李　佳，李　雪，孫建華，李　兵

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IL-10基因修飾的未成熟樹突狀細胞在大鼠角膜移植排斥反應(yīng)中的作用

李佳1*，李雪1,2*，孫建華3，李兵1

注：*李佳和李雪對本文貢獻一致。

1Department of Ophthalmology, the First Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University, Jinzhou 121000，Liaoning Province，China;2Shenyang Aier Eye Hospital, Shenyang 110000, Liaoning Province, China;3Department of Otorhinolaryngology Head and Neck Surgery, Jinzhou Central Hospital, Jinzhou 121000, Liaoning Province, China

*Co-first authors:Jia Li and Xue Li.

Correspondence to:Bing Li. Department of Ophthalmology, the First Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University, Jinzhou 121000, Liaoning Province, China. jzslibingv@163.com

Received：2016-03-02Accepted：2016-07-14

?AIM:Through the establishment of penetrating keratoplasty model of rats, to detect the role and its mechanism of immature dendritic cells with IL-10 gene modified.

?METHODS:Allogeneic penetrating corneal transplantation in rat model was performed. SD rats were randomly divided into positive control group, GFP-DC group, 8-DC and IL-10-GFP-DC group. At 3d before keratoplasty, the rats were given tail intravenous injection with the same amount of PBS, bone marrow 8-DC (DC had cultured for 8d) from donor Wistar rats, GFP-DC after 48h transfection and IL-10-GFP-DC. Rats were observed under slit-lamp for corneal graft cases every day, and recorded rejection index and corneal graft survival time. At 14d after keratoplasty, pathologic and immunohistochemical examinations were performed.

?RESULTS:Compared with GFP-DC group and 8-DC group, corneal graft survival time of IL-10-GFP-DC group was significantly longer (P<0.01); at 14d after keratoplasty, corneal opacity, edema, neovascularization and rejection index of IL-10-GFP-DC group were significantly lower (P<0.01). Pathological examination showed that in the three experimental groups corneal inflammation was lighter than the positive control group without significant central graft neovascularization. Immunohistochemistry showed: compared to the positive control group, GFP-DC group and 8-DC group, CD4+, CD8+, CD25+, IL-2+, NK+and NF-κB+positive cells in IL-10-GFP-DC group were lower(P<0.01).

?CONCLUSION: After donor-derived immature dendritic cells pretreated, corneal graft survival was significantly prolonged, successfully induced corneal transplantation tolerance. CD4+, CD8+, CD25+, IL-2+, NK+and NF-κB+positive cells are involved in corneal allograft rejection regulation, IL-10-GFP-DC may reduce CD4+, CD8+, CD25+, IL-2+, NK+and NF-κB+positive cell infiltration, inhibit corneal transplant rejection.

Citation:Li J, Li X, Sun JH,etal. Role and its mechanism of immature dendritic cells with IL-10 gene modified in rats after keratoplasty.GuojiYankeZazhi(IntEyeSci) 2016;16(8):1439-1443

摘要

目的：通過建立大鼠角膜穿透性移植模型，探討IL-10基因修飾的未成熟樹突狀細胞在大鼠角膜移植排斥反應(yīng)中的作用及其作用機制。

方法：建立大鼠同種異體穿透性角膜移植模型，將受體SD大鼠隨機分為：陽性對照組、GFP-DC組、8-DC組及IL-10-GFP-DC組，分別于角膜移植術(shù)前3d尾靜脈注射等量的PBS、供體Wistar大鼠骨髓源8-DC(培養(yǎng)8d的DC)、轉(zhuǎn)染48h的GFP-DC及IL-10-GFP-DC。術(shù)后每天在裂隙燈下觀察角膜植片情況，記錄排斥反應(yīng)指數(shù)及角膜植片存活時間，在移植術(shù)后第14d行各組角膜組織的病理學(xué)檢查及免疫組織化學(xué)檢查。

結(jié)果：IL-10-GFP-DC組角膜植片存活時間較GFP-DC組、8-DC組比較顯著延長(P<0.01)。術(shù)后第14d時IL-10-GFP-DC組角膜植片的混濁、水腫、新生血管及排斥指數(shù)均顯著降低(P<0.01)。病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示各實驗組角膜植片的炎癥反應(yīng)較陽性對照組輕，植片中央未見明顯新生血管。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：IL-10-GFP-DC組的CD4+、CD8+、CD25+、IL-2+、NK+及NF-κB+陽性細胞數(shù)量較陽性對照組、GFP-DC組、8-DC組減少，差異均具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

結(jié)論：經(jīng)過供體來源未成熟樹突狀細胞預(yù)處理的受體，角膜植片的存活時間顯著延長，成功誘導(dǎo)角膜移植免疫耐受。CD4+、CD8+、CD25+、IL-2+、NK+及NF-κB+陽性細胞參與了同種異體角膜移植排斥反應(yīng)的調(diào)控，IL-10-GFP-DC可降低CD4+、CD8+、CD25+、IL-2+、NK+及NF-κB+陽性細胞的浸潤，抑制角膜移植排斥反應(yīng)的發(fā)生。

關(guān)鍵詞：IL-10；樹突狀細胞；穿透性角膜移植；移植排斥

引用：李佳，李雪，孫建華,等.IL-10基因修飾的未成熟樹突狀細胞在大鼠角膜移植排斥反應(yīng)中的作用.國際眼科雜志2016;16(8):1439-1443

0引言

在我國，每年因角膜病致盲的患者約有400萬，角膜病是我國目前主要致盲病因之一，已成為第二致盲眼病，角膜移植術(shù)是治療頑固性角膜病的最終手段，但角膜移植術(shù)后的排斥反應(yīng)仍然是角膜移植失敗的主要因素，如何抑制排斥反應(yīng)的發(fā)生已經(jīng)成為角膜移植研究中亟待解決的關(guān)鍵問題[1]。目前研究表明誘導(dǎo)受體對供體器官產(chǎn)生免疫耐受是抑制移植排斥反應(yīng)的最佳方法[2]。樹突狀細胞(dendritic cell，DC)是現(xiàn)在所知唯一的機體內(nèi)專職的、功能強大的、誘導(dǎo)初始T細胞活化的抗原遞呈細胞(antigen processing cell，APC)，是適應(yīng)性T細胞免疫應(yīng)答的始動者[3]。未成熟的樹突狀細胞(immature dendritic cell，imDC)能夠調(diào)節(jié)T細胞的反應(yīng)能力，誘導(dǎo)其發(fā)生免疫耐受[4]。IL-10(Interleukin 10，IL-10)又叫細胞因子合成抑制因子，是由Th2淋巴細胞和單核細胞合成分泌的，在抗炎和抑制多種細胞因子合成方面發(fā)揮著重要的作用。據(jù)研究表明，IL-10能夠抑制DC成熟，并且imDC又能夠進一步分泌IL-10，從而放大imDC在誘導(dǎo)免疫耐受中的作用，形成反饋效應(yīng)，從而延長移植物的存活時間[5-6]。本實驗通過建立同種異體大鼠穿透性角膜移植模型，經(jīng)過供體大鼠骨髓源樹突狀細胞對受體大鼠預(yù)處理的方法，觀察移植術(shù)后各組角膜植片的存活情況及病理組織學(xué)變化，觀察CD4+、CD8+、CD25+、IL-2+、NK+及NF-κB+的表達，從而探討IL-10基因修飾的未成熟樹突狀細胞在大鼠角膜移植排斥反應(yīng)中的作用。

1材料和方法

1.1材料健康SD大鼠52只，購自遼寧醫(yī)學(xué)院實驗動物中心；健康Wistar大鼠26只，購自中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，這兩種大鼠重量均為200～250g，鼠齡6～8wk，雌雄不限。IL-10-GFP-Adenovirus(上海吉凱基因化學(xué)技術(shù)有限公司)，CD4免疫組化試劑盒、CD8免疫組化試劑盒、CD25免疫組化試劑盒、IL-2免疫組化試劑盒、NK免疫組化試劑盒、NF-κB免疫組化試劑盒(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)，本實驗的DC細胞的來源和培養(yǎng)主要通過利用大鼠淋巴細胞分離液及細胞因子誘生方法，提取大鼠骨髓源樹突狀細胞的前體細胞并進行培養(yǎng)[7]。

表1移植術(shù)后角膜植片各參數(shù)評分標準

角膜植片的臨床觀察情況評分角膜植片混濁0～4 植片完全透明0 植片透明度輕度丟失1 植片透明度中度丟失,虹膜血管可見2 虹膜血管窺視不清,但瞳孔可見3 瞳孔輪廓窺不清4角膜植片水腫0～2 無水腫0 中度水腫1 伴有植片增厚的顯著水腫2角膜植片新生血管0～4 無新生血管0 新生血管在任何象限伸入達到植片半徑的25%1 新生血管達到植片半徑的50%2 新生血管達到植片半徑的75%3 新生血管達到植片的中央4總積分10

1.2方法

1.2.1實驗分組將培養(yǎng)第6d的DC分為3組：第1組繼續(xù)原條件培養(yǎng)48h后(共培養(yǎng)8d)，即為8-DC，收集細胞，PBS洗滌2次，調(diào)整細胞懸液濃度為2×106個/mL；另兩組分別經(jīng)GFP-Adenovirus、IL-10-GFP-Adenovirus轉(zhuǎn)染48h后，收集細胞，PBS洗滌2次，調(diào)整細胞懸液濃度為2×106個/mL。以SD大鼠為受體，Wistar大鼠為供體，將受體SD大鼠隨機分為4組，每組13例13眼。陽性對照組：術(shù)前3d受體鼠尾靜脈注射PBS 1mL；GFP-DC組：術(shù)前3d受體鼠尾靜脈注射GFP-DC細胞懸液1mL；8-DC組：術(shù)前3d受體鼠尾靜脈注射8-DC細胞懸液1mL；IL-10-GFP-DC組：術(shù)前3d受體鼠尾靜脈注射IL-10-GFP-DC細胞懸液1mL。

1.2.2建立角膜移植動物模型[8]術(shù)前15min術(shù)眼滴復(fù)方托吡卡胺滴眼液充分散瞳，腹腔注射10%水合氯醛進行全身麻醉，常規(guī)消毒。在手術(shù)顯微鏡下，用植片直徑3.5mm的環(huán)鉆在供體大鼠(術(shù)眼為雙眼)角膜中央輕壓形成壓痕，用尖刀在壓痕處刺入前房，使用顯微角膜剪沿壓痕環(huán)形剪下角膜，作為備用植片，放入0.9%氯化鈉注射液中保存(保存時間不超過20min)；使用植床直徑3.0mm的環(huán)鉆，按上述相同方法剪除受體大鼠(術(shù)眼為右眼)中央角膜，制作植床。將植片置于植床上，用10-0愛惜良尼龍線間斷縫合8針，建立前房。術(shù)畢紅霉素眼膏涂結(jié)膜囊內(nèi)，縫合眼瞼。術(shù)后第1d拆除眼瞼縫線，術(shù)后每天用復(fù)方托吡卡胺滴眼液和氯霉素滴眼液滴眼3次至術(shù)后第10d。

1.2.3裂隙燈顯微鏡觀察自術(shù)后第1d起每日在裂隙燈顯微鏡下對受體鼠術(shù)眼進行觀察，以水腫、混濁和新生血管3項指標進行評分，參照Larkin等[9]評分標準(表1)，3項評分之和為當(dāng)日排斥反應(yīng)指數(shù)(rejection index，RI)，當(dāng)RI≥5時，或者植片混濁一項達到3時視為排斥反應(yīng)發(fā)生，記錄角膜植片存活時間。

1.2.4組織病理學(xué)檢查角膜移植術(shù)后第14d，各組隨機抽取6只大鼠，術(shù)眼(右眼)全眼球摘除，正常SD大鼠3只，6眼為陰性對照，4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，5μm切片，HE染色，鏡檢。

圖1顯微鏡下觀察移植術(shù)后第14d各組角膜植片的情況A：陽性對照組：角膜植片混濁、水腫，瞳孔窺不見，新生血管角膜長入植片中央，角膜植片發(fā)生排斥；B：GFP-DC組：角膜植片輕度混濁、水腫，新生血管長入植片邊緣；C：8-DC組：角膜植片輕度混濁、水腫，新生血管長入植片邊緣；D：IL-10-GFP-DC組：角膜植片透明，未見混濁、水腫，新生血管長入植片邊緣。

圖2術(shù)后第14d各組角膜病理組織學(xué)HE染色(×200)A：陽性對照組：角膜植片明顯水腫、增厚，植片可見大量炎細胞浸潤并可見新生血管，基質(zhì)層排列紊亂；B：GFP-DC組；C：8-DC組；D：IL-10-GFP-DC組。

1.2.5免疫組織化學(xué)檢測石蠟切片常規(guī)脫蠟，微波修復(fù)抗原，滅活內(nèi)源性過氧化物酶。滴加5% BSA封閉液，室溫10～30min。滴加1∶200濃度稀釋的一抗，4℃孵育過夜，PBS洗滌3次。滴加1∶200濃度稀釋的二抗，37℃孵育30min。滴加試劑SP，DAB顯色。蘇木素復(fù)染、脫水、封片，光學(xué)顯微鏡下觀察。設(shè)立陰性對照：以PBS代替一抗。進行圖像分析：以×400圖像輸入。每張切片隨機取5個視野，每個視野面積為0.2mm×0.2mm。陽性結(jié)果為細胞胞膜、胞漿或胞核呈棕黃色，計數(shù)單位視野內(nèi)陽性細胞數(shù)。

2結(jié)果

2.1角膜植片存活時間各組角膜植片的存活時間GFP-DC組、8-DC組、IL-10-GFP-DC組與陽性對照組比較，植片存活時間明顯延長，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；IL-10-GFP-DC組角膜植片存活時間顯著長于GFP-DC組、8-DC組，有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；GFP-DC組與8-DC組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，表2，圖1)。

2.2各組角膜植片參數(shù)結(jié)果術(shù)后第14d，GFP-DC組、8-DC組、IL-10-GFP-DC組與陽性對照組比較，角膜植片的混濁、水腫、新生血管及排斥指數(shù)均降低，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；IL-10-GFP-DC組與GFP-DC組、8-DC組比較角膜植片的混濁、水腫、新生血管及排斥指數(shù)均降低，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；GFP-DC組與8-DC組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，表3)。

2.3組織病理學(xué)檢查結(jié)果術(shù)后第14d，陽性對照組角膜植片明顯水腫、增厚，植片可見大量炎細胞浸潤,并可見新生血管，基質(zhì)層排列紊亂；GFP-DC組、8-DC組及IL-10-GFP-DC組角膜植片無明顯水腫及增厚，且炎性細胞浸潤較少，角膜結(jié)構(gòu)基本正常，其中IL-10-GFP-DC組角膜植片改善最明顯，炎性細胞最少(圖2)。

表2　各組角膜植片存活時間　±s，d)

注：aP<0.01vs陽性對照組；bP<0.01vsGFP-DC組；cP<0.01vs8-DC組。

2.4免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果應(yīng)用細胞圖像分析系統(tǒng)進行圖像分析，以×400圖像輸入。每只眼隨機取出1張切片，每張切片隨機取5個視野，每個視野面積為0.2mm×0.2mm。陽性結(jié)果為細胞胞膜、胞漿或胞核呈棕黃色，計數(shù)單位視野內(nèi)陽性細胞數(shù)。陽性對照組中、GFP-DC組、8-DC組及IL-10-GFP-DC組角膜植片中均存在CD4+、CD8+、CD25+、IL-2+、NK+及NF-κB+陽性細胞的表達，但其余三組陽性細胞數(shù)量明顯較陽性對照組減少。IL-10-GFP-DC組CD4+、CD8+、CD25+、IL-2+、NK+及NF-κB+陽性細胞的數(shù)量最少，陽性對照組CD4+、CD8+、CD25+、IL-2+、NK+及NF-κB+陽性細胞的數(shù)量最多；GFP-DC組與8-DC組比較，結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；IL-10-GFP-DC組與GFP-DC組、8-DC組及陽性對照組比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，表4)。

3討論

目前，角膜病已成為第2位致盲眼病，角膜移植仍然是目前治療各種嚴重角膜疾病的最終途徑，而免疫排斥反應(yīng)是造成植片衰竭導(dǎo)致移植失敗的主要原因[10]。如何避免排斥反應(yīng)的發(fā)生是角膜移植研究中需要解決的關(guān)鍵問題，近來眾多學(xué)者認為誘導(dǎo)受體對供體器官產(chǎn)生免疫耐受才是解決異體移植排斥反應(yīng)的關(guān)鍵所在[11-13]。

DC是目前所知的機體內(nèi)唯一的、專職的、功能強大的、誘導(dǎo)初始T細胞活化的APC，是適應(yīng)性T細胞免疫應(yīng)答的始動者[14-15]。IL-10主要是由Th2淋巴細胞和單核細胞合成分泌的，在抗炎和抑制多種細胞因子合成等方面發(fā)揮著重要的作用。大量的實驗證明，IL-10修飾的DC可以明顯降低心臟、肝、腎等移植術(shù)后的排斥反應(yīng)，延長移植物的存活時間，誘導(dǎo)免疫耐受的發(fā)生[16-18]。

有研究表明，同種異體的角膜移植排斥反應(yīng)是由T淋巴細胞為主所介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)(delayed type hypersensitivity，DTH)[19]，根據(jù)其表型的不同可分為：CD4+T細胞和CD8+T細胞。有研究學(xué)者在對大鼠角膜移植術(shù)后的排斥反應(yīng)的病理組織學(xué)中發(fā)現(xiàn)，在移植排斥反應(yīng)中，植片內(nèi)有很多CD4+T細胞和CD8+T細胞的浸潤[20-21]。CD4+Th主要負責(zé)介導(dǎo)細胞免疫應(yīng)答，在器官移植排斥反應(yīng)、抗感染及自身免疫性等疾病的誘導(dǎo)中起著重要的作用。CD25是效應(yīng)性T細胞的重要標志[22]，作為非特異性免疫系統(tǒng)重要組成部分之一的NK細胞與T淋巴細胞同屬共同的祖細胞，與T細胞不同的是，NK細胞表面沒有特異性抗原識別受體的表達。有實驗表明，術(shù)前受體內(nèi)NK細胞的清除可以明顯延長動物異體心臟移植的存活時間[23]。1986年，Sen和Blaldwin最初在B細胞核的抽取物中發(fā)現(xiàn)了一種核蛋白因子，取名為NF-κB[24]，在許多參與免疫和炎癥反應(yīng)物質(zhì)的基因中，NF-κB均對其有誘導(dǎo)調(diào)控的作用[25]，調(diào)控T淋巴細胞、B淋巴細胞和樹突狀細胞的生長、增殖及分化，在體液和細胞免疫中扮演著重要的角色[26]，在器官移植排斥反應(yīng)中也可能發(fā)揮著中心調(diào)控者的作用。

組別眼數(shù)混濁水腫新生血管排斥指數(shù)陽性對照組72.29±0.492.14±0.382.29±0.496.71±0.49GFP-DC組71.29±0.49b1.14±0.38b1.29±0.49b3.71±0.49b8-DC組71.57±0.54b1.14±0.38b1.14±0.70b3.86±0.38bIL-10-GFP-DC組70.71±0.49b,d,f0.57±0.54b,d,f0.43±0.54b,d,f1.71±0.49b,d,f

注：bP<0.01vs對照組；dP<0.01vsGFP-DC組；fP<0.01vs8-DC組。

組別眼數(shù)CD4+CD8+CD25+IL-2+NK+NF-κB+陽性對照組641.20±5.0738.00±2.9235.40±2.7038.60±2.3034.60±4.4569.80±5.22GFP-DC組629.40±2.07b23.60±2.19b20.80±3.35b23.60±2.41b23.20±3.90b43.00±5.48b8-DC組632.00±2.65b24.00±2.35b22.00±2.74b25.20±0.84b24.60±2.60b44.60±1.95bIL-10-GFP-DC組619.60±2.07b,d,f17.60±3.05b,d,f15.00±1.58b,d,f17.40±2.07b,d,f11.60±3.56b,d,f24.80±3.63b,d,f

注：bP<0.01vs對照組；dP<0.01vsGFP-DC組；fP<0.01vs8-DC組。

本實驗室前期的研究通過細胞因子誘生法成功培養(yǎng)出大鼠骨髓源樹突狀細胞，已證實IL-10-GFP-Adenovirus轉(zhuǎn)染可以抑制樹突狀細胞的成熟，GFP-Adenovirus對DC無影響。在本實驗研究中，術(shù)后第14d我們對角膜植片行病理組織學(xué)檢查及免疫組織化學(xué)檢測，研究角膜移植術(shù)后角膜植片的病理學(xué)變化及植片中CD4+、CD8+、CD25+、IL-2+、NK+及NF-κB+陽性細胞數(shù)量的表達變化。病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示：GFP-DC組、8-DC組、IL-10-GFP-DC組與陽性對照組比較，植片存活時間明顯延長(P<0.01)，IL-10-GFP-DC組角膜植片存活時間顯著長于GFP-DC組、8-DC組(P<0.01)。陽性對照組角膜植片明顯水腫、增厚，植片可見大量的炎細胞浸潤及新生血管，基質(zhì)層排列紊亂，GFP-DC組、8-DC組、IL-10-GFP-DC組角膜植片無明顯水腫及增厚，且炎性細胞浸潤較少，角膜結(jié)構(gòu)基本正常，其中IL-10-GFP-DC組角膜植片改善最明顯，炎性細胞最少。免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果為：陽性對照組角膜植片中CD4+、CD8+、CD25+、IL-2+、NK+及NF-κB+陽性細胞的數(shù)量最多，說明誘導(dǎo)了排斥反應(yīng)的發(fā)生，IL-10-GFP-DC組的陽性細胞數(shù)量較陽性對照組、GFP-DC組、8-DC組減少，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。在各實驗組中可能由于imDC低表達MHCⅠ/Ⅱ類分子，并且缺乏免疫應(yīng)答中所必需的CD40、B7(CD80、CD86)等共刺激分子和黏附分子，缺少激活T細胞免疫應(yīng)答所必需的第二信號，不能有效激活T細胞，抑制了上述細胞的浸潤，從而抑制排斥反應(yīng)，可見imDC在誘導(dǎo)移植免疫耐受過程中具有重要作用。IL-10-GFP-DC組中，CD4+、CD8+、CD25+、IL-2+、NK+及NF-κB+的細胞數(shù)量最少、炎癥反應(yīng)最輕，并且角膜植片存活時間最長。由此可見，IL-10-GFP-DC在誘導(dǎo)角膜移植免疫耐受中更加具有優(yōu)勢。

本實驗通過受體大鼠術(shù)前尾靜脈注射經(jīng)供體來源的imDC、GFP-Adenovirus、IL-10-GFP-Adenovirus轉(zhuǎn)染的供體來源imDC能夠延長角膜植片存活時間，能誘導(dǎo)角膜移植免疫耐受，結(jié)果顯示IL-10-GFP-DC組誘導(dǎo)耐受效果最佳。CD4+、CD8+、CD25+、IL-2+、NK+及NF-κB+細胞參與了角膜移植排斥反應(yīng)的調(diào)控，IL-10-GFP-DC可降低CD4+、CD8+、CD25+、IL-2+、NK+及NF-κB+陽性細胞的浸潤，抑制角膜移植排斥反應(yīng)的發(fā)生。本文探討了IL-10基因修飾的樹突狀細胞在大鼠角膜移植中的作用，為誘導(dǎo)角膜移植免疫耐受提供實驗依據(jù)。

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基金項目：遼寧省自然科學(xué)基金計劃項目(No.2013022001)

作者單位：1(121000)中國遼寧省錦州市，錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科；2(110000)中國遼寧省沈陽市，沈陽愛爾眼科醫(yī)院眼科；3(121000)中國遼寧省錦州市中心醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科

作者簡介：李佳，博士，主治醫(yī)師，研究方向：角膜及眼表疾??；李雪，碩士，醫(yī)師，研究方向：角膜病。

通訊作者：李兵，博士，主任醫(yī)師，教授，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向：角膜移植、角膜及眼表疾病.jzslibingv@163.com

收稿日期：2016-03-02 修回日期： 2016-07-14

Foundation item:Project of Natural Science Foundation of Liaoning Province(No:2013022001)

DOI:10.3980/j.issn.1672-5123.2016.8.09

?KEYWORDS:Interleukin-10; dendritic cells; penetrating keratoplasty; transplant rejection

Role and its mechanism of immature dendritic cells with IL-10 gene modified in rats after keratoplasty

Jia Li1*, Xue Li1,2*, Jian-Hua Sun3, Bing Li1

Abstract