劉 紅（青島第八人民醫(yī)院藥品采購辦，山東 青島 266000）

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不同產(chǎn)地白花蛇舌草中東莨菪亭和耳草酮B的含量分析比較

劉 紅
（青島第八人民醫(yī)院藥品采購辦，山東 青島 266000）

目的 建立HPLC法對不同產(chǎn)地白花蛇舌草藥材中東莨菪亭和耳草酮B含量進(jìn)行了考察研究，為藥材的開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。方法 應(yīng)用高效液相色譜法進(jìn)行含量測定，色譜柱：Agilent Eelipse XDB-C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流動相：甲醇-0.1%冰醋酸水溶液，梯度洗脫；檢測波長：385 nm；柱溫：30 ℃；流速：10 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。結(jié)果 江西產(chǎn)白花蛇舌草藥材中東莨菪亭和耳草酮B含量均高于其他產(chǎn)地，其次為湖北、安徽，廣西產(chǎn)含量最低。結(jié)論 不同產(chǎn)地的白花蛇舌草中東莨菪亭和耳草酮B的含量有較大的差異，通過方法學(xué)考察驗(yàn)證，該方法精密度高、穩(wěn)定性良好，方法可行。

白花蛇舌草；東莨菪亭；耳草酮B；含量測定

白花蛇舌草具清熱解毒，活血利尿之功效。臨床用于治療扁桃體炎、咽喉炎、尿路感染、盆腔炎、肝炎、菌痢、闌尾炎、毒蛇咬傷等病癥療效顯著?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，白花蛇草可增強(qiáng)機(jī)體免疫力，抑制腫瘤細(xì)胞生長，對金黃色葡萄球菌、肺炎球菌等多鐘致病菌均有不同程度的抑制作用［1］。本研究在前人研究工作基礎(chǔ)上，采用高效液相色譜方法對不同產(chǎn)地白花蛇舌草東莨菪亭和耳草酮B含量進(jìn)行了測定，通方法學(xué)考察驗(yàn)證，該方法精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率試驗(yàn)良好，方法可行，為今白花蛇舌草東莨菪亭和耳草酮B的研究提供了依據(jù)，同時也為藥材的開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1藥材：白花蛇舌草藥材購于同仁堂，醫(yī)藥大廈等，經(jīng)鑒定所購藥材均為茜草科植物白花蛇舌草 Hedyotis diffusa Willd. 的干燥全草。白花蛇舌草產(chǎn)地見表1。

表1　白花蛇舌草藥材來源

1.2試劑：東莨菪亭標(biāo)準(zhǔn)品購于中國藥品生物制品檢定所，批號為110753-201314，耳草酮B標(biāo)準(zhǔn)品為實(shí)驗(yàn)室分離純化所得，甲醇為色譜純，水為超純水，冰醋酸、乙醇等其他試劑均為分析純。

1.3儀器：Agilent高效液相色譜儀（美國惠普安捷倫公司）；TU-1810紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；AB-135型萬分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；色譜柱： Agilent Eelipse XDB-C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流動相：甲醇-0.1%冰醋酸水溶液，梯度洗脫；檢測波長：385 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。

甲醇為流動相A，0.1%冰醋酸水溶液為流動相B，梯度洗脫方法見表2。

2.2標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備：精密稱取東莨菪亭和耳草酮B對照品，加適量甲醇配制成每1 mL含東莨菪亭80 μg、耳草酮B60 μg的混合對照品溶液。

表2　梯度洗脫方法

2.3供試品溶液制備：取白花蛇舌草藥材，粉碎過120目篩。精密稱取白花蛇舌草樣品粉末1.0 g，加入帶有塞得錐形瓶中，量取甲醇溶液100 mL，加入至錐形瓶中，稱定重量，超聲30 min，取出，放至室溫，再稱定重量，加入甲醇不足減少的重量，混勻，過濾，量取濾液10 mL，加入50 mL棕色容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，混勻，即得供試品溶液［2］。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別精密量取上述東莨菪亭和耳草酮B標(biāo)準(zhǔn)品溶液4 μL、8 μL、10 μL、14 μL、16 μL注入高效液相色譜儀，記錄峰面積數(shù)值，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得到線性回歸方程為東莨菪亭：Y=383555X+508227，r=0.9998；耳草酮B：Y=271976X+916648，r=0.9996。結(jié)果表明，東莨菪亭在0.047～0.544 μg范圍內(nèi)具良好的線性關(guān)系。耳草酮B在0.058～0.924 μg范圍內(nèi)具良好的線性關(guān)系。線性關(guān)系見圖1。

圖1　線性關(guān)系圖

2.4.2精密度試驗(yàn)：精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)重復(fù)測定6次，結(jié)果顯示，東莨菪亭和耳草酮B標(biāo)準(zhǔn)品和樣品RSD值分別為0.32%、2.08%，表明儀器精密度良好。

2.4.3穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密量取供試品溶液，每隔2 h測定一次峰面積，測定12 h，根據(jù)測得東莨菪亭和耳草酮B峰面積，計(jì)算東莨菪亭和耳草酮B含量的平均值及RSD值。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果顯示，在12 h內(nèi)RSD值分別為1.02%、1.58%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.4.4重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取白花蛇舌草供試品溶液6份，分別測定峰面積值。計(jì)算總東莨菪亭和耳草酮B的含量及RSD值，重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果顯示，東莨菪亭和耳草酮B含量的RSD值分別為1.83%、1.65%，表明該方法重復(fù)性較好。

2.4.5回收率試驗(yàn)：精密稱取同一批次白花蛇舌草供試品溶液，精密加入東莨菪亭和耳草酮B標(biāo)準(zhǔn)品，依次測定，計(jì)算回收率、RSD值。結(jié)果顯示，所有供試品回收率均介于95%～105%，樣品的平均回收率為99.98%，RSD值為0.092%，＜3%，說明本法準(zhǔn)確性較好，方法可行。

2.4.6含量測定：取不同產(chǎn)地的白花蛇舌草供試品，測定相應(yīng)樣品的峰面積，根據(jù)對照品與樣品的峰面積計(jì)算東莨菪亭和耳草酮B含量，結(jié)果見表3。

表3　不同產(chǎn)地白花蛇舌草東莨菪亭和耳草酮B含量（μg/g）

3　討 論

以往研究中較常用紫外可見分光光度法測定白花蛇舌草中所含成分含量，本研究應(yīng)用高效液相色譜儀，建立HPLC法對江西、湖北、安徽等不同產(chǎn)地的白花蛇舌草藥材進(jìn)行了東莨菪亭和耳草酮B含量測定研究，為今白花蛇舌草東莨菪亭和耳草酮B的研究提供了依據(jù)，測量前取東莨菪亭和耳草酮B對照品、供試品及空白溶液，在200～400 nm波長范圍進(jìn)行光譜掃描。供試品和對照品在385 nm處有最大吸收，而空白溶液無吸收，測得數(shù)據(jù)與查詢相關(guān)報(bào)道文獻(xiàn)接近。白花蛇舌草藥材提取液東莨菪亭和耳草酮B最大吸收波長與對照品最大吸收波長一樣，所以將385 nm作為測定波長。測定結(jié)果表明，不同產(chǎn)地白花蛇舌草藥材中東莨菪亭和耳草酮B的含量有較大的差異，江西白花蛇舌草東莨菪亭和耳草酮B含量最高，分別達(dá)到9.7 μg/g、15.3 μg/g；其次是湖北、安徽；含量最低的是廣西的藥材，東莨菪亭和耳草酮B含量為3.2 μg/g、0.7 μg/g。分析存在這種差異的原因，可能是由于不同地區(qū)的氣候差異、人為環(huán)境等因素引起的［3］。相信隨著對白花蛇舌草研究的跟進(jìn)一步的研究，白花蛇舌草一定會在醫(yī)藥領(lǐng)域、化妝品領(lǐng)域、食品等相關(guān)領(lǐng)域發(fā)揮越來越大的作用。

［1］ 楊嫻,劉汝青,杜德榮,等.白花蛇舌草總黃酮對黑色素瘤A375和B16細(xì)胞增殖抑制作用的研究［J］.世界中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011,6 （10）：844-846.

［2］ 溫麗榮,姚志紅,陳妍,等.高效液相色譜法同時測定白花蛇舌草中6個成分的含量［J］.中國藥學(xué)雜志,2014,49（5）：406-411.

［3］ 馮穎,何俊,劉虹,等.不同產(chǎn)地桑葉中6種化學(xué)成分含量的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用同時測定［J］.時珍國醫(yī)國藥,2013,24（3）：572-574.

R282.710.3

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1671-8194（2016）20-0040-02