李順霞 徐會圃 崔艷芳 任金來 彭新國 紀冰

纖維蛋白原基因FGG10034C＞T基因多態(tài)性與缺血性腦卒中的關(guān)系的研究

李順霞 徐會圃 崔艷芳 任金來 彭新國 紀冰

目的 探討纖維蛋白原基因FGG10034C＞T基因多態(tài)性與缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)性，尋找缺血性腦卒中的遺傳易感性因素，以期從分子水平闡明缺血性腦卒中的發(fā)病機制。方法 回顧性收集100例臨床診斷為缺血性腦卒中(IS)的患者資料作為病例組及101例健康查體者的臨床資料作為對照組，應(yīng)用聚合鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）進行基因多態(tài)性分析。結(jié)果 FGG10034C＞T位點T/T基因型及T等位基因在缺血性腦卒中組出現(xiàn)的頻率(分別為14%、33.5%)明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 纖維蛋白原基因FGG10034C＞T位點與缺血性腦卒中有關(guān)聯(lián)，可能是一個遺傳學(xué)的危險因素。

纖維蛋白原基因；多態(tài)性；缺血性腦卒中

隨著生活水平的提高，腦血管疾病、心臟病、惡性腫瘤成為人類的三大致死疾病，腦血管疾病因其高發(fā)病率、高致殘率、高致死率的“三高”嚴重威脅人們的生活質(zhì)量和健康水平。近期的流行病學(xué)研究表明,在中國腦卒中的發(fā)病率約為110～180／10萬；年死亡率約為80～120／10萬，而這一數(shù)據(jù)在近年來仍有上升的趨勢[1-2]。缺血性腦卒中(ischemic stroke，IS)的發(fā)病率占急性腦血管病的75%，是腦血管意外中最常見和最嚴重的一類。許多流行病學(xué)資料和研究表明，缺血性腦卒中有一定家族聚集性，有卒中陽性家族史者較同年齡、同性別同等危險因素下的陰性家族史者更易患腦卒中。血漿纖維蛋白原(fibrinogen，F(xiàn)ib)水平增高是缺血性心血管疾病發(fā)生發(fā)展的一個獨立危險因素[3]。其編碼區(qū)的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）所致纖維蛋白原結(jié)構(gòu)和功能的異常與血栓性疾病密切相關(guān)。本實驗研究纖維蛋白原FGG10034基因多態(tài)性與缺血性腦卒中的關(guān)系，為腦血管病的防治提供依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010年1月～2012年1月濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院臨床診斷為缺血性腦卒中的100例患者作為IS組，所收集臨床患者均由CT或MRI確診。再選取同時期同年齡組的101例健康查體者的臨床資料作為對照組。所有病例均排除出凝血障礙性疾病，近期嚴重感染，輸血，近期內(nèi)的手術(shù)，服用激素或免疫抑制劑。其中IS組平均年齡（59.63±5.80）歲，男69例，女31例；對照組平均年齡（61.09±6.50）歲，男67例，女34例，2組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 DNA的提取 抽取靜脈血2mL，EDTA-2K抗凝。采用碘化鉀法從人全血中抽提基因組DNA。

1.2.2 引物合成及PCR Primer5.0軟件設(shè)計引物。選擇大連寶生物公司合成。限制性內(nèi)切酶KpnI對擴增產(chǎn)物進行酶切。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理，計量資料“x±s”表示，采用t檢驗。χ2檢驗比較FGG基因各危險因素在IS及對照組間的分布差異，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

纖維蛋白原基因FGG10034C＞T位點經(jīng)Taq DNA聚合酶擴增101例正常對照和100例缺血性腦卒中病例標本，結(jié)果均能擴增出91bp的基因片段，經(jīng)限制性內(nèi)切酶KpnI酶切后，CC基因型結(jié)果顯示2條色帶，分別為42BP和49bp。而TT基因型缺少酶切位點不能被剪切，在3%瓊脂糖凝膠電泳后只有一條91bp的色帶如圖1。

圖1 FGG片段酶切結(jié)果

3 討論

Fib是由肝細胞合成分泌的一種糖基化蛋白，不僅參與凝血過程及血栓形成，還可以直接作用于血管內(nèi)皮細胞，導(dǎo)致內(nèi)皮細胞功能障礙，增加血管的通透性，使液體和蛋白漏出[4]。一個纖維蛋白原單位由Aα、Bβ和γ三對對稱排列的肽鏈組成，這3對肽鏈分別由由位于第四號染色體的長臂(q23"～q32)上的3個不連續(xù)的單拷貝基因FGA，F(xiàn)GB、FGG編碼，長約50kb。Fib基因的轉(zhuǎn)錄增加其中一條鏈的mRNA的轉(zhuǎn)錄都可以增加其他兩條鏈mRNA的轉(zhuǎn)錄，即可增加Fib分子的合成和分泌。

纖維蛋白原基因FGG的總長度約為1314kb，F(xiàn)GG有多個位點存在SPN，國內(nèi)研究最多的是AαThr312Ala和

BβArg448Lys。對血栓形成性疾病，如心肌梗死、肺栓塞、慢性血栓栓塞性肺動脈高壓等研究較多，腦梗死及其它部位栓塞的相關(guān)研究較少。目前國內(nèi)關(guān)于FGG基因多態(tài)性位點與血栓性疾病的論著較少。Cheung[5]發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)GG基因多態(tài)性是IS，心肌梗死（MI）等血栓性疾病的保護因素，而Mannial等[6]研究結(jié)果則提示FGG基因的多態(tài)性是缺血性腦卒中的高危因素。另有研究[7]提示，F(xiàn)GG鏈的N308K可以通過影響Fib形成原纖絲的能力，這一影響可能通過影響D：D和A：fl部分的相互作用而實現(xiàn)。在

2007年，Grünbacher G等的研究結(jié)果證實纖維蛋白原FGG基因10034C＞T基因多態(tài)性與深靜脈血栓有關(guān)聯(lián)性很強[8]；而此后Babak Bahadori等得出的實驗結(jié)果則提示FGG基因10034位點基因多態(tài)性與外周動脈疾病無關(guān)[9]。國外尚沒有FGG基因

10034C＞T與缺血性腦卒中相關(guān)性的一致結(jié)論。

本實驗對纖維蛋白原基因FGG10034C＞T位點多態(tài)性分布的檢測結(jié)果,對照組CC基因型所占比列約為61.3%，與國外研究的60.9%，相比略高，可能和測量方法不同有關(guān)，也可能與基因的種族及地區(qū)有關(guān)但大體與以往的研究報道的檢測結(jié)果一致[9]。基因型中TC型分布較少，約34.7%，TT型約4.0%。對次等位基因的分布進行分析的結(jié)果顯示，C等位基因在正常對照組分布顯略高于缺血性腦卒中組，而T等位型基因在缺血性腦卒中組分布顯著高于對照組（P＜0.01），對不同基因型的分析結(jié)果顯示，T等位基因與TT基因型均與缺血性腦卒中存在一定的相關(guān)性，而CC基因型與缺血性腦卒中無關(guān)聯(lián)性，說明纖維蛋白原FGG基因10034位點C基因突變?yōu)門基因與缺血性腦卒中有關(guān)聯(lián)性。

目前學(xué)術(shù)界一直認為IS是環(huán)境因素與多組基因多態(tài)性及各種危險因素共同作用的結(jié)果，單基因多態(tài)性的研究往往不能完整解釋多組基因多態(tài)性的表型效應(yīng)，因此缺血性腦卒中和纖維蛋白原基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)性研究還需進一步的研究討論。

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Objective To explore the relationship between the polymorphism of fibrinogen gene FGG10034C ＞ T and ischemic stroke, looking for genetic susceptibility factors of ischemic stroke, in order to elucidate the pathogenesis of ischemic stroke based on molecular level. Methods Fibrinogen gene FGG10034C ＞ T polymorphism was determined by PCR-RFLP in 100 cases of ischemic stroke and 100 controls selected form Binzhou medical school affiliated hospital. Results The frequencies of FGG10034 T/T genotype and T allele in the groups of ischemic stroke group were 14.0%and 33.5%, which were significantly higher than control group (P＜ 0.05). Conclusion There is correlation between the fibrinogen FGG10034 C＞T polymorphism and ISFGG10034 C＞T may be a gnetic risk factors of stroke.

Fibrinogen gene; Polymorphism; Ischemic stroke

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.4.012

濱州醫(yī)學(xué)院校級科技計劃項目 （BY2011KZ08）

山東 256600 濱州醫(yī)學(xué)院 (李順霞 徐會圃 崔艷芳 任金來 彭新國 紀冰）