劉愛(ài)東　馬　征　熊艷杰　劉　揚(yáng)

(華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院病理科,河北　唐山　063000)

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胃腺癌中PYGOPUS2、基質(zhì)金屬蛋白酶-2和-14的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的判斷價(jià)值

劉愛(ài)東馬征1熊艷杰劉揚(yáng)1

(華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院病理科,河北唐山063000)

〔摘要〕目的檢測(cè)胃腺癌中PYGOPUS2、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2和MMP-14的表達(dá)特點(diǎn)，關(guān)注三者在不同臨床特征中的表達(dá)差別及相關(guān)性。方法以95例胃腺癌作為觀察組，以70例正常胃粘膜組織作為對(duì)照組，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)二組中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14的表達(dá)，探討三者在不同臨床病理特征中表達(dá)的差別及相關(guān)性。結(jié)果觀察組中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，觀察組中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14表達(dá)的陽(yáng)性率均與腫瘤體積、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)和Ki67的表達(dá)密切相關(guān)。相關(guān)性分析顯示觀察組中PYGOPUS2和MMP-2、PYGOPUS2和MMP-14的表達(dá)均呈正相關(guān)性。生存分析顯示PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14的表達(dá)均與預(yù)后相關(guān)。結(jié)論胃腺癌組織中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14高表達(dá)，對(duì)腫瘤的進(jìn)展有促進(jìn)作用，術(shù)后聯(lián)合檢測(cè)PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14的表達(dá)對(duì)判斷胃腺癌的預(yù)后有一定關(guān)系。

〔關(guān)鍵詞〕胃腺癌；PYGOPUS2、基質(zhì)金屬蛋白酶-2；基質(zhì)金屬蛋白酶-14；免疫組織化學(xué)技術(shù)

轉(zhuǎn)移是腫瘤進(jìn)展的重要生物學(xué)行為，在轉(zhuǎn)移過(guò)程中細(xì)胞外基質(zhì)的降解有重要意義?；|(zhì)金屬蛋白酶家族(MMPs)與腫瘤進(jìn)展有關(guān)，當(dāng)腫瘤惡變及處于進(jìn)展期時(shí)，MMPs大量分泌，可以有效地降解細(xì)胞外基質(zhì)，使腫瘤轉(zhuǎn)移的屏障打開(kāi)，細(xì)胞的遷移程度增加〔1〕。MMP-2和MMP-14是家族中的重要成員，對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的溶解作用強(qiáng)〔2〕。有研究顯示MMP-14高表達(dá)時(shí)可以高效地促進(jìn)MMP-2分泌，加速基底膜的溶解作用〔3〕。PYGOPUS2蛋白是Wnt信號(hào)通路下游的新功能蛋白，主要通過(guò)結(jié)合游離β-catenin，使其大量聚集在胞質(zhì)，并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)，引起靶點(diǎn)的異常活化〔4〕。近年研究認(rèn)為PYGOPUS2參與細(xì)胞的癌變和轉(zhuǎn)移過(guò)程〔5〕。本文關(guān)注胃腺癌中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14的表達(dá)及臨床意義。

1材料和方法

1.1臨床資料收集2006年1～12月行胃腺癌根治手術(shù)后留取的蠟塊組織及患者的臨床資料作為觀察組，納入均符合世界衛(wèi)生組織(WHO)關(guān)于胃腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。共觀察95例，男54例，女41例，年齡42～79〔平均(60.6±5.9)〕歲；高分化39例，中分化35例，低分化21例，患者手術(shù)前均未進(jìn)行放、化療。同時(shí)選取距腫瘤邊緣大于3 cm的切端正常的胃黏膜組織70例作為對(duì)照組，男39例，女31例，年齡43～76〔平均(59.5±5.8)〕歲。二組一般資料的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2免疫組化檢測(cè)PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14蛋白的表達(dá)PYGOPUS2蛋白的濃縮液購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，MMP-2和MMP-14蛋白的濃縮液均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司?？贵w按不同比例進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇最佳配比濃度進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。采用免疫組織化學(xué)技術(shù)SP法檢測(cè)組織中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14蛋白的表達(dá)，嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)步驟，并均由同一技師操作，減少誤差，嚴(yán)格質(zhì)控。

1.3PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14蛋白檢測(cè)結(jié)果的判定方法PYGOPUS2以細(xì)胞核中呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，MMP-2和MMP-14以出細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)均勻棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，每張切片選擇10個(gè)400倍的高倍視野，取其平均值作為樣本最終的陽(yáng)性表達(dá)率，以陽(yáng)性細(xì)胞≥25%定為陽(yáng)性，以陽(yáng)性細(xì)胞<25%定為陰性。計(jì)算組間陽(yáng)性率的差別。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SAS6.12軟件行χ2檢驗(yàn)、相關(guān)分析和生存分析。

2結(jié)果

2.1兩組PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14蛋白表達(dá)陽(yáng)性率的比較PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14在觀察組中表達(dá)的陽(yáng)性率〔83.16%(79/95)、75.79%(72/95)、63.16%(60/95)〕明顯高于對(duì)照組〔24.29%(17/70)、21.43%(15/70)、15.71%(11/70)、χ2=57.412 4、47.782 1、37.006 2，均P<0.000 1〕，見(jiàn)圖1。

2.2觀察組中不同臨床特征患者PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14蛋白表達(dá)陽(yáng)性率的比較觀察組中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14的表達(dá)在不同腫瘤直徑、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)、Ki67表達(dá)中的差異顯著(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.3觀察組中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14表達(dá)的相關(guān)性PYGOPUS2和MMP-2(r=0.45，P=0.019 0)、PYGOPUS2和MMP-14的表達(dá)(r=0.47，P=0.027 8)均呈正相關(guān)性。

2.4觀察組中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14表達(dá)的生存分析本組患者隨訪時(shí)間為7～60個(gè)月，平均24.9個(gè)月。經(jīng)檢驗(yàn)，胃腺癌中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14的表達(dá)均與患者預(yù)后相關(guān)(均P<0.05)，即PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14高表達(dá)患者的預(yù)后差。

圖1　胃腺癌PYGPODS2、MMP-2、MMP-14蛋白陽(yáng)性表達(dá)(DAB，×400)

臨床特征nPYGOPUS2χ2值P值MMP-2χ2值P值MMP-14χ2值P值腫瘤直徑(cm)≤25038(76.00)3.86150.049433(66.00)5.51300.018927(50.00)7.85380.0051>24541(91.11)39(86.67)33(77.78)Ki67≤255542(76.36)4.30540.038036(65.45)7.60380.005829(52.73)6.10770.0135>254037(92.50)36(90.00)31(77.50)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)5743(75.44)6.06280.013839(68.42)4.21650.040030(52.63)6.78570.0092有3836(94.74)33(86.84)30(78.95)脈管浸潤(rùn)無(wú)6450(78.13)4.88800.027044(68.75)5.29670.021436(56.25)4.02220.0449有3129(93.55)28(90.32)24(77.42)分化程度高分化3928(71.79)6.09940.013522(56.41)13.54130.000212(30.77)29.8273<0.0001中+低分化5651(91.07)50(89.29)48(85.71)

3討論

胃腺癌臨床常見(jiàn)，病變發(fā)展過(guò)程中多種基因和蛋白表達(dá)異常。PYGOPUS是在果蠅實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的蛋白，認(rèn)為是β-catenin蛋白下游的一個(gè)新功能蛋白，其突變導(dǎo)致了WNT信號(hào)的缺失。它有二個(gè)同源蛋白，分別是PYGOPUS1和PYGOPUS2〔6〕。PYGOPUS2基因位于1號(hào)染色體q21.3位置，其編碼的產(chǎn)物為含有233個(gè)氨基酸的蛋白，PYGOPUS2蛋白包括兩個(gè)獨(dú)特的保守區(qū)域，分別是N端同源序列和C端PHD鋅指結(jié)構(gòu)〔7〕。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)PYGOPUS2對(duì)組織發(fā)育、轉(zhuǎn)錄激活及染色質(zhì)重塑均有重要作用〔8，9〕。MMP-2和MMP-14是MMPS家族的重要成員，MMP-2也稱明膠酶A，可以與MMP-9協(xié)同參與作用〔10〕。MMP-14在發(fā)揮作用時(shí)能夠在細(xì)胞的表面對(duì)MMP-2等MMPs家族的成員進(jìn)行有效的活化，同時(shí)又反作用于MMP-14，使MMP-14表達(dá)明顯增高，形成環(huán)式循環(huán)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤離開(kāi)原發(fā)部位發(fā)生轉(zhuǎn)移〔11，12〕。也有研究顯示MMP-14可以使腫瘤細(xì)胞間質(zhì)產(chǎn)生較多的MMPs原酶，不僅使其直接發(fā)揮作用，還可以誘導(dǎo)家族的其他成員發(fā)揮級(jí)聯(lián)反應(yīng)〔13,14〕，起到降解細(xì)胞外基質(zhì)的作用。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14蛋白對(duì)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有明顯的促進(jìn)作用，即3種蛋白起到的作用與癌基因類似。陳玉英等〔15〕通過(guò)觀察PYGOPUS2對(duì)大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖的影響，認(rèn)為PYGOPUS2通過(guò)增高cyclinD1水平，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，加速細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞分化進(jìn)而有效的引起細(xì)胞的增殖過(guò)程而促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。MMP-2和MMP-14促腫瘤的過(guò)程可能與對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的影響有關(guān)，主要表現(xiàn)為對(duì)腫瘤的進(jìn)展的促進(jìn)作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示PYGOPUS2/MMP-2/MMP-14可能具有正向協(xié)同效應(yīng)，即三者共同促進(jìn)胃腺癌的進(jìn)展。PYGOPUS2調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)可以有效證明PYGOPUS2對(duì)腫瘤進(jìn)展的作用。PYGOPUS2大量分泌時(shí)，可以加速細(xì)胞外基質(zhì)溶解作用，主要可以表現(xiàn)為以MMP-2和MMP-14為主的蛋白酶的分泌。此時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的溶解作用增強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞易于通過(guò)屏障形成播散，進(jìn)而引起腫瘤浸潤(rùn)性生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。Yang等〔16〕通過(guò)觀察肺癌中Desmoplakin的作用，發(fā)現(xiàn)Desmoplakin 在通過(guò)Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)途徑作用過(guò)程中對(duì)MMP-14有一定的影響，分析認(rèn)為Wnt/β-catenin可能與MMPs有一定相關(guān)性。因此本實(shí)驗(yàn)觀察到的PYGOPUS2/MMP-2/MMP-14的相關(guān)性可能均是通過(guò)Wnt/β-catenin的作用調(diào)節(jié)的。但是由于PYGOPUS2與MMPs的協(xié)同作用并非PYGOPUS2作用的經(jīng)典通路，因此三者協(xié)同作用機(jī)制尚有待更多基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究及進(jìn)一步驗(yàn)證〔17,18〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14均與腫瘤的體積、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)、分化程度和Ki67的表達(dá)密切相關(guān)，由于以上因素均與腫瘤的預(yù)后相關(guān)，因此檢測(cè)三者可能對(duì)判斷預(yù)后有重要價(jià)值，而生存分析直接證實(shí)了此結(jié)論，即三者高表達(dá)的胃腺癌患者預(yù)后差。

總之，胃腺癌組織中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14高表達(dá)，對(duì)腫瘤的進(jìn)展有促進(jìn)作用，術(shù)后聯(lián)合檢測(cè)PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14的表達(dá)對(duì)判斷胃腺癌的預(yù)后有一定價(jià)值。

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〔2014-12-08修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢(mèng)園)

〔中圖分類號(hào)〕R735.1

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)12-2955-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.062

1唐山職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)校區(qū)

第一作者：劉愛(ài)東(1975-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，副教授，主要從事腫瘤分子病理學(xué)研究。