□ 梁蘭英 許 娟 陳仕超 佛山市三水區(qū)疾病預防控制中心

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Mini VIDAS與國標法檢測金黃色葡萄球菌的比較及其在食物中毒中的應用

□ 梁蘭英 許 娟 陳仕超 佛山市三水區(qū)疾病預防控制中心

摘 要：筆者使用Mini VIDAS方法和GB4789.10-2010第一法檢測金黃色葡萄球菌，并對二者進行比較。GB4789.10-2010第一法（國標法），只檢驗金黃色葡萄球菌，對可疑食物中毒樣品或產(chǎn)生葡萄球菌腸毒素的金黃色葡萄球菌菌株的鑒定，應檢驗其腸毒素。利用Mini VIDAS檢測金黃色葡萄球菌腸毒素與檢測金黃色葡萄球菌致病菌相比較，從檢測時間、檢出率、中毒判斷等方面來說明檢測腸毒素的重要性。Mini VIDAS檢測金黃色葡萄球菌腸毒素檢測時間一般為25.5小時，最快只需要90分鐘，而GB4789.10-2010第一法檢測金黃色葡萄球菌平均檢測時間為78小時，而且檢出率較前者低。可見，Mini VIDAS能在較短時間內(nèi)直接檢出金黃色葡萄球菌腸毒素，并克服了食物中毒時致病菌已死，無法檢出，造成判斷失誤的弊端。

關(guān)鍵詞：Mini VIDAS；金黃色葡萄球菌；腸毒素

金黃色葡萄球菌廣泛分布于自然界中，人和動物都有較高的帶菌率。金黃色葡萄球菌食物中毒致病因素主要是腸毒素，腸毒素可耐受100℃煮沸30 m in而不被破壞，并能抵抗胃腸道中蛋白酶的水解作用，易造成食物中毒。據(jù)美國CDC網(wǎng)站報告，由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒占整個細菌性食物中毒的33%。近年來，我國也發(fā)生了多起金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事故，給廣大人民群眾的身體健康帶來危害?，F(xiàn)行檢測金黃色葡萄球菌方法，從選擇性增菌到分離培養(yǎng)、形態(tài)學分析、血漿凝固酶等生化試驗整個鑒定過程一般需要78小時，而Mini VIDAS直接檢測金黃色葡萄球產(chǎn)生的腸毒素，檢品只需要簡單處理或增菌后即可直接上機測定，整個過程一般只需25.5小時，最快90分鐘可得出結(jié)果，而且避免了由金黃色葡萄球引起的食物中毒。由于金黃色葡萄球在食物加工或加熱過程中被消滅，因而無法檢出，但在被滅前已產(chǎn)生腸毒素，導致食物中毒檢測時錯判漏判。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 檢材來源

食物中毒采樣檢材100份，其中剩余食物46份，嘔吐物30份，肛拭24份。另外，市售食品477份。

1.1.2 儀器設備和培養(yǎng)基

Mini VIDAS及配套試劑是由法國生物梅里埃公司出品。其他試劑及培養(yǎng)基是由北京陸橋試劑公司生產(chǎn)，均在有效期內(nèi)使用。

1.2 方法

①Mini VIDAS方法。

②GB4789.10-2010第一法。

2 結(jié)果

用GB4789.10-2010第一法檢測金黃色葡萄菌，總檢材577份，檢出金黃色葡萄球菌77份，檢出率為13%。用Mini VIDAS檢測金黃色葡萄球腸毒素Cutoff值是0.13，陽性檢材結(jié)果為3.17～4.11，總檢材577份，金黃色葡萄球腸毒素陽性103份，檢出率為18%。結(jié)果見表1、2、3和4。

3 討論

如表1所示，現(xiàn)行的標準檢驗方法GB4789.10-20 10第一法檢驗程序是樣品處理→選擇性增菌→分離培養(yǎng)→形態(tài)學分析→肉湯增菌→血漿凝固酶試驗，整個鑒定過程耗時長且繁瑣，而用Mini VIDAS直接檢測樣品中金黃色葡萄球腸毒素，樣品只需簡單處理或增菌后就可直接上機測定，整個過程一般只需25.5 h，最快90 min即可獲得結(jié)果，在日常檢驗工作中，很大程度上代替了煩瑣的手工操作。在食物中毒中，金黃色葡萄球引起的食物中毒最早和最主要的癥狀是嘔吐，利用Mini VIDAS對嘔吐物進行檢測，它能有效縮短對食物中毒的診斷時間，為防止事態(tài)擴大和救治病人提供有效方法，為監(jiān)督執(zhí)法提供有力依據(jù)。

如表2所示，在食物中毒的檢材中Mini VIDAS檢出率明顯高于國標法，因為在金黃色葡萄球菌引起的食物中毒中，其致病因素是腸毒素，Mini VIDAS法檢測的正是腸毒素。在食物中毒檢材中，活菌的檢出受諸多條件的影響，如檢材的采集量，受污染程度，送檢時間等，均可能出現(xiàn)假陰性，而腸毒素比較穩(wěn)定，Mini VIDAS檢出靈敏度高，所以Mini VIDAS法在食物中毒檢測中具有優(yōu)勢。在市售食物中，速凍米面制品、肉及肉制品、面包糕點檢出率較高，因為腸毒素主要存在于含蛋白質(zhì)豐富、水份多，同時含有一定淀粉的食物中。所以，在食品安全風險監(jiān)測過程中，有必要進行針對性采樣，從而加強對疾病的預防和控制，以達到保障人民群眾身體健康的目的。

表1 兩法檢測時間比較

表2 兩法檢出率比較

表3 加標加熱試驗

表4 金黃色葡萄球菌落特征及生化反應結(jié)果

腸毒素耐熱性強，必須加熱到100℃維持2小時才能夠破壞其毒素。表3試驗表明金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的腸毒素比金黃色葡萄球菌耐熱。在食物中毒的實例中，曾有過中毒特征、臨床癥狀及流行病學等方面都與金黃色葡萄球菌引起的食物中毒非常相似，但在可疑食物中未檢出金黃色葡萄球菌，而用Mini VIDAS檢測同一份樣品卻檢測出金黃色葡萄球菌腸毒素。所以，利用Mini VIDAS能更大可能地檢出致病因子。這可能是由于食物在生產(chǎn)過程中已被金黃色葡萄球菌污染，并在適宜的條件下產(chǎn)生腸毒素，人們在食用這些食物前雖然都加熱煮熟，但金黃色葡萄球菌被消滅，而腸毒素還在，所以仍會引起食物中毒。

用GB4789.10- 201 0第一法檢測金黃色葡萄球菌，其結(jié)果鑒定依據(jù)是金黃色葡萄球菌在各種選擇性培養(yǎng)基的菌落特征及生化反應，但菌落特征及生化反應常常受諸多客觀因素影響，如血平板不新鮮，則溶血現(xiàn)象消失或不明顯；Bair- Paiker平板如果不新鮮或配制不當，則透明環(huán)不出現(xiàn)或延遲出現(xiàn)；血漿凝固酶試驗所用菌液必須是新鮮的，否則會出現(xiàn)假陰性。而用Mini VIDAS直接檢測金黃色葡萄球腸毒素，則不受上述條件限制，只要樣品中存在金黃色葡萄球菌腸毒素，其濃度大于Cutoff值，就能得出陽性結(jié)果。

4 結(jié)語

隨著社會的發(fā)展，人們的生活節(jié)奏不斷加快。成品或半成品的食物越來越普及，食品安全越來越受到人們的重視，而由于金黃色葡萄球菌在自然界的廣泛存在，由它引起的食物中毒也是國內(nèi)外常見的細菌性食物中毒之一，所以，要普及使用Mini VIDAS法檢測金黃色葡萄球菌的腸毒素，特別在食物中毒事件中更顯其優(yōu)勢和重要性。

參考文獻

［1］孟昭赫.食品衛(wèi)生檢驗方法注解微生物學部分［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1990.

［2］王秀茹.預防醫(yī)學微生物學及檢驗技術(shù)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002.

基金編號：佛山市醫(yī)學科技攻關(guān)項目（編號：2014AB001275）。