劉　鴿　張培生　于會(huì)舉　張　倩　劉功成　屈勇剛楊慧敏

北疆地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)豬瘟抗體水平檢測(cè)與分析

劉鴿張培生于會(huì)舉張倩劉功成屈勇剛*楊慧敏

（石河子大學(xué)，新疆石河子 832003）

為了解2014年1月至2016年3月北疆地區(qū)豬瘟 （CSF）的免疫抗體水平，試驗(yàn)從克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯4個(gè)不同區(qū)域的16個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)采集血液樣品共計(jì)890份，采用間接ELISA法檢測(cè)其抗體水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CSF的平均抗體陽(yáng)性率為89.89%，達(dá)到國(guó)家規(guī)定水平 （70%）。16個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟抗體陽(yáng)性率達(dá)85%及以上者占81.25%，抗體檢測(cè)達(dá)90%及以上者占56.25%，各豬場(chǎng)抗體水平差異極顯著 （＜0.01）。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)4個(gè)不同區(qū)域豬場(chǎng)豬瘟平均抗體陽(yáng)性率中：石河子區(qū)域陽(yáng)性率最高，為97.33%；瑪納斯區(qū)域陽(yáng)性率最低，為87.86%；但都在87%以上。4個(gè)不同區(qū)域豬場(chǎng)豬瘟抗體檢測(cè)陽(yáng)性個(gè)體平均OD630值中：沙灣區(qū)域的平均OD630值最大，為1.425；石河子區(qū)域的平均OD630值最小，為1.131。該試驗(yàn)結(jié)果表明北疆地域的上述4個(gè)不同區(qū)域CSF抗體水平較高，該結(jié)果在一定程度上可為北疆地區(qū)豬瘟防疫工作提供一定的參考。

CSFV；ELISA；抗體水平；陽(yáng)性率

豬瘟（Classic Swine Fever，CSF）是由豬瘟病毒（Classic Swine Fever Virus，CSFV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，具有流行廣泛、發(fā)病率高、死亡率高、危害大的特點(diǎn)。國(guó)際獸醫(yī)局（OIE）將之列為必須上報(bào)的動(dòng)物疫病，我國(guó)也將之列為一類動(dòng)物傳染病。CSF是我國(guó)四大畜禽疫病之一，至今已流行80余年。20世紀(jì)90年代以后，一些原已宣布消滅豬瘟的歐洲國(guó)家（荷蘭、比利時(shí)、英國(guó)、德國(guó)、意大利、西班牙等）又相繼復(fù)發(fā)，我國(guó)一些地區(qū)的豬瘟發(fā)病率亦有上升趨勢(shì)［1］。目前，該病主要在亞洲、非洲、南美洲和歐洲等44個(gè)國(guó)家流行［2］。

我國(guó)豬瘟流行形勢(shì)復(fù)雜，沒有明顯規(guī)律性，是困擾我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的一大難題，防控任務(wù)十分艱巨［3］。針對(duì)我國(guó)目前豬瘟的流行現(xiàn)狀及特點(diǎn)做好免疫監(jiān)測(cè)，保持豬群處于較高的群體免疫水平，堅(jiān)決淘汰CSFV隱性感染種豬，是規(guī)?；i場(chǎng)有效防控豬瘟的重要手段［4］。為了解2014年1月至2016年3月北疆地區(qū)CSF的免疫抗體水平，本試驗(yàn)選擇克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯4個(gè)不同區(qū)域的16個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)進(jìn)行，在一定程度上可為北疆地區(qū)豬瘟防疫工作提供一定的參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1樣品來源

2014年1月至2016年3月采自新疆北疆地區(qū)的克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯4個(gè)不同區(qū)域的16個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)不同類型豬（0～10日齡、11～20日齡、21～30日齡仔豬，后備母豬，經(jīng)產(chǎn)母豬，種公豬），共采集血樣890份。

1.1.2材料和儀器

豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（武漢科前生物制品有限責(zé)任公司，批號(hào)：20130101），自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio Tek儀器有限公司）、微量移液器（Eppendorf公司）、恒溫培養(yǎng)箱（北京市光明醫(yī)療儀器廠）。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1采集樣品

對(duì)已選定的豬群一次性從前腔靜脈或耳靜脈采集血液3～5 mL/頭，室溫靜置30分鐘左右，待血清析出后，每份吸取1 mL血清于滅菌的1.5 mL EP管中，逐管標(biāo)記，以4 000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，可立即進(jìn)行ELISA檢測(cè)，亦可放-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2間接ELISA檢測(cè)方法

按照試劑盒說明書的步驟測(cè)樣品OD630值。在試驗(yàn)中，于豬瘟抗原包被微孔板加入經(jīng)1∶40倍稀釋的對(duì)照血清和待檢血清，37℃溫育30分鐘后，抗原抗體結(jié)合，洗滌后加酶標(biāo)二抗，與抗原抗體復(fù)合物溫育結(jié)合，再次洗滌后加TMB底物，混勻室溫避光顯色10分鐘，加終止液終止反應(yīng)，在10分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀630波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的OD630值，據(jù)OD630值對(duì)抗體水平進(jìn)行判定。

1.2.3結(jié)果判定

在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔OD630值。試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD630值≥0.6，陰性對(duì)照孔平均OD630值必須＜0.3。

樣品OD630值≥0.35，判為陽(yáng)性；樣品OD630值＜0.35，判為陰性。

根據(jù)試劑盒說明書，按表1進(jìn)行OD630值與抗體效價(jià)的轉(zhuǎn)換。

1.2.4統(tǒng)計(jì)分析

用SPSS軟件、Excel軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，OD630值結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2試驗(yàn)結(jié)果

2.1不同地區(qū)不同豬場(chǎng)的豬瘟抗體陽(yáng)性率及抗體水平

豬場(chǎng)A～E在克拉瑪依區(qū)域，F(xiàn)～H在沙灣區(qū)域，I～L在石河子區(qū)域，M～P在瑪納斯區(qū)域。890份豬血清共檢出抗體陽(yáng)性血清800份，陽(yáng)性率為89.89%，OD630值平均值為1.309、標(biāo)準(zhǔn)差為0.657，平均效價(jià)為1∶256。A～P16個(gè)豬場(chǎng)中只有2個(gè)豬場(chǎng)（J、K）的豬瘟抗體水平低于國(guó)家規(guī)定水平（70%）。這2個(gè)豬場(chǎng)豬瘟抗體陽(yáng)性率分別為68.89%和62.50%。結(jié)果見表2。

4個(gè)不同區(qū)域豬場(chǎng)豬瘟平均抗體陽(yáng)性率，石河子區(qū)域最高，為97.33%；瑪納斯區(qū)域最低，為87.86%；但4個(gè)區(qū)域豬場(chǎng)豬瘟平均抗體陽(yáng)性率都在87%以上，結(jié)果見表3。

4個(gè)不同區(qū)域的16個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)的豬瘟抗體檢測(cè)為陽(yáng)性的，平均OD630值存在一定差異：平均OD630值＞1.200的豬場(chǎng)有11個(gè)，占68.75%；0.600≤平均OD630值≤1.200的豬場(chǎng)有5個(gè)，占31.25%；平均OD630值最大值為1.645，最小值為0.845；沙灣區(qū)域的平均OD630值最大，石河子區(qū)域的平均OD630值最小，但都大于1.100。結(jié)果見表2、表3。

2.2 16個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)豬群不同構(gòu)成成分的豬瘟抗體水平

對(duì)16個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)豬瘟抗體水平進(jìn)行分析，0～10日齡仔豬、11～20日齡仔豬、21～30日齡仔豬、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬的豬瘟抗體陽(yáng)性率分別為87.50%、85.00%、81.25%、97.38%、85.34%、98.68%；發(fā)現(xiàn)三個(gè)不同階段的仔豬，隨日齡增大，豬瘟抗體陽(yáng)性率有降低的趨勢(shì)；豬群不同構(gòu)成成分之間的豬瘟抗體水平存在一定差異，豬群中種公豬的抗體水平最高，其次為后備母豬，21～30日齡仔豬的抗體水平最低（81.25%），但遠(yuǎn)超過國(guó)家規(guī)定水平（70.00%）；豬群中各成分豬的豬瘟抗體陽(yáng)性率均在81.00%以上，說明其具有較高的免疫水平。結(jié)果見表4。

表1　豬瘟抗體ELISA檢測(cè)OD630值與豬瘟間接血凝試驗(yàn) （HIA）效價(jià)的轉(zhuǎn)換

表2　北疆地區(qū)4個(gè)不同區(qū)域的16個(gè)不同規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

表3　北疆4個(gè)不同區(qū)域豬場(chǎng)豬瘟抗體分析結(jié)果

3討論

3.1北疆地區(qū)豬瘟抗體水平相對(duì)較高

試驗(yàn)結(jié)果表明，新疆北疆地區(qū)的克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯4個(gè)不同區(qū)域的16個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)中有14個(gè)豬場(chǎng)的豬瘟抗體陽(yáng)性率在國(guó)家規(guī)定水平（70%）以上，只有2個(gè)豬場(chǎng)的豬瘟抗體陽(yáng)性率低于70%，應(yīng)分析產(chǎn)生這種結(jié)果的原因，并引起養(yǎng)豬企業(yè)和相關(guān)研究部門的高度重視。根據(jù)杜希珍等［5］研究報(bào)道，規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟疫情穩(wěn)定需要豬瘟抗體合格率達(dá)到90%以上，北疆地區(qū)的16個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)中有9個(gè)豬場(chǎng)豬瘟抗體陽(yáng)性率達(dá)90%以上，占56.25%，也就是說16個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)中超過半數(shù)的豬場(chǎng)達(dá)到此標(biāo)準(zhǔn)，并且其中有2個(gè)豬場(chǎng)的豬瘟抗體陽(yáng)性率均為100%。此試驗(yàn)結(jié)果在一定程度上說明新疆北疆地區(qū)的豬場(chǎng)豬瘟抗體水平較高，但不可否認(rèn)有少數(shù)豬場(chǎng)的豬瘟抗體水平偏低，應(yīng)引起重視，并采取及時(shí)有效的措施改變這種現(xiàn)狀，以求北疆乃至全疆生豬養(yǎng)殖事業(yè)獲得更好更快發(fā)展，為國(guó)民提供健康放心豬肉。

表4　北疆4個(gè)不同區(qū)域的16個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)豬群不同構(gòu)成成分的豬瘟抗體水平

3.2豬群不同構(gòu)成成分豬瘟抗體水平存在一定差異

對(duì)0～10日齡仔豬、11～20日齡仔豬、21～30日齡仔豬、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬和種公豬的豬瘟抗體水平檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，種公豬和后備母豬的豬瘟抗體陽(yáng)性率均在97%以上，均屬較高的免疫水平，而經(jīng)產(chǎn)母豬的豬瘟免疫水平有待提高，三個(gè)不同階段的仔豬的豬瘟抗體陽(yáng)性率隨日齡增大有下降趨勢(shì)，其中仔豬出生20天后抗體水平有下降增快的趨勢(shì)，這可能與母源抗體有一定的關(guān)系，提示在仔豬出生后應(yīng)在適宜的時(shí)間及時(shí)做好免疫接種工作。曹劍等［6］用HIA法對(duì)仔豬母源抗體效價(jià)進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，結(jié)果顯示，母源抗體在15～21日齡達(dá)到最高值，21日齡后逐漸降低，于35日齡達(dá)到抗體保護(hù)臨界值，與本次研究結(jié)果基本相符。提醒畜牧獸醫(yī)工作者要在仔豬出生后20天左右時(shí)及時(shí)有效地實(shí)施豬瘟免疫接種，并提供良好的飼養(yǎng)環(huán)境，在免疫接種的同時(shí)增強(qiáng)自身抵抗力，促進(jìn)仔豬群更健康地生長(zhǎng)，為豬群后續(xù)發(fā)展打下良好基礎(chǔ)。

3.3豬瘟首免時(shí)間的確定

確定豬瘟首免時(shí)間非常重要，北疆地區(qū)豬瘟首免多數(shù)在出生后30天左右，二免在出生后60天左右，但也應(yīng)根據(jù)豬群情況而定，有的豬場(chǎng)應(yīng)提前進(jìn)行豬瘟免疫接種，在出生后50天時(shí)進(jìn)行豬瘟二免。調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，也有豬場(chǎng)在仔豬出生后25天時(shí)進(jìn)行首免，這與我們?cè)囼?yàn)結(jié)果（仔豬出生20天后抗體水平有下降增快的趨勢(shì)）相一致。

［1］殷震，劉景華.動(dòng)物病毒學(xué) ［M］.2版.北京：科學(xué)出版社，1997：652-664.

［2］Stark R，Romenapf T，Meyers G，et al.Genomic localization of hogcholera virus glycoproteins［J］.Virology，1990（1）：280-286.

［3］覃紹敏，謝彬，馬玲，等.某規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟抗體水平及其野毒感染的檢測(cè)與分析［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2011（17）：92-94.

［4］李嬌，沈志強(qiáng)，祖立闖，等.間接ELISA在豬瘟抗體檢測(cè)上的應(yīng)用［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，33（6）：126-129.

［5］杜希珍，高麗娜，趙海山，等.規(guī)?；i場(chǎng)母豬群豬瘟抗體血清學(xué)調(diào)查［J］.豬業(yè)科學(xué)，2009，26（6）：86-88.

［6］曹劍，張磊，李巖.規(guī)?；i場(chǎng)仔豬豬瘟母源抗體效價(jià)動(dòng)態(tài)檢測(cè)［J］.新疆農(nóng)墾科技，2012（2）：26-27.

S858.28

A

1673-4645（2016）07-0046-04

2016-05-05

新疆石河子市農(nóng)業(yè)科技攻關(guān)項(xiàng)目（2013NY04）

劉鴿（1986-），山東淄博人，碩士研究生，主要從事動(dòng)物傳染病診斷與防治工作，E-mail：1539881644@qq.com

屈勇剛（1971-），男，陜西渭南人，副教授，主要從事動(dòng)物傳染病診斷與防治工作，E-mail：quyonggang@shzu.edu.cn