郝興亮

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痰菌陰性肺結(jié)核患者血清白細胞介素-6、白細胞介素-10、白細胞介素-23、骨橋蛋白水平的動態(tài)變化及臨床意義

郝興亮

摘要：目的 探討痰菌陰性（菌陰）肺結(jié)核患者治療前后血清白細胞介素（IL）-6、IL-10、IL-23、骨橋蛋白（OPN）動態(tài)變化及其臨床意義。方法 選擇初治的菌陰肺結(jié)核患者43例，正常對照組40例，應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定正常對照組和菌陰肺結(jié)核組治療前、治療2個月后、治療4個月后、治療6個月后血清IL-6、IL-10、IL-23、OPN的水平。結(jié)果 菌陰肺結(jié)核組治療前血清IL-6、IL-10、IL-23、OPN水平均明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。經(jīng)過治療2個月后患者血清IL-6、IL-10、IL-23、OPN水平開始降低，與治療前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。治療4個月后血清IL-10和OPN接近正常水平，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；IL-6、IL-23水平進行性降低，治療6個月后接近正常水平，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 菌陰肺結(jié)核治療過程中動態(tài)觀察IL-6、IL-10、IL-23、OPN水平，可作為評估病情轉(zhuǎn)歸及抗結(jié)核藥物治療有效性的敏感指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：痰菌陰性肺結(jié)核； 白細胞介素-6； 白細胞介素-10； 白細胞介素-23； 骨橋蛋白； 炎性反應(yīng)

結(jié)核免疫主要是由T淋巴細胞所介導(dǎo)的細胞免疫反應(yīng)，多種細胞因子參與了結(jié)核病的免疫應(yīng)答及免疫發(fā)病過程，可以說結(jié)核病是一種免疫紊亂性疾病［1］。患者體內(nèi)細胞因子的水平一定程度上能反映免疫狀態(tài)，其變化趨勢可能對判斷患者病情發(fā)展趨勢及藥物療效有重要指導(dǎo)意義。為了揭示肺結(jié)核炎性反應(yīng)水平，研究促炎因子和抑炎因子在結(jié)核病發(fā)病中的作用，本研究動態(tài)觀察痰菌陰性（菌陰）肺結(jié)核患者治療過程中血清白細胞介素（IL）-6、IL-10、IL-23、骨橋蛋白（OPN）水平的變化，探討細胞因子對判斷菌陰肺結(jié)核病情變化、治療效果的臨床價值。

1　材料與方法

1.1對象

選取2013年1月－2014年5月我院確診初治菌陰肺結(jié)核組43例（男23，女20），年齡18～70歲，平均（40.5±6.5）歲；健康對照組40例（男20，女20），年齡20～68歲，平均（38.9±5.8）歲。所有研究對象均無人類免疫缺陷病毒感染，未使用免疫抑制劑或增強劑，無嚴重肝臟、腎臟功能衰竭及陳舊性結(jié)核病病灶。肺結(jié)核診斷主要是根據(jù)臨床癥狀、痰檢及影像檢查并參照肺結(jié)核的診斷標(biāo)準排除其他疾病后確診［2］。菌陰肺結(jié)核入組標(biāo)準：①具有典型的肺結(jié)核臨床癥狀和胸部X線表現(xiàn)。②抗結(jié)核治療有效。③臨床可排除其他非結(jié)核性肺部疾患。④直接痰涂片鏡檢抗酸桿菌陰性。⑤支氣管或肺部組織病理檢查證實結(jié)核性改變，出院后隨訪至少3個月仍支持肺結(jié)核的病例。健康對照組：單位體格檢查健康職工，要求無結(jié)核接觸史、無臨床癥狀、胸片檢查無異常表現(xiàn)的健康人群。

1.2方法

菌陰肺結(jié)核組患者均采用標(biāo)準化療方案，即2HRZE/4HR（H為異煙肼，R為利福平，Z為吡嗪酰胺，E為乙胺丁醇），分別于治療前，治療2、4、6個月后行肺部影像學(xué)檢查及抽取清晨空腹靜脈血4 mL，2 500 r/min離心20 min，收集上清液保存于-70 ℃冰箱待測。血清IL-6、IL-10、IL-23、 OPN測定采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SAS 13.0 統(tǒng)計軟件進行分析。計量資料以x±s 表示。菌陰肺結(jié)核組治療前與對照組的比較采用獨立樣本t檢驗；治療前與治療2、4、6個月后各項指標(biāo)的比較采用單因素方差分析。

2　結(jié)果

2.1臨床觀察

菌陰肺結(jié)核組治療前具有咳嗽、咯痰、咯血、低熱、盜汗等呼吸道癥狀及結(jié)核中毒癥狀，影像學(xué)表現(xiàn)為云絮狀、斑片狀、結(jié)節(jié)樣陰影及空洞影；經(jīng)過治療2個月后呼吸道癥狀及中毒癥狀均消失，肺部影像學(xué)病變均有好轉(zhuǎn)改善，肺部陰影縮小、空洞影縮??；經(jīng)過治療6個月后，5例患者肺部影像學(xué)遺留纖維灶、結(jié)節(jié)影，其余患者病變完全吸收，無原發(fā)耐藥病例。

2.2菌陰肺結(jié)核組治療前與對照組血清IL-6、IL-10、IL-23、OPN水平比較

菌陰肺結(jié)核組治療前血清IL-6、IL-10、IL-23、OPN水平均明顯高于正常對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.3菌陰肺結(jié)核組治療前后血清IL-6、IL-10、IL-23、OPN水平比較

經(jīng)過治療2個月后患者血清IL-6、IL-10、IL-23、OPN水平開始降低，與治療前比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。治療4個月后血清IL-10、OPN水平均較治療前顯著降低（P＜0.05），接近正常水平，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），治療6個月后檢測血清IL-10、OPN水平仍接近正常，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）；IL-6、IL-23水平進行性降低，治療2、4、6個月后兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，治療6個月后接近正常水平，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表1　兩組血清IL-6、IL-10、IL-23、OPN水平比較Table 1 Serum IL-6， IL-10， IL-23 and osteopontin levels in patients with smear-negative pulmonary tuberculosis versus healthy individuals

表2　菌陰肺結(jié)核組治療前后及與對照組血清IL-6、IL-10、IL-23、OPN水平比較Table 2 Serum IL-6， IL-10， IL-23 and osteopontin levels in healthy individuals and the patients with smear-negative pulmonary tuberculosis before and after treatment

3　討論

肺結(jié)核是由結(jié)核分枝桿菌引起的機體炎性反應(yīng)和變態(tài)反應(yīng)共存的感染性疾病，感染過程以免疫反應(yīng)占主導(dǎo)地位。結(jié)核病的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸不僅取決于細菌的毒力和數(shù)量，在很大程度上取決于機體的免疫狀態(tài)［3］。結(jié)核分枝桿菌感染人體后，Th1細胞通過分泌干擾素（IFN）-γ激活巨噬細胞而吞噬病原體并將抗原呈遞給T淋巴細胞，起動獲得性細胞免疫反應(yīng)，其中Th1型細胞因子包括IFN-γ、IL-2、IL-12、IL-6、IL-18、IL-23等，主要參與細胞免疫，與結(jié)核的保護性免疫反應(yīng)密切相關(guān)。Th2細胞主要參與體液免疫反應(yīng)，并拮抗Th1型反應(yīng)，伴隨病理性免疫反應(yīng)損傷，Th2型細胞因子包括IL-4、IL-5、IL-10等［4］。結(jié)核病的發(fā)生、發(fā)展與體內(nèi)細胞因子及Th1/Th2應(yīng)答失衡密切相關(guān)，諸多細胞因子在結(jié)核病的保護性免疫反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。

機體感染結(jié)核桿菌后，在巨噬細胞和淋巴細胞活化的早期階段，就能產(chǎn)生大量的OPN［5］。OPN作為一種促炎因子，可誘導(dǎo)Th1介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，使機體免疫反應(yīng)向有利于清除結(jié)核桿菌的方向發(fā)展，增加機體防御結(jié)核感染的能力。IL-10是由Th2、Th0、單核巨噬細胞、B細胞等產(chǎn)生的抑炎細胞因子，IL-10可以降低CD4 T細胞和CD8 T細胞的活性，下調(diào)單核巨噬細胞的協(xié)同刺激分子的表達，抑制細胞介導(dǎo)的抗結(jié)核感染免疫反應(yīng)，減少抗結(jié)核分枝桿菌感染反應(yīng)中起保護作用的TNF-α、抗原特異性IFN-γ產(chǎn)生［6］。有研究表明IL-10通過T細胞抑制IFN-γ的合成，IL-10產(chǎn)生量與結(jié)核免疫力缺乏相關(guān)［7］。本研究為菌陰肺結(jié)核患者治療前血清IL-10、OPN水平顯著高于正常對照組，經(jīng)過正規(guī)強化抗結(jié)核治療2個月后，隨著肺結(jié)核病變逐漸得到控制，血清IL-10、OPN水平開始下降，抗結(jié)核治療4個月后血清IL-10、OPN水平逐漸降至正常水平。說明IL-10、OPN參與了肺結(jié)核的發(fā)病過程，表明了Th1/Th2失衡的存在，隨著強化治療，且治療有效，血清IL-10、OPN水平基本接近正常，由此可以推測，機體的免疫狀況向正常方向轉(zhuǎn)變，Th1/Th2失衡得到糾正。我們認為IL-10、OPN是反映肺結(jié)核病變活動性的敏感指標(biāo)，動態(tài)檢測其變化對了解患者機體免疫狀態(tài)、判斷肺結(jié)核活動性和病情轉(zhuǎn)歸有一定臨床意義。

IL-6是由激活的T細胞、巨噬細胞等細胞產(chǎn)生的一種促炎細胞因子，機體感染結(jié)核分枝桿菌后，IL-6可以誘導(dǎo)保護性T細胞的產(chǎn)生，激活T細胞分泌IFN-γ，加強IFN-γ的作用［8］，增加炎性細胞因子產(chǎn)生并提高炎性反應(yīng)強度 。IL-23是一種新的免疫調(diào)節(jié)因子，是IL-12家族的新成員，在促進CD4 T細胞的增殖、T細胞分泌IFN-γ及抗分枝桿菌的感染中發(fā)揮了重要作用。 VERRECK等［9］發(fā)現(xiàn)分枝桿菌感染產(chǎn)生細胞免疫時，Ⅰ型巨噬細胞能分泌高IL-23水平，以促進機體的細胞免疫功能，并以IFN-γ作為第二信使促進被認為具有抗結(jié)核作用的IL-23的分泌。本研究中菌陰肺結(jié)核患者血清IL-6、IL-23水平明顯高于正常對照組，動態(tài)觀察二者在治療過程中變化，治療2、4和6個月后，血清IL-6、IL-23水平進行性降低，且兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，治療6個月后接近正常水平。此結(jié)果表明IL-6、IL-23在肺結(jié)核的免疫反應(yīng)中起作用，肺結(jié)核化療后，結(jié)核分枝桿菌被藥物清除，炎性應(yīng)激原減少，促炎因子IL-6、IL-23下降，炎性反應(yīng)減輕，由此推斷動態(tài)檢測IL-6、IL-23水平可能對肺結(jié)核的發(fā)展及預(yù)后都有一定的意義。IL-10、OPN在治療4個月后達到正常水平，IL-6、IL-23治療6個月后達到正常水平，提示血清OPN、IL-10檢測可能較IL-6、IL-23更為敏感。本研究各促炎細胞因子和抑炎細胞因子治療前后表達水平變化機制可能為：當(dāng)機體受到結(jié)核分枝桿菌侵襲時，機體內(nèi)結(jié)核性炎性反應(yīng)強烈，產(chǎn)生大量的促炎因子如IL-6、IL-23、OPN等，血清中促炎因子急劇升高造成結(jié)核中毒癥狀、呼吸道癥狀，肺部病灶局部炎性反應(yīng)表現(xiàn)為細胞浸潤、吞噬，甚至發(fā)生肺組織破壞性病變；而此時IL-10等抑炎因子也大量產(chǎn)生，能夠抑制細胞介導(dǎo)的相關(guān)免疫應(yīng)答，下調(diào)炎性反應(yīng)強度，抑制促炎因子引起過度的炎性反應(yīng)造成對機體的免疫損傷，減少結(jié)核灶液化壞死及空洞的形成，經(jīng)過抗結(jié)核化療后，結(jié)核分枝桿菌被抑制或殺滅，炎性反應(yīng)減弱，促炎細胞因子及抑炎細胞因子產(chǎn)生減少，二者恢復(fù)平衡。

綜上所述，本研究表明IL-6、IL-10、IL-23、OPN細胞因子參與了菌陰肺結(jié)核的免疫病理機制，與疾病發(fā)展及治療過程動態(tài)相關(guān)；動態(tài)監(jiān)測血清IL-6、IL-10、IL-23、OPN變化，可作為評估病情轉(zhuǎn)歸及抗結(jié)核藥物治療有效性的臨床參考指標(biāo)，對臨床病情判斷有一定指導(dǎo)意義。

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中圖分類號：R521

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：1009-7708（2016）03-0359-04

DOI：10.16718/j.1009-7708.2016.03.019

收稿日期：2015-07-03 修回日期：2015-08-06

作者單位：勝利油田中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科，山東東營 257034。

作者簡介：郝興亮（1980—），男，主治醫(yī)師，碩士，主要從事呼吸系統(tǒng)感染性疾病研究。

通信作者：郝興亮，E-mail：haoxingliang1980@163.com。

Changing patterns of serum IL-6， IL-10， IL-23 and osteopontin levels in patients with smear-negative pulmonary tuberculosis and their clinical implication

HAO Xingliang. （Department of Respiratory Diseases， Shengli Oilfield Central Hospital， Dongying Shandong 257034， China）

Abstract:Objective To investigate the changing patterns of serum IL-6， IL-10， IL-23 and osteopontin in patients with smearnegative pulmonary tuberculosis before and after treatment and their clinical implication. Methods A total of 43 patients with smearnegative pulmonary tuberculosis and 40 healthy controls were included in this study. Enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was conducted to measure the levels of serum IL-6， IL-10， IL-23 and osteopontin in healthy individuals and patients before and after antituberculosis treatment for 2， 4 and 6 months. Results The levels of serum IL-6， IL-10， IL-23 and osteopontin in patients with smearnegative pulmonary tuberculosis were signifcantly higher than those in control group （P＜0.05）. After treatment for two months， the levels of serum IL-6， IL-10， IL-23 and osteopontin signifcantly decreased in patients with smear-negative pulmonary tuberculosis （P ＜0.05）. The serum IL-10 and osteopontin were nearly restored to normal levels in patients after four months treatment and there were no signifcant difference compared with those in control group （P＞0.05）. The levels of serum IL-6 and IL-23 gradually decreased after treatment， and restored to normal at six months. There was no signifcant difference compared with those in control group （P＞0.05）. Conclusions Serum IL-6， IL-10， IL-23 and osteopontin levels in patients with smear-negative pulmonary tuberculosis can be used as sensitive indicators for assessment of tuberculosis disease activity and therapeutic effect of anti-tuberculosis drugs.

Key words:smear-negative pulmonary tuberculosis； interleukin-6； interleukin-10； interleukin-23； osteopontin；infammatory response