細(xì)胞核轉(zhuǎn)移至細(xì)胞漿中，其可與HIF-1β結(jié)合，最終形成具有活性的HIF -1，發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)功能。研究證實(shí)，抑制HIF-1α基因的表達(dá)可使胰腺癌細(xì)胞中VEGF表達(dá)下調(diào)，從而抑制腫瘤血管形成，而腫瘤細(xì)胞中HIF-1α的轉(zhuǎn)錄激活，則可能通過(guò)多條信號(hào)傳導(dǎo)通路促進(jìn)VEGF表達(dá)上調(diào)，從而促進(jìn)腫瘤血管的形成。范平等發(fā)現(xiàn)HIF-1α在肝癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織，并與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移、腫瘤包膜及臨床TNM分期密切相關(guān)。孫國(guó)貴等[7]結(jié)果顯示HIF1α在NSCLC中呈高表達(dá)，HIF-1α的表達(dá)與患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，表明HIF-1α表達(dá)陽(yáng)性增加了NSCLC發(fā)生惡性行為的風(fēng)險(xiǎn)。

SIAH2和HIF-1α關(guān)系密切，在SIAH2/ PHD/ HIF -1α通路中，常氧情況下脯氨酰羥化酶(Pro1y1 Hydroxy1ase，PHD)可以將HIF-1α降解，破壞其穩(wěn)定性。同時(shí)PHD作為SIAH2的底物可通過(guò)泛素化降解途徑被SIAH2所降解。本研究中SIAH2和HIF-1α蛋白在癌旁組織、聲帶息肉以及喉鱗狀細(xì)胞癌中的陽(yáng)性表達(dá)率依次升高，均與喉鱗狀細(xì)胞癌患者的分化程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期有關(guān)，并且二者表達(dá)呈正性相關(guān)，我們推測(cè)在喉鱗狀細(xì)胞癌中SIAH2的表達(dá)與活性增強(qiáng)，通過(guò)泛素化降解途徑促進(jìn)PHD的降解，進(jìn)而使HIF-1α穩(wěn)定性增強(qiáng)并且表達(dá)量增加，HIF-1α可進(jìn)一步調(diào)控其靶基因的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲。SIAH2和HIF-1α影響了喉鱗狀細(xì)胞癌的分化，并可能促進(jìn)了癌細(xì)胞的淋巴道播散，因此二者促腫瘤發(fā)展的作用極強(qiáng)，及時(shí)篩選喉鱗狀細(xì)胞癌癌變過(guò)程中差異表達(dá)蛋白質(zhì)對(duì)于喉鱗狀細(xì)胞癌的防治具有非常重要的意義。

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文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B

doi:10.3969/ j.issn.1006-6233.2016.02.006

文章編號(hào):1006-6233(2016)02-0192-04

基金項(xiàng)目：?河北省高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目，(編號(hào)：Z2015011)