張秀慧，常福厚,3Δ，白圖雅,3，呂曉麗,3，高峰，張夢(mèng)迪

(1. 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；2. 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)新藥安全評(píng)價(jià)研究中心，內(nèi)蒙古呼和浩特 010110；3. 內(nèi)蒙古自治區(qū)新藥篩選工程研究中心，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

通心降脂滴丸對(duì)犬冠脈結(jié)扎致心肌缺血的保護(hù)作用

張秀慧1,2，常福厚1,2,3Δ，白圖雅1,2,3，呂曉麗1,2,3，高峰2,3，張夢(mèng)迪1,2

(1. 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；2. 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)新藥安全評(píng)價(jià)研究中心，內(nèi)蒙古呼和浩特 010110；3. 內(nèi)蒙古自治區(qū)新藥篩選工程研究中心，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

目的 觀察通心降脂滴丸對(duì)犬冠脈結(jié)扎致心肌缺血的保護(hù)作用。方法 取25只健康Beagle犬，雌雄兼用，按體重隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血模型組、復(fù)方丹參滴丸組(陽(yáng)性對(duì)照組)，通心降脂滴丸低、高劑量組，每組5只。采用冠脈結(jié)扎方法造成Beagle犬急性心肌缺血，研究通心降脂滴丸對(duì)心肌缺血后心肌缺血范圍(N-ST)、心肌缺血程度(Σ-ST)和血清中乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)活力以及心肌組織中丙二醛(MDA)含量的影響。結(jié)果 與缺血模型組比較，通心降脂滴丸組顯著降低N-ST、Σ-ST，抑制LDH、CK釋放，減少M(fèi)DA含量而提高SOD活力(P<0.05)。結(jié)論 通心降脂滴丸對(duì)缺血心肌具有一定的保護(hù)作用。

通心降脂滴丸；心肌缺血；比格犬

心肌缺血是指心肌的供血量減少或心肌對(duì)氧的需求量增加超過(guò)其最大供血量，從而引起心肌代謝、功能和結(jié)構(gòu)改變[1-2]。冠心病是引起心肌缺血最主要、最常見(jiàn)的病因[3-4]。隨著人民生活水平的提高，目前心肌缺血在我國(guó)的患病率呈逐年上升的趨勢(shì)[5-6]。通心降脂滴丸由丹參、三七、降香等8味中藥材組成，用于緩解胸悶、憋氣、心前區(qū)刺痛等癥狀，臨床上主要用來(lái)治療冠心病、高血脂等疾病。本課題組已報(bào)道通心降脂滴丸具有增加結(jié)扎后冠脈血流量和降低心肌細(xì)胞損傷程度的作用[7]。本文主要通過(guò)觀察通心降脂滴丸對(duì)心肌缺血后N-ST、Σ-ST，血清中LDH、CK、SOD酶活力和心肌組織中MDA含量的變化，探討通心降脂滴丸對(duì)心肌缺血的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：Beagle犬25只，雌雄兼用，體質(zhì)量5～8 kg，由北京瑪斯生物技術(shù)有限公司提供，產(chǎn)品許可證號(hào)：SCXK(京)2011-0003。

1.1.2 藥品與試劑：通心降脂滴丸(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院研制，批號(hào)：20120125，規(guī)格：27 mg/丸)；復(fù)方丹參滴丸(天津天士力制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z10950111，規(guī)格：27 mg/丸)。戊巴比妥鈉(上海西唐生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：wS20060401)；肝素鈉注射液(天津市生物化學(xué)制藥廠，國(guó)藥準(zhǔn)字H12020505)；0.9%氯化鈉注射液(河北天成藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：B11121906)；乳酸脫氫酶試劑盒、肌酸激酶試劑盒、丙二醛試劑盒、超氧化物歧化酶試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)分別為20120601、20120608、20120720和20120720)。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器：呼吸機(jī)(河南輝瑞醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)，型號(hào)：HFS3000)；心外膜電極切換盒(成都泰盟科技有限公司；型號(hào)：XW-3)；冷光單孔手術(shù)照明燈(南寧市三科醫(yī)療器械有限責(zé)任公司，型號(hào)：LG001-Ⅰ型)；精密凈化交流穩(wěn)壓電源(上海全力電器有限公司，型號(hào)：JJW-3KVA)；KL-1型普通手術(shù)臺(tái)(江蘇科凌醫(yī)療器械有限公司，產(chǎn)品編號(hào)：201002102422)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組及給藥：25只比格犬隨機(jī)分為假手術(shù)組，缺血模型組，陽(yáng)性對(duì)照組，通心降脂滴丸低、高劑量組，每組5只。假手術(shù)組、缺血模型組給予等體積的生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組給復(fù)方丹參滴丸0.215 g/kg，低劑量組為通心降脂滴丸0.225 g/kg，高劑量組為通心降脂滴丸0.712 g/kg。所有動(dòng)物分別按各自劑量于手術(shù)前一周開(kāi)始灌胃給藥，1次/d，連續(xù)灌胃給藥7 d，第8 d進(jìn)行試驗(yàn)手術(shù)操作。

1.2.2 動(dòng)物模型制備[8]：取健康Beagle犬稱重后用戊巴比妥鈉(30 mg/kg)麻醉，背位固定于手術(shù)臺(tái)上，手術(shù)區(qū)備皮；連接呼吸機(jī)，左側(cè)第四肋間開(kāi)胸，暴露心臟，剪開(kāi)心包，做心包床；分離冠狀動(dòng)脈左前降支，穿線以備結(jié)扎用；結(jié)扎冠脈，建立Beagle犬急性心肌缺血模型，假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎；縫合心包膜，放置多點(diǎn)固定式心外膜電極，描記心外膜心電圖；待完全結(jié)扎15 min后，經(jīng)胃管給予配制好的等體積的通心降脂滴丸、復(fù)方丹參或生理鹽水，于給藥前及給藥后30、60、90、120 min時(shí)記錄心外膜心電圖；給藥120 min測(cè)定完成以上指標(biāo)后，頸動(dòng)脈取血，分離血清；取下心臟用生理鹽水沖洗。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)：以ST段偏移大于2 mV為缺血判斷標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算心肌缺血范圍(N-ST)，即ST 段偏移的總mV數(shù)及心肌缺血程度(Σ-ST)，即大于2mV的點(diǎn)數(shù)；取頸動(dòng)脈血，分離血清，測(cè)定血清乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)、肌酸激酶(creatine kinase，CK)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活力；摘取心臟，用鹽水沖洗，剔除血管和脂肪，沿冠狀溝切除心房，留下心室，取心尖部心肌組織做勻漿，測(cè)定丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量。

2 結(jié)果

2.1 通心降脂滴丸對(duì)犬冠脈結(jié)扎后心肌缺血程度(Σ-ST)的影響 與假手術(shù)組比較，缺血模型組Σ-ST顯著降低(P<0.05)；與缺血模型組比較，給藥90～120 min，通心降脂滴丸低劑量組Σ-ST顯著降低(P<0.05)，給藥60～120 min，通心降脂滴丸高劑量組Σ-ST顯著降低(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 通心降脂滴丸對(duì)犬冠脈結(jié)扎所致心肌缺血程度影響±s，n=5，mV)

*P<0.05，與假手術(shù)組比較，compared with sham operation group；ΔP<0.05，與缺血模型組相比，compared with ischemia model group

2.2 通心降脂滴丸對(duì)犬冠脈結(jié)扎后心肌缺血范圍(N-ST)的影響 與假手術(shù)組比較，缺血模型組N-ST顯著降低(P<0.05)；與缺血模型組比較，給藥90～120 min，通心降脂滴丸低劑量組N-ST顯著降低(P<0.05)，給藥60～120 min，通心降脂滴丸高劑量組N-ST顯著降低(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 通心降脂滴丸對(duì)犬冠脈結(jié)扎所致心肌缺血范圍影響±s，n=5，point)

*P<0.05，與假手術(shù)組比較，compared with sham operation group；ΔP<0.05，與缺血模型組相比，compared with ischemia model group

2.3 通心降脂滴丸對(duì)犬冠脈結(jié)扎后LDH、CK、SOD活力和MDA含量的影響 與假手術(shù)組比較，缺血模型組LDH、CK釋放顯著增加，心肌MDA含量顯著增高而SOD活力明顯下降(P<0.05)；與缺血模型組比較，通心降脂滴丸能顯著減少LDH、CK釋放，增強(qiáng)SOD活力而降低心肌MDA含量(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 通心降脂滴丸對(duì)酶活力的影響±s，n=5)

*P<0.05，與假手術(shù)組比較，compared with sham operation group；ΔP<0.05，與缺血模型組相比，compared with ischemia model group

3 討論

當(dāng)心肌缺血引起急性心肌缺氧導(dǎo)致心肌細(xì)胞膜損傷時(shí)，在細(xì)胞生化具有明顯變化之前電生理即有相應(yīng)的改變，因此可以利用心外膜心電圖的測(cè)定監(jiān)測(cè)心臟的功能，心外膜電圖上Σ-ST 表示心肌缺血程度，N-ST表示心肌缺血范圍[9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明不同劑量通心降脂滴丸和陽(yáng)性對(duì)照藥復(fù)方丹參滴丸均可顯著改善缺血后的心外膜心電圖異常，減少E-ST和N-ST，且通心降脂滴丸的作用有一定的劑量依賴關(guān)系。高劑量的通心降脂滴丸的作用與丹參滴丸相當(dāng)，提示通心降脂滴丸對(duì)缺血的心肌細(xì)胞具有顯著的保護(hù)作用。LDH和CK存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞胞漿內(nèi)，在正常生理狀態(tài)下這兩種酶不能穿通細(xì)胞膜，但是當(dāng)細(xì)胞受損或死亡時(shí)，LDH和CK從細(xì)胞中釋放出來(lái)[10]，所以檢測(cè)血清中LDH和CK的活力可以反映心肌缺血程度。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示，與缺血模型組比較，不同劑量的通心降脂滴丸和陽(yáng)性對(duì)照藥復(fù)方丹參滴丸均能顯著降低血清中CK、LDH 活力，其中通心降脂滴丸降低CK、LDH 活力的作用有一定的劑量依賴關(guān)系。以上結(jié)果提示通心降脂滴丸可能通過(guò)穩(wěn)定缺血心肌的細(xì)胞膜，減少由心肌缺血導(dǎo)致的心肌細(xì)胞CK、LDH 的溢出而起到心肌保護(hù)的作用，但是其確切的機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。MDA 是心肌損傷釋放的大量氧自由基與脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)產(chǎn)生具有細(xì)胞毒性的物質(zhì)，SOD是抗氧化劑，清除體內(nèi)新陳代謝產(chǎn)生氧自由基的酶，MDA 和SOD 可作為判斷心肌損傷程度的指標(biāo)[11]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與缺血模型組比較，通心降脂滴丸低劑量和高劑量組增強(qiáng)SOD酶活力，并降低心肌中MDA含量。其機(jī)制可能是通心降脂滴丸中的有效成分作用于細(xì)胞膜和血液循環(huán)中的脂質(zhì)，阻礙其發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化，并最終抑制其分解為MDA，保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，減少氧化劑消耗，增加SOD活力，從而保護(hù)血管內(nèi)皮的結(jié)構(gòu)和功能，降低內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，減輕心肌損傷[12]。

通心降脂滴丸的主要成分是丹參、三七、降香、山楂、冰片等8味中藥材。丹參中具有抗心肌缺血作用的是其水溶性成分，主要有丹參素、丹酚酸A、丹酚酸B、原兒茶醛等[13]。研究發(fā)現(xiàn)丹參水提物可明顯降低體內(nèi)MDA含量，提高GSH、SOD 等抗氧化物質(zhì)水平，并且在體內(nèi)，丹酚酸A可降低缺血心肌的LDH外漏[14]。三七的主要活力成分是三七皂苷，可抑制血栓形成，擴(kuò)張外周血管，保護(hù)缺血性心肌細(xì)胞損傷，降低血壓，治療心腦血管疾病[15]。通心降脂滴丸中的8味中藥材產(chǎn)生的藥理作用與本次試驗(yàn)結(jié)果相符，闡明了通心降脂滴丸保護(hù)冠脈結(jié)扎引起的局部缺血心肌的可能作用機(jī)制。

綜上所述，通心降脂滴丸能夠?qū)剐募∪毖鸬男募〖?xì)胞損傷。本次實(shí)驗(yàn)證明了通心降脂滴丸的有效性，為進(jìn)一步研究其藥理作用奠定了基礎(chǔ)。

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(編校：王冬梅)

Protective effects of Tongxin Jiangzhi dropping pills on myocardial ischemia caused by coronary artery ligation in Beagle dogs

ZHANG Xiu-hui1,2, CHANG Fu-hou1,2,3Δ, BAI Tu-ya1,2,3, LV Xiao-li1,2,3, GAO Feng2,3, ZHANG Meng-di1,2

(1. Department of Pharmacology, College of Pharmacy, Inner Mongolia Medical University, Hohhot 010110, China; 2. The Center for New Drug Safety Evaluation and Research of Inner Mongolia Medical University, Hohhot 010110, China; 3. Inner Mongolia Autonomous Region Engineering Research Center of New Pharmaceutical Screening, Hohhot 010110, China)

ObjectiveTo investigate the protective effects of Tongxin Jiangzhi dropping pills on myocardial ischemia caused by coronary artery ligation in Beagle dogs.MethodsTotally 25 Beagle dogs were randomly divided into sham operation group, ischemia model group, compound danshen dropping pills group (positive control group), low dose Tongxin Jiangzhi dropping pills group and high dose Tongxin Jiangzhi dropping pills group, 5 dogs in each group. The ischemic model was made by occluding the anterior descending of the left artery in Beagle dogs, then the areas of the myocardial ischemia and the degree of the myocardial ischemia were calculated. At the same time, the activity of lactate dehydrogenase (LDH), creatine kinase (CK), levels of the superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) content in serum and myocardial tissue were measured. All of them were used to evaluate the protective effects of Tongxin Jiangzhi dropping pills on myocardial ischemia caused by coronary artery ligation in Beagle dogs.ResultsCompared with the ischemia model group, the Tongxin Jiangzhi dropping pills groups showed obvious reduction in Σ-ST, N-ST and notable inhibition in LDH and CK release. Moreover, the MDA content was markedly reduced and the activity of SOD was significantly promoted(P<0.05).ConclusionTongxin Jiangzhi dropping pills has a protective effect on myocardial ischemia induced by coronary artery ligation in Beagle dogs.

Tongxin Jiangzhi dropping pills; myocardial ischemia; Beagle dog

張秀慧，女，碩士在讀，研究方向：生化與分子藥理學(xué)，E-mail：13947123375@163.com；常福厚，通信作者，男，博士，教授，研究方向：生化與分子藥理學(xué)，E-mail：Changfh@sina.com。

R972

A

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.03.07