紀(jì)軍生，陸云峰，趙亞萍

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·臨床經(jīng)驗·

甲狀腺微小癌Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白表達分析

紀(jì)軍生，陸云峰，趙亞萍

目的探討半乳糖凝集素3(Galectin-3)、細胞角蛋白19(Cytokeratin 19, CK19)、分化抗原簇56(cluster of differentiation 56, CD56)及甲狀腺過氧化物酶(thyroid peroxidase, TPO)蛋白在甲狀腺微小癌(thyroid microcarcinoma, TMC)中的表達特征。方法對手術(shù)切除的32例TMC病理形態(tài)學(xué)特征及Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白免疫組化檢測結(jié)果進行回顧性分析。結(jié)果32例TMC中，甲狀腺乳頭狀微小癌26例，濾泡型微小癌6例；Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白表達陽性率分別為100%、100%、9.38%和6.25%。結(jié)論采用免疫組化技術(shù)同時檢測Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白表達，可提高TMC檢出率，有效避免漏診。

甲狀腺微小癌；半乳糖凝集素3；細胞角蛋白19；分化抗原簇56；甲狀腺過氧化物酶；免疫組織化學(xué)

甲狀腺微小癌(thyroid microcarcinoma, TMC)是腫瘤直徑≤1 cm的甲狀腺癌。因病灶微小，無明顯臨床癥狀，TMC極易被臨床醫(yī)師及病理醫(yī)師忽視，導(dǎo)致漏診。本文對TMC中半乳糖凝集素3(Galectin-3)、細胞角蛋白19(Cytokeratin 19, CK19)、分化抗原簇56(cluster of differentiation 56, CD56)及甲狀腺過氧化物酶(thyroid peroxidase, TPO)的表達特征及其在TMC病理診斷中的價值進行了研究。

1　對象與方法

1.1對象2003年1月-2014年12月手術(shù)切除的TMC 32例，男5例，女27例，男女之比為1：5.4；年齡18～68歲，平均44.2歲；左側(cè)13例，右側(cè)19例；術(shù)前臨床診斷：甲狀腺腺瘤9例，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫17例，待查6例。

1.2方法手術(shù)切除標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定。查見病灶或可疑病灶取材時，每隔2～3 mm書頁狀切開，仔細觀察及觸摸，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4 μm厚切片，HE染色，光鏡觀察。同時采用免疫組化Envision兩步法檢測Galectin-3、CK19、TPO及CD56蛋白表達，試劑購自福州邁新公司，所有操作嚴(yán)格按照說明書進行，簡述如下：石蠟切片脫蠟、水化、置于檸檬酸抗原修復(fù)液中，采用高壓鍋進行抗原修復(fù)，自然冷卻10 min后，流水沖洗，去除水份，PBS沖洗3 min×2次，分別滴加Galectin-3、CK19、TPO及CD56單克隆抗體，4 ℃過夜，PBS沖洗×2次，滴加辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)標(biāo)記的二抗，室溫孵育15 min，PBS沖洗×2次，去除PBS，滴加新鮮配制的DAB顯色液，室溫避光直到顯色至預(yù)期深淺，自來水沖洗終止顯色，蘇木素再染，PBS返藍，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

1.3免疫組化結(jié)果判定光鏡下觀察著色程度并計數(shù)陽性細胞百分?jǐn)?shù)，每張切片5個高倍視野，陽性細胞百分?jǐn)?shù)的平均數(shù)為該切片百分?jǐn)?shù)結(jié)果，按陽性細胞數(shù)所占百分比并結(jié)合著色強度進行分級：著色細胞≤10%為(-)，11%～25%為(+)，26%～50%為(++)，﹥50%為(+++)。

2　結(jié)　果

2.1肉眼觀察32例TMC中28例為單發(fā)癌結(jié)節(jié)，4例為多發(fā)癌結(jié)節(jié)(3例2個、1例3個)，結(jié)節(jié)直徑0.1～0.8 cm，有或無包膜，切面灰白、灰黃色，實性，質(zhì)地中等，有的呈放射狀瘢痕樣、細顆粒狀粗糙及絨毛狀外觀，部分有砂礫感，邊界不清。

2.2鏡檢本組26例呈典型的乳頭狀癌組織結(jié)構(gòu)及細胞形態(tài)特征(圖1a)，瘤組織為具有纖維血管軸心的真性乳頭，乳頭細長或短鈍，長者有復(fù)雜的分支，多為2-3級或多級分支乳頭，乳頭表面被覆單層或多層柱狀上皮，圓形或橢圓形、異形，可見毛玻璃核、核溝、核重疊，少數(shù)見嗜酸性核內(nèi)包涵體，乳頭中心為纖維脈管束，浸潤性生長，其中15例侵犯包膜向周圍結(jié)節(jié)性甲狀腺腫或甲狀腺腺瘤組織中微浸潤，所有病例均見促纖維間質(zhì)反應(yīng)。6例為濾泡型微小癌，癌細胞呈濾泡樣、腺樣、線條狀及流水狀排列，個別濾泡腔內(nèi)有淡紅染類膠質(zhì)，無乳頭狀結(jié)構(gòu)，但具有上述乳頭狀癌細胞核的特征，呈浸潤性生長，均見突破包膜向周圍結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織中微浸潤，間質(zhì)纖維組織增生，呈玻璃樣變性(圖1b)；32例TMC中合并有結(jié)節(jié)性甲狀腺腫25例，甲狀腺腺瘤6例，喬本病1例。

2.3Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白表達Galectin-3主要表達于細胞質(zhì)，細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒(圖1c)，CK19表達于細胞膜及細胞質(zhì)，其內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒(圖1d)，32例TMC中，Galectin-3、CK19均有表達，表達強度為：+～+++。CD56主要表達于細胞膜(圖1e)，伴或不伴有細胞質(zhì)表達，本組3例陽性，其中表達強度“+”2例，“++”1例；TPO位于細胞質(zhì)(圖1f)，2例表達弱陽性，均為“+”。

a:乳頭狀癌(HE ×100)，短鈍乳頭，核重疊，浸潤生長；b：乳頭狀癌濾泡亞型(HE ×100)癌細胞呈濾泡狀排列，細胞核深染，異型；c：Galectin-3蛋白(Envision法 ×100)，主要表達于細胞質(zhì)；d：CK19蛋白(Envision法 ×100)，主要表達于細胞膜；e：CD56蛋白表達陰性(Envision法 ×100)；f：TPO蛋白表達陰性(Envision法 ×100)圖1　Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白在TMC中的表達

3　討　論

3.1TMC臨床特征甲狀腺癌是內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，每年新發(fā)病例占所有腫瘤的1%～5%[2-3]，我國2012年腫瘤登記年報顯示，甲狀腺癌發(fā)病率6.6/10萬。近年來，全球甲狀癌發(fā)病率呈上升趨勢，北京市2010年發(fā)病率比1995年上升了518.8%，世界衛(wèi)生組織公布的全球癌癥報告指出甲狀腺癌新發(fā)病例中>50% 為TMC。TMC手術(shù)治療效果確切，遠期復(fù)發(fā)率低于8%。TMC好發(fā)于青中年，女性明顯多于男性[8-9]，本組女性患者占84.4%，與文獻一致。女性患者TMC患病率的確切原因目前尚不清楚，可能與性激素水平有關(guān)。TMC腫瘤體積較小，觸診困難，患者通常無明顯癥狀，雖然現(xiàn)在影像儀器分辨率有了很大的進步，但臨床的漏診率仍然較高，部分病例在出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠處轉(zhuǎn)移方才就診，更多的病例是在其他甲狀腺疾病的手術(shù)中，進行病理組織學(xué)檢查時得以發(fā)現(xiàn)，本組32例術(shù)前診斷均不明確，術(shù)中快速冰凍及常規(guī)病理切片檢查時才發(fā)現(xiàn)其微小癌組織學(xué)特征并得以明確診斷。

3.2TMC組織學(xué)特征TMC主要包括乳頭狀微小癌，濾泡型微小癌，髓樣型微小癌極為少見，乳頭狀微小癌最為常見[10]。鏡下乳頭狀癌乳頭分支多且細，乳頭上皮的核呈毛玻璃樣外觀，體積大，染色淡，外形不規(guī)則，核重疊，深的核溝，細胞質(zhì)陷入形成假包涵體等核的特征性改變，乳頭的中央為纖維血管軸心，間質(zhì)纖維化，浸潤性生長。在乳頭狀TMC的病理診斷中，必須做好與良性乳頭狀增生的鑒別：良性乳頭狀增生通常沒有明顯的纖維血管軸心，乳頭間質(zhì)可見水腫及濾泡結(jié)構(gòu)，乳頭被覆單層扁平或立方上皮，核較小，外形規(guī)則。濾泡型TMC由大小不等的濾泡構(gòu)成，此型雖缺乏乳頭，但卻有乳頭狀癌核特征改變，腫瘤呈浸潤性生長，本組6例濾泡型TMC中有1例腫瘤細胞呈蘑菇狀微侵出于包膜外。

3.3Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白表達與TMCGalectin-3是凝集素家族中的一員，不僅具有調(diào)節(jié)細胞生長，抑制細胞凋亡的作用，而且參與細胞間黏附和新生血管的形成，與腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。近年來，Galectin-3在甲狀腺疾病發(fā)病機制中作用受到廣泛重視，并且越來越多被應(yīng)用到疾病的診斷和鑒別診斷中[11]。呂云福等[12]研究發(fā)現(xiàn)甲狀腺乳頭癌Galectin-3陽性率83.03%，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫為19.35%，而正常甲狀腺組織均為陰性。鄧敏等[13]報道甲狀腺乳頭癌Galectin-3陽性率98.5%，其中TMC陽性率100%。本組32例TMC中，Galectin-3表達均為陽性。Galectin-3在甲狀腺良性病變中不表達或呈極低水平表達，而在甲狀腺惡性腫瘤中常表達陽性的特征，提示其在甲狀腺惡性病變診斷中的重要價值。CK19是一種低分子量角蛋白，為惡性腫瘤細胞中間絲的組成成分，已證實其在頭頸部鱗癌、食管癌等腫瘤性疾病診斷中具有重要價值。研究發(fā)現(xiàn)，甲狀腺惡性腫瘤中CK19常表達陽性，而橋本甲狀腺炎、甲狀腺腺瘤多不表達或極低表達[13-15]，我們的結(jié)果顯示32例TMC中， CK19均為陽性。目前，CK19常與Galectin-3聯(lián)合檢測應(yīng)用于甲狀腺惡性疾病的鑒別診斷，可有效提高診斷的靈敏性與特異性[13-14]。CD56屬于免疫球蛋白超家族成員，主要參與神經(jīng)外胚層來源的腫瘤(如視網(wǎng)膜母細胞瘤、星形細胞瘤、神經(jīng)母細胞瘤等)、內(nèi)分泌腫瘤和 NK/T 細胞淋巴瘤的發(fā)生機制，CD56在甲狀腺乳頭狀癌中常常表達缺失，陽性表達多位于腫瘤浸潤邊緣。黃悅等[16]報道，49例甲狀腺乳頭狀癌中僅1例CD56彌漫性表達，且位于腫瘤與正常組織交界處，表達程度極弱。本組TMC中，CD56陽性率為9.4%，表達特征與文獻一致[17]。CD56在甲狀腺惡性病變中雖然也有表達，但多為散在局灶性，且為細胞內(nèi)彌漫表達，而其在非腫瘤性甲狀腺病變主要表達于細胞膜。TPO是一種與甲狀腺素合成相關(guān)的酶，由甲狀腺濾泡細胞合成，在正常甲狀腺組織及甲狀腺良性腫瘤中高表達，甲狀腺惡性腫瘤通常表達缺失或極低表達[13-14]。本組32例中，只有2例弱陽性表達。在甲狀腺良、惡性疾病的診斷和鑒別診斷中，同時檢測甲狀腺組織中CD56及TPO蛋白可有效提高病理診斷的準(zhǔn)確性。

綜上所述，TMC 組織中Galectin-3、CK19蛋白呈陽性表達，而CD56及TPO蛋白表達多為陰性，在進行甲狀腺病灶病理形態(tài)學(xué)檢查時，如果采用免疫組化技術(shù)同時檢測Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白表達，可提高TMC檢出率，有效避免漏檢。

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(本文編輯：黃攸生)

223001江蘇淮安,解放軍82醫(yī)院

趙亞萍，E-mail：XKH@njmu.edu.cn

R736.1

B

10.3969/j.issn.1672-271X.2016.03.024

2016-03-20；

2016-05-07)

引用格式：紀(jì)軍生，陸云峰，趙亞萍,等.甲狀腺微小癌Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白表達分析.東南國防醫(yī)藥，2016,18(3):303-305.