鄭瑤

痰液性狀和保存條件對(duì)結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率的影響

鄭瑤

目的 探討不同性狀及不同保存時(shí)間條件對(duì)痰液樣本結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率的影響。方法 統(tǒng)計(jì)分析949份結(jié)核菌培養(yǎng)結(jié)果，對(duì)比不同性狀及不同保存條件下的痰液標(biāo)本結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率。結(jié)果 在上述不同性狀的痰液樣本檢測(cè)中，干酪痰的陽性培養(yǎng)率最高，陽性培養(yǎng)率從高到底依次為干酪痰、血性痰、粘液痰、唾液，組間對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。經(jīng)檢查，220例結(jié)核菌培養(yǎng)結(jié)果顯示為陽性。將其隨機(jī)分為4組，每組樣本數(shù)是55例。將其置于不同溫度條件下培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)保存溫度是-18℃時(shí)，隨著樣本保存時(shí)間的延長(zhǎng)，標(biāo)本陽性率有不明顯的下降，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在4℃、25℃及30℃時(shí)，隨著樣本保存時(shí)間的延長(zhǎng)，樣本陽性率均有明顯下降（P＜0.05），尤其是在28 d時(shí)下降特別明顯（P＜0.05）。而在溫度相同時(shí)，保存時(shí)間為0 d時(shí)標(biāo)本陽性率最高，隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，同一溫度下樣本的陽性率均呈下降趨勢(shì)（P＜0.05），且4℃、25℃及30℃時(shí)標(biāo)本陽性率從低14 d開始即與0 d差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 不同性狀及不同保存條件會(huì)對(duì)痰液樣本結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率造成較大影響，因此在進(jìn)行痰液結(jié)核菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)選取適宜性狀痰液并于適宜溫度條件下短時(shí)間保存。

痰液性狀；保存條件；結(jié)核菌；陽性率

痰液結(jié)核菌分離培養(yǎng)是當(dāng)前用于肺結(jié)核病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢查的重要依據(jù)，同時(shí)也是結(jié)核病病原學(xué)診斷的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”[1]，其痰液樣本的陽性檢出率高于涂片檢查[2]。在進(jìn)行結(jié)核菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，不僅需要對(duì)接種前的痰液樣本進(jìn)行去污染處理，還應(yīng)按照相應(yīng)操作規(guī)程，選取合適的痰液性狀及保存條件。為進(jìn)一步研究痰液性狀和保存條件對(duì)結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率的影響，對(duì)我疾病控制中心收集的痰液樣本檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，現(xiàn)作如下報(bào)道。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取上饒市疾病預(yù)防控制中心于2012年2月～2014年10月收集的痰液樣本949份，痰液性狀劃分參照標(biāo)準(zhǔn)[3]對(duì)949份標(biāo)本展開抗酸桿菌涂片檢查。

1.2 方法

1.2.1 痰結(jié)核菌培養(yǎng)方法 實(shí)驗(yàn)前，上述949份痰液樣本均采用4%氫氧化鈉處理，后接種酸性羅氏培養(yǎng)基進(jìn)行痰結(jié)核菌分離培養(yǎng)，于37℃環(huán)境下孵育8周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)報(bào)告總結(jié)?？偨Y(jié)抗酸桿菌檢查結(jié)果。

1.2.2 不同保存條件下的痰液標(biāo)本實(shí)驗(yàn)方法 將上述經(jīng)由抗酸桿菌檢查為陽性的痰液樣本隨機(jī)分為4組，分別于-18℃、4℃、25℃、30℃條件下保存，并在不同時(shí)間后對(duì)其進(jìn)行痰結(jié)核菌分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)檢查。

1.3 質(zhì)量控制[4]上述培養(yǎng)過程均參照《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》中的相關(guān)規(guī)定實(shí)施質(zhì)量控制。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 此次研究使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 17.0對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料以“x±s”形式表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分比形式表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同性狀痰液結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率對(duì)比 在本次收集的949份痰液樣本中，干酪痰179例，血性痰107例，粘液痰535例，唾液128例。結(jié)核菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)為陽性的痰液樣本數(shù)為220份，其中干酪痰110份，陽性培養(yǎng)率為61.45%（110/179）；血性痰39例，陽性培養(yǎng)率為36.45%（39/107）；粘液痰60例，陽性培養(yǎng)率為11.21%（60/535）；唾液11例，陽性培養(yǎng)率為8.59%（11/128）。在上述不同性狀的痰液樣本檢測(cè)中，干酪痰的陽性培養(yǎng)率最高，陽性培養(yǎng)率從高到底依次為干酪痰、血性痰、粘液痰、唾液，組間對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

2.2 不同保存條件下痰液培養(yǎng)陽性率對(duì)比 經(jīng)檢查，220例結(jié)核菌培養(yǎng)結(jié)果顯示為陽性，將其隨機(jī)分為4組，每組樣本數(shù)是55例。將其置于不同溫度條件下培養(yǎng)，當(dāng)保存溫度是-18℃時(shí)，隨著樣本保存時(shí)間的延長(zhǎng)，標(biāo)本陽性率有不明顯的下降（P＞0.05）；在4℃、25℃及30℃時(shí)，隨著樣本保存時(shí)間的延長(zhǎng)，樣本陽性率均有明顯下降（P＜0.05），尤其是在28 d時(shí)下降特別明顯（P＜0.05）。而在溫度相同時(shí)，保存時(shí)間為0 d時(shí)標(biāo)本陽性率最高，隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，同一溫度下樣本的陽性率均呈下降趨勢(shì)（P＜0.05），且4℃、25℃及30℃時(shí)標(biāo)本陽性率從低14 d開始即與0 d差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同保存條件下痰液培養(yǎng)陽性率對(duì)比[n(%)]

3 討論

3.1 結(jié)核菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn) 結(jié)核菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)是當(dāng)前醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”[5]，不論是對(duì)于細(xì)菌檢查還是臨床診斷工作來說，結(jié)核菌培養(yǎng)都是最佳的檢查方法。通過結(jié)核菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，能夠?qū)Ψ谓Y(jié)核病患者進(jìn)行準(zhǔn)確診斷，特別是對(duì)于經(jīng)由涂片檢查顯示為陰性的肺結(jié)核患者來說，結(jié)核菌分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)?zāi)軌驅(qū)ζ涫欠駷榉谓Y(jié)核患者進(jìn)一步確認(rèn)，同時(shí)也可彌補(bǔ)涂片檢查所帶來的遺漏，為肺結(jié)核的臨床診斷提供了重要依據(jù)，同時(shí)也在一定程度上有利于幫助消滅傳染源。但是，實(shí)際工作中存在著部分III型肺結(jié)核患者結(jié)核菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)仍然為陰性，相關(guān)研究表明[6]，其主要是同痰液樣本性狀以及保存條件有著較大關(guān)聯(lián)。

3.2 痰液性狀對(duì)結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率的影響 對(duì)結(jié)核菌分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)來說，痰液樣本的質(zhì)量對(duì)培養(yǎng)結(jié)果的準(zhǔn)確性存在一定影響，有研究表明不同性狀的痰液樣本結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率存在顯著差異[7]。本次研究的949例痰液樣本中，結(jié)核菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)為陽性的痰液樣本數(shù)為220份，其中干酪痰的陽性檢出率最高，唾液的陽性檢出率最低。因此在日后進(jìn)行培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，可注意選取干酪痰作為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本，從而提升痰液培養(yǎng)陽性檢出率。同時(shí)需要注意在進(jìn)行痰液取樣時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵循相關(guān)規(guī)范要求，降低培養(yǎng)失敗的可能性。

3.3 保存條件對(duì)結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率的影響 經(jīng)檢查，220例結(jié)核菌培養(yǎng)結(jié)果顯示為陽性。將其隨機(jī)分為4組，每組樣本數(shù)是55例。將其置于不同溫度條件下培養(yǎng)。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，樣本保存時(shí)間與保存溫度對(duì)于這220例已經(jīng)檢測(cè)為陽性的痰液標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果有明顯影響。（1）溫度固定時(shí)對(duì)比：如在溫度是-18℃時(shí)，樣本保存時(shí)間不同時(shí)，標(biāo)本檢測(cè)的陽性率雖有一定差異，但結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而在在4℃、25℃及30℃時(shí)，以溫度為固定值進(jìn)行對(duì)比，各固定溫度值不同保存時(shí)間對(duì)比顯示，除了保存0 d、3 d及7 d時(shí)樣本陽性率不同溫度組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而在21 d與28 d時(shí)，隨著保存溫度的升高，樣本陽性率呈下降趨勢(shì)，甚至在28 d時(shí)，30℃組樣本的陽性率已降低至0%。（2）保存時(shí)間為固定值的對(duì)比：將時(shí)間作為固定兩，對(duì)不同保存溫度對(duì)樣本陽性率結(jié)果進(jìn)行分析，可以發(fā)現(xiàn)，保存時(shí)間相同時(shí)，隨著保存溫度的升高樣本陽性率呈降低趨勢(shì)，尤其是在21 d與28 d時(shí)比較明顯。同時(shí)，有研究資料表明[8]，痰液標(biāo)本中其他類型的細(xì)菌會(huì)隨著樣本保存時(shí)間時(shí)間的延長(zhǎng)以及保存溫度的增加，且結(jié)核菌的數(shù)量會(huì)逐步減少，從而進(jìn)一步加重了痰液樣本污染情況，最終造成樣本結(jié)核菌陽性檢出率下降。綜上所述，痰液性狀及保存條件會(huì)對(duì)結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率造成較大影響，所以在進(jìn)行培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，可針對(duì)性的選擇適宜性狀的痰液并于合適溫度條件下短時(shí)間內(nèi)保存并進(jìn)行接種培養(yǎng)，能夠有效提升結(jié)核菌陽性檢出率，便于臨床指導(dǎo)用藥。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.25.040

江西 334000 上饒市疾病預(yù)防控制中心 （鄭瑤）