何小英　郭惠蘭　黃艷萍

1.廣東省翁源縣人民醫(yī)院，廣東　翁源　512600；2.廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院，廣東　廣州　510520

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芒毛苣苔醇提取物體外抗氧化活性研究

何小英1郭惠蘭1黃艷萍2

1.廣東省翁源縣人民醫(yī)院，廣東翁源512600；2.廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院，廣東廣州510520

【摘要】目的：測(cè)定芒毛苣苔醇提物的體外抗氧化活性。方法：采用DPPH、ABTS和羥基(·OH)氧化自由基清除試驗(yàn)對(duì)芒毛苣苔乙醇提取物的體外抗氧化活性進(jìn)行研究。結(jié)果：芒毛苣苔乙醇提取物具有較強(qiáng)的清除DPPH、ABTS和·OH氧化自由基能力。結(jié)論：芒毛苣苔具有較好的抗氧化活性。

【關(guān)鍵詞】芒毛苣苔；抗氧化；活性

芒毛苣苔是苦苣苔科植物芒毛苣苔AeschynanthusbracteatusWall ex A DC.的地上部分，又名石榕、大葉榕藤、石壁風(fēng)、牛奶樹。主要分布于西藏、云南、廣西、廣東、臺(tái)灣、四川等地，生于山谷林中或溪邊石上，海拔300～1300米。芒毛苣苔性平，味甘、淡[1-2]，廣東、廣西民間用于治療用于風(fēng)濕骨痛、跌打損傷、腎虛、慢性肝炎等癥[3]。但目前尚未芒毛苣苔的藥理活性的報(bào)道。研究采用體外試驗(yàn)法對(duì)芒毛苣苔的抗氧化活性進(jìn)行研究，為探索芒毛苣苔的生理活性機(jī)制及進(jìn)一步開發(fā)其藥用價(jià)值提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1儀器與材料

1.1儀器FA2204B電子天平(上海精科天美科學(xué)儀器有限公司)；DG5033A型酶標(biāo)儀(上海精密儀器儀表有限公司)；Finnpipette精密單通道加樣器(賽默飛世爾科技公司)。

1.2試劑1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH，上海源葉生物科技有限公司)、2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)、過硫酸鉀、無水乙醇、二甲亞砜(DMSO)、維生素C等試劑均為分析純。

1.3材料芒毛苣苔藥材2013年采集于廣東省翁源縣，經(jīng)中國科學(xué)院華南植物園葉華谷研究員鑒定為苦苣苔科植物芒毛苣苔Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC的地上部分。常溫陰干，60℃干燥后，粉碎過60目篩備用。

2方法

2.1樣品制備稱取芒毛苣苔粗粉100g，用80%乙醇加熱回流提取2次，每次2h。合并2次提取液，60℃減壓濃縮干燥，得芒毛苣苔藥材提取物14g。

2.2清除DPPH自由基試驗(yàn)[4]用無水乙醇作為溶劑，配制DPPH溶液，濃度為0.45mg/ml的溶液，置于棕色瓶中備用。用DMSO作為溶劑配制芒毛苣苔提取物濃度為1mg/ml的貯備液，使用前用DMSO稀釋。將不同濃度的樣品溶液0.1ml置于96孔板中，然后再加入0.1ml無水乙醇，再加入0.1ml DPPH溶液，震蕩混勻。于25℃下反應(yīng)30min，于517nm處測(cè)定得樣品溶液吸光度(A1)；用無水乙醇代替樣品，依次加入與樣品溶液測(cè)定相同量的DPPH溶液，其他試劑量不變，測(cè)定得空白對(duì)照吸光度(A0)；用0.1mL無水乙醇代替DPPH溶液加入樣品溶液中，測(cè)得樣品本底吸光度(A2)，每個(gè)樣品3個(gè)重復(fù)，取平均值，以維生素C作陽性對(duì)照，按下面公式計(jì)算芒毛苣苔醇提物的清除率，并計(jì)算IC50值。

清除率(%)=[A0-(A1-A2)]/A0×100%

2.3清除ABTS自由基試驗(yàn)[4]將7mmol/L的ABTS溶液5ml和140mmol/L的過硫酸鉀溶液88ml混合，在室溫、避光條件下靜置12h，制成ABTS貯備液，使用前再用無水乙醇稀釋成工作液，使用期間要求其在734nm處的吸光度為(0.5±0.02)。

用DMSO作為溶劑，配制成芒毛苣苔提取物為1mg/ml樣品貯備液。使用前用DMSO稀釋成一系列稀釋成不同濃度的樣品溶液。向96孔板中分別加入10μl上述樣品溶液，然后再加入90μl無水乙醇，再加入100μl的ABTS工作液，至振蕩器上震蕩混勻，在30℃下反應(yīng)6min，于734nm處測(cè)定樣品溶液吸光度(A1)，用無水乙醇替代樣品溶液改為加入其他試劑量不變，測(cè)定得空白對(duì)照吸光度(A0)；用100μl無水乙醇代替ABTS工作液，測(cè)得樣品本底吸光度(A2)，每個(gè)樣品3個(gè)重復(fù)，取平均值，以維生素C作陽性對(duì)照，按上述公式計(jì)算芒毛苣苔提取物的清除率，并計(jì)算IC50值。

2.4清除羥基自由基(·OH)試驗(yàn)[5]精密量取芒毛苣苔醇提取物溶液0.1ml置于96孔板中，依次加入8.8mmol/L H2O20.1ml、9mmol/L FeSO40.1ml、9mol/L水楊酸-乙醇溶液0.1ml，于37℃震蕩反應(yīng)30min，用無水乙醇替代樣品溶液改為加入其他試劑量不變，測(cè)定得空白對(duì)照吸光度(A0)；用0.1ml無水乙醇代替水楊酸-乙醇溶液，測(cè)得樣品本底吸光度(A2)，每個(gè)樣品3個(gè)重復(fù)，取平均值，以維生素C作陽性對(duì)照，按上述公式計(jì)算芒毛苣苔提取物的清除率，并計(jì)算IC50值。

2.5數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示，用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果

3.1芒毛苣苔提取物清除DPPH自由基能力由表1、圖1可知，芒毛苣苔提取物在0.625～20μg/ml范圍內(nèi)抗氧化活性隨濃度升高而升高，在1.25～10μg/ml范圍內(nèi)上升趨勢(shì)非常明顯。芒毛苣苔提取物清除DPPH自由基IC50值明顯小于對(duì)照維生素C，說明芒毛苣苔提取物具有良好的清除DPPH自由基能力。

表1　芒毛苣苔提取物對(duì)自由基清除活性 ±s，n=3)

樣品DPPH清除能力IC50/μg/mlABTS清除能力IC50/μg/ml羥基自由基(·OH)清除能力IC50/μg/ml芒毛苣苔提取物4.05±0.13*3.65±0.14*75.43*維生素C11.45±0.2914.76±0.09117.65

注：與維生素C組比較，*P<0.05。

3.2芒毛苣苔提取物清除ABTS自由基能力由表1、圖2可知，在0.625～20μg/ml內(nèi)芒毛苣苔提取物清除ABTS自由基活性能力隨濃度升高而升高;在2.5～5μg/ml范圍內(nèi)上升趨勢(shì)非常明顯。在5～20μg/ml范圍內(nèi)芒毛苣苔提取物清除ABTS自由基活性明顯高于陽性對(duì)照藥維生素C的活性。芒毛苣苔提取物清除ABTS自由基IC50值明顯小于對(duì)照維生素C，說明芒毛苣苔提取物具有良好的清除ABTS自由基能力。

3.3芒毛苣苔提取物清除羥基自由基(·OH)能力由表1、圖3可知，芒毛苣苔醇提取物在較低濃度下表現(xiàn)出較強(qiáng)的清除·OH的能力。其IC50約為75.43μg/ml，當(dāng)濃度達(dá)到126.87μg/ml時(shí)，對(duì)·OH的清除能力達(dá)到最大值。芒毛苣苔提取物清除·OH自由基IC50值明顯小于對(duì)照維生素C，說明芒毛苣苔提取物具有良好的清除·OH自由基能力。

4討論

苦苣苔科Gesneriaceae全世界有150屬3700多種，我國有58屬(其中27屬為中國特產(chǎn))，約463種。芒毛苣苔在我國主要分布在西藏、貴州、云南、廣西、四川及廣東省區(qū)的熱帶及亞熱帶丘陵地帶，云南等省區(qū)少數(shù)民族間廣泛用于治療各種炎癥、咳喘、瘡癤、風(fēng)濕、骨折、燙傷、蛇蟲咬傷及婦科等疾病，療效顯著[6-7]。

正常機(jī)體內(nèi)會(huì)應(yīng)用抗氧化酶體系與代謝合成的非酶體系化合物來清除與修復(fù)自由基，使自由基處于一種動(dòng)態(tài)的平衡[6]。當(dāng)防御體系出現(xiàn)故障或者自由基增多時(shí)，自由基產(chǎn)生和清除的平衡就會(huì)被破壞，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞器的生物學(xué)特征改變，使細(xì)胞衰老，引發(fā)各種炎癥、惡性腫瘤等疾病[8-9]。因此，尋找有效、毒副作用小的自由基清除劑和抗氧化劑十分必要。研究采用DPPH自由基、清除ABTS自由基的和清除羥基自由基(·OH)三種體系對(duì)芒毛苣苔醇提取物進(jìn)行體外抗氧化試驗(yàn)，結(jié)果顯示，芒毛苣苔藥材對(duì) DPPH，ABTS，·OH均具有一定的清除能力，其中對(duì) DPPH，ABTS，·OH的IC50分別為4.05、3.65、75.43 μg/ml，表明在一定濃度范圍內(nèi)，隨著芒毛苣苔醇提物濃度的增加抗氧化活性增加。

參考文獻(xiàn)

[1]葉華谷,曾飛燕,葉育石,等.華南藥用植物[M]. 武漢：華中科技大學(xué)出版社,2013:357.

[2]謝宗萬.全國中草藥匯編[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2000:180-181.

[3]白貞芳,王曉琴,肖培根,等.廣西苦苣苔科植物傳統(tǒng)藥物學(xué)調(diào)查[J].中藥材,2012,(1):20-23.

[4]李福明,汪洋,韋敏. 刺梨葉醇提物體外抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性研究[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2015,(6):685-688.

[5]王有瓊,馬李一,張重權(quán),等.微波輔助提取印楝葉多酚及其體外抗氧化活性研究[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2015,(11):1319-1323.

[6]李振宇,王印政.中國苦苣苔科植物[M].鄭州:河南科學(xué)技術(shù)出版社,2004

[7]韋毅剛,鐘樹華,文和群.廣西苦苣苔科植物區(qū)系和生態(tài)特點(diǎn)研究[J].云南植物研究,2004,26(2):173

[8]李興泰,陳瑞,高明波.連翹葉水提物保護(hù)線粒體及抗衰老研究[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2009,28(6):840-844.

[9]Wickens A P.Ageing and the free radical theory[J].Respir Physiol,2001,128:379-391.

Study on in Vitro Antioxidant Activities of Ethanol Extract fromAeschynanthusbracteatusWall ex A DC

HE Xiaoying1GUO Huilan1HUANG Yanping2

1.Wengyuan People’s Hospital,Guangdong ,Wengyuan 512600 China;2.Guangdong Food and Drug vocational college,Guangzhou 510520,China

Abstract:Objective To study in vitro antioxidant activity of ethanol extract from Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC. MethodsAntioxidant and ree radical scavenging activities of ethanol extract of Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC. were determined by DPPH and ABTS and ·OH radical scavenging assay. Results The ethanol extract of Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC. showed significant DPPH and ABTS radical scavenging activities.Conclusion Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC.show significant antioxidant

Key words:Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC.; antioxidant；activity

基金項(xiàng)目：韶關(guān)市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014CX/K288)；廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013B020311013)。

作者簡介：何小英，主管藥師，從事醫(yī)院藥學(xué)工作。E-mail：hexiaoying1007@163.com

【中圖分類號(hào)】R285.5

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2016)09-0033-02

(收稿日期：2016.03.09)