彭麗君，于菊霞（西平縣畜牧局，河南，西平　462100）

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松針對免疫雛雞新城疫抗體效價的影響

彭麗君，于菊霞
（西平縣畜牧局，河南，西平462100）

摘要：通過對200只健康羅曼公雞隨機分組飼喂和煎劑飲水松針粉試驗，測定雞血清新城疫抗體水平，探討松針對免疫雛雞新城疫抗體效價的影響。結果表明：不同劑量不同飼喂方法的松針在一定時期可以協(xié)同疫苗增強特異性免疫。

關鍵詞：松針；雛雞；新城疫抗體效價

1　材料與方法

1.1試驗動物

1日齡經(jīng)馬立克疫苗免疫后的羅曼公雞共200只。

1.2主要藥品試劑

手工采摘新鮮的油松松針，新支二聯(lián)凍干苗和新支二聯(lián)油苗，新城疫檢測抗原，PBS液。

1.3試驗動物的分組與處理

200只健康羅曼公雞，隨機分成4組，其中組Ⅰ、組Ⅱ、組Ⅲ為試驗組，組Ⅳ為對照組。飼養(yǎng)至14日齡全部用新支二聯(lián)凍干苗（0.2 ml/只）滴鼻點眼首免、28日齡每羽肌肉注射0.3 ml新支二聯(lián)油苗進行二免。在首次免疫的同時，組Ⅰ、組Ⅱ分別按松針粉0.5 g/只、1.0 g/只的劑量混入飼料飼喂；組Ⅲ按照0.5 g/只的劑量做煎劑飲水飼喂；組Ⅳ正常飲水喂料作對照組。4個組全部采用統(tǒng)一的飼養(yǎng)管理標準，環(huán)境條件相同。

分別于首次免疫后的第7天（D7）、第14天（D14）、第21天（D21）、第28天（D28）和第35天（D35），每組隨機抽取4羽，心臟采血0.2ml，分離血清，4℃冰箱靜置30 min，析出血清備用。

1.4雞血清新城疫抗體效價檢測

用β一微量法測定雞新城疫血凝抑制（HI）抗體效價。用Log2表示。

1.4.11%紅細胞懸液制備

先用滅菌注射器吸取3.8%檸檬酸鈉溶液(其量為所需血液量的1/5)，取一只健康雞，心臟采血5 ml，存于離心試管中。加PBS液為抗凝血的2倍，以3 000轉(zhuǎn)/分，離心3 min，棄去上清液，如此反復洗滌3次，最后取下層壓積紅細胞，用PBS液調(diào)節(jié)紅細胞懸液濃度為1%。

1.4.24單位抗原的滴定

在96孔微量血凝板上，從左到右每孔各加25 μl PBS液，另加一排作為重復。再向每排的第1孔加入25 μl新城疫病毒，依次向后倍比稀釋直至第11孔，第12孔作為對照，無抗原液；然后向每孔加入25 μl 1%雞紅細胞懸液，將微量血凝板在微量振蕩器上震動混勻后置于37℃溫箱中感作30～40 min，待對照孔紅細胞已經(jīng)沉淀時觀察結果。

結果判定，孔內(nèi)紅細胞呈網(wǎng)狀為凝集，呈圓點狀沉于孔底為沉淀。以100%凝集的抗原最大稀釋孔為該抗原血凝價，即一個凝集單位；從該孔向前移2孔的抗原稀釋度作為4單位抗原的稀釋度。

1.4.34單位抗原的標定

由于抗體的測定是每隔7天進行一次，為了防止試驗過程中誤差的產(chǎn)生，故每次試驗時要對已配好的4單位抗原重新進行標定。標定過程如下：在96孔微量血凝板上，從左到右每孔各加25 μl PBS液，另加3排作為重復，并設第1孔和第6孔分別為陽性和陰性對照組。再向每排的第1孔加入配好的4單位抗原25 μl，從第2孔依次向后倍比稀釋直至第5孔；然后向每孔加入25 μl 1%雞紅細胞懸液，將微量板在微量振蕩器上震動混勻后置于37℃溫箱中感作20 min。如果前3孔有的不是100%凝集，說明抗原濃度小了，再加些許抗原。若4、5孔還未完全沉淀，則抗原濃度高了，應加些許稀釋液，再進行校正，過程同上。

1.4.4樣品的檢測

在96孔微量血凝板上，從左到右每孔各加25μl PBS液，再向每排的第1孔加入25 μl的待檢血清，依次向后倍比稀釋直至第11孔，第12孔作為對照。然后向每孔加入25 μl 4單位抗原，在微量振蕩器上振蕩混勻后置于溫箱中感作20 min。取出后向每孔加入25 μl 1%雞紅細胞懸液，同時設陽性血清、陰性血清及空白對照孔。振蕩混勻后置于37℃溫箱中感作30 min，待對照孔紅細胞已經(jīng)沉淀時觀察結果。

結果判定，以100%抑制凝集的血清最大稀釋度為該血清的抗體滴度，每組以4只雞血清抗體滴度的平均值表示該組的抗體水平。

1.5數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)以Means±SD（平均數(shù)±標準偏差）表示，用SPSS軟件進行Duncan’s Multiple Range Test（即多組樣本間差異顯著性分析），從而對抗體變化的情況進行比較。

2　結果

經(jīng)SPSS處理后的結果如下表所示:首次免疫后的第7天，組Ⅰ和組Ⅲ的抗體效價與對照組差異顯著（P＜0.05），但試驗組抗體效價略低于對照組；第14天、第21天和第35天，各組的抗體效價差異均不顯著（P＞0.05）；僅在免疫后的第28天，試驗組Ⅱ的抗體效價水平顯著高于對照組Ⅳ（P＜0.05）。

表　各組血清ND-HI抗體效價的動態(tài)變化

3　討論與分析

體液免疫是機體抗御傳染病的主要因素之一，抗體效價的高低直接反應機體的體液免疫狀態(tài)。微量血凝抑制法是一種簡單方便的方法，因此該試驗采用檢測抗體效價作為評價免疫增強劑增強疫苗的免疫作用的指標。體液免疫是由B淋巴細胞介導通過分泌抗體而進行的免疫應答。新城疫抗體水平是反映新支二聯(lián)凍干苗和油苗免疫后雞特異性體液免疫功能的指標。

測定結果顯示，在首次免疫后的第7天，組Ⅰ和組Ⅲ的抗體效價與對照組差異顯著，且各組的抗體效價水平均比較低；第14天，各組的抗體效價差異雖不顯著，但抗體水平開始有所上升，而且松針飲水組的抗體效價水平上升幅度較其他3組快。第21～35天，各組的抗體效價均達到高峰期，且在免疫后的第28天，試驗組Ⅱ的抗體效價明顯高于對照組。第28～35天，各組的抗體效價雖不顯著，但組Ⅰ和組Ⅱ的抗體水平略高于對照組。

陳寶江、王建輝（2000）［1］發(fā)現(xiàn)，在雛雞日糧中添加3%松針粉，結果表明，試驗組較對照組：新城疫（ND）抗體效價水平平均增加了24.30%，差異極顯著（P＜0.01），且試驗組ND抗體峰值高，高峰（>5 Log2）維持時間為12 d，極顯著高于對照組的3 d（P<0.01），表明松針粉能提高ND抗體水平，增強機體特異性免疫功能，有效抵制新城疫的發(fā)生，試驗結論與該文中所得結論部分相似。兩者出現(xiàn)相似點的原因可能是：由于松針粉中含有大量的VE［2］，VE作為免疫佐劑能增加體液免疫反應，可提高輔助T細胞數(shù)量，使機體由合成IgG為主轉(zhuǎn)為合成IgM為主，還可減少血液皮質(zhì)酮（免疫抑制劑）含量；而且松針粉中的VC［3］，可羥化分解家禽應激狀態(tài)下產(chǎn)生的皮質(zhì)酮，進而血清ND抗體水平較對照組有所提高。兩者出現(xiàn)不同點的原因可能是：不同的雛雞品種對松針的敏感性不同，進而使新城疫抗體效價的提高幅度和維持時間也不同；天氣的多變，室內(nèi)溫度的高低，飼養(yǎng)方式的不同等對雞都產(chǎn)生了一定的影響，進而對雞的采食量也產(chǎn)生了影響；而且，該試驗過程中雛雞日糧分別添加了0.5 g/只和1.0 g/只的松針粉，對于中草藥來說，不同的飼喂劑量對家禽的影響差異是很大的，進而導致了該試驗的結果與研究結果的差異。綜上可得：合適劑量的松針煮水和松針粉飼喂雛雞均能增強雛雞的特異性免疫應答反應，提高疫苗的免疫效力，松針煮水有可能更利于機體吸收，進而使抗體上升速度快。但由于實驗室空間條件有限，試驗群體較少，且松針煮水和松針粉的飼喂劑量只有0.5 g/只和1.0 g/只的添加水平，對其最佳飼喂劑量，有待進一步的研究。

參考文獻：

［1］陳寶江，王建輝，李樹友，等.松針粉對雛雞生長及免疫力影響的研究［J］.科技簡報，2000，（4）：28-30.

［2］張履忠.維生素E對畜禽免疫力的影響［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2007，（20）.

［3］董曉玲.免疫應激對肉仔雞血液指標及肉品質(zhì)的影響［D］.中國農(nóng)業(yè)科學院，2007.

信息博覽

中圖分類號：S859.79

文獻標識碼：B

文章編號：1004-5090（2016）01-0013-02

收稿日期：（2015-11-11）