張玨，蔡鴻寧，高晗，鄒苗，吳緒峰

(湖北省婦幼保健院，武漢430070)

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不同卵巢腫瘤組織中KI-67、P53、C23、EGFR蛋白的表達(dá)變化及其意義

張玨，蔡鴻寧，高晗，鄒苗，吳緒峰

(湖北省婦幼保健院，武漢430070)

目的觀察不同卵巢腫瘤組織中Ki-67核抗原(Ki-67)、野生型P53抑癌基因(P53)、核仁蛋白(C23)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)蛋白的表達(dá)變化，并探討其意義。方法 行手術(shù)治療的卵巢腫瘤患者139例，其中卵巢良性腫瘤46例、卵巢交界性腫瘤35例、卵巢癌58例，術(shù)中留取腫瘤組織及正常卵巢組織，采用免疫組化法檢測(cè)Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白。結(jié)果正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織、卵巢交界性腫瘤組織、卵巢癌組織中Ki-67蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為0、11.1%、74.5%、88.5%，P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為0、2.2%、28.6%、72.4%，C23蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為6.7%、19.6%、71.4%、91.4%，EGFR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為43.3%、60.9%、88.6%、94.8%，不同卵巢腫瘤組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于正常卵巢組織(P均<0.05)；卵巢癌組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于卵巢良性腫瘤組織和卵巢交界性腫瘤組織(P均<0.05)；卵巢交界性腫瘤組織中P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于卵巢良性腫瘤組織(P<0.05)。卵巢癌組織中P53與C23、P53與EGFR、Ki-67與C23、Ki-67與EGFR表達(dá)均呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.220、0.195、0.231、0.217，P均<0.05)。結(jié)論 Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織、卵巢交界性腫瘤組織、卵巢癌組織中表達(dá)逐漸增高，Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白的異常表達(dá)可能參與了卵巢癌的發(fā)病。

卵巢腫瘤；卵巢癌；核仁蛋白；野生型P53抑癌基因；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體；Ki-67核抗原

卵巢癌起病隱匿，70%的患者確診時(shí)已屬晚期，5年生存率僅為10%[1]。盡管經(jīng)過多年研究，卵巢癌基因靶向治療呈現(xiàn)出較好前景，但卵巢癌的高度異質(zhì)性給治療造成困難，影響效果[2,3]。目前關(guān)于Ki-67核抗原(Ki-67)、野生型P53抑癌基因(P53)、核仁蛋白(C23)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)與卵巢癌關(guān)系的研究較多[4～6]，但結(jié)論不盡相同，對(duì)于四項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)也少有報(bào)道。為此，本研究觀察了不同卵巢腫瘤組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白的表達(dá)變化，探討四種蛋白在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料2012年1月～2014年12月在湖北省婦幼保健院行手術(shù)治療的卵巢腫瘤患者139例，年齡17～72歲、中位年齡46歲，其中卵巢良性腫瘤46例、卵巢交界性瘤35例、卵巢癌58例。所有病例均經(jīng)術(shù)后病理檢查證實(shí)。另取同期行卵巢切除且經(jīng)病理檢查證實(shí)無(wú)卵巢惡性腫瘤患者的正常卵巢組織30例份作為對(duì)照，患者一般情況良好，無(wú)術(shù)后并發(fā)癥。

1.2Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白檢測(cè)采用免疫組化Elivision二步法。濃縮型Ki-67、P53、C23、EGFR兔抗人單克隆抗體購(gòu)自Sigma公司，Elivision super試劑盒及DAB顯色試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)公司。染色操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。Ki-67抗體稀釋度為1∶200，P53抗體稀釋度為1∶200，C23抗體稀釋度為1∶100，EGFR抗體稀釋度為1∶200。用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。EGFR定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，Ki-67、P53、C23定位于細(xì)胞核，以細(xì)胞出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為蛋白表達(dá)陽(yáng)性，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比，陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤10%為陰性、>10%為陽(yáng)性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1不同卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白表達(dá)變化不同卵巢腫瘤組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于正常卵巢組織(P均<0.05)；卵巢癌組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于卵巢良性腫瘤組織和卵巢交界性腫瘤組織(P均<0.05)；卵巢交界性腫瘤組織中P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于卵巢良性腫瘤組織(P<0.05)。詳見表1。

表1　不同卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白表達(dá)比較

注：與正常卵巢組織相比，*P<0.05；與卵巢癌組織相比，#P<0.05；與卵巢良性腫瘤組織相比，ΔP<0.05。

2.2卵巢癌組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白表達(dá)的相關(guān)性卵巢癌組織中，P53、C23蛋白同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)率為72.4%，P53、EGFR蛋白同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)率為74.1%，Ki-67、C23蛋白同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)率為92.2%，Ki-67、EGFR蛋白同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)率為94.0%。卵巢癌組織中P53與C23、P53與EGFR、Ki-67與C23、Ki-67與EGFR表達(dá)均呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.220、0.195、0.231、0.217，P均<0.05)。

3　討論

腫瘤發(fā)病是細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的結(jié)果，在這一過程中有多種基因出現(xiàn)異常表達(dá)，包括多個(gè)癌基因激活和(或)抑癌基因失活。卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程中也有多個(gè)癌基因和抑癌基因異常表達(dá)，但其具體發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明。

P53基因是迄今為止發(fā)現(xiàn)的與人類腫瘤相關(guān)性最高的抑癌基因，因基因產(chǎn)物定位于細(xì)胞核，是一種細(xì)胞周期相關(guān)蛋白[7,8]。P53蛋白分為野生型和突變型兩種，野生型在正常細(xì)胞中呈低水平表達(dá)，突變型在腫瘤細(xì)胞中常高表達(dá)。P53蛋白異常表達(dá)與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化、增殖及腫瘤細(xì)胞惡性表型有關(guān)[9,10]。本研究中，卵巢腫瘤惡性程度越高，P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率越高，提示P53異常表達(dá)可能參與了卵巢癌的發(fā)病。

Ki-67是一種與細(xì)胞周期相關(guān)的核增殖標(biāo)志基因，Ki-67表達(dá)水平對(duì)評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖狀態(tài)、研究腫瘤生物學(xué)行為有重要意義，Ki-67是判斷腫瘤預(yù)后的可靠指標(biāo)之一[11]。本研究結(jié)果顯示，卵巢癌組織中Ki-67蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于卵巢良性腫瘤組織和卵巢交界性腫瘤組織，提示在卵巢腫瘤發(fā)生及進(jìn)展過程中，Ki-67表達(dá)增高，細(xì)胞增殖活性逐漸增強(qiáng)。

已有研究證實(shí)，C23在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，其在腫瘤細(xì)胞及其他快速分裂的細(xì)胞中表達(dá)增高，而在非分裂細(xì)胞或分裂慢的細(xì)胞中低表達(dá)，因此，C23常被用來(lái)評(píng)估腫瘤細(xì)胞增殖程度，與腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)[12～14]。本研究中，C23蛋白在卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織和卵巢交界性腫瘤組織，與相關(guān)研究結(jié)果一致；且我們還發(fā)現(xiàn)C23、EGFR蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)協(xié)同上升趨勢(shì)，推測(cè)C23參與了腫瘤新生血管的形成及其調(diào)控[14]。

EGFR是一種具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期調(diào)控。正常情況下EGFR表達(dá)水平較低，但在病理狀態(tài)尤其是惡性腫瘤組織中過表達(dá)[15]。本研究結(jié)果顯示，EGFR陽(yáng)性表達(dá)率隨著卵巢腫瘤級(jí)別的升高而增高，提示EGFR異常表達(dá)與卵巢腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切聯(lián)系。文獻(xiàn)[16]報(bào)道EGFR與配體結(jié)合可誘導(dǎo)G0/G1期細(xì)胞進(jìn)入DNA合成期，促使受體激活，可導(dǎo)致細(xì)胞無(wú)自主性增殖。EGFR高表達(dá)對(duì)卵巢癌的增殖及浸潤(rùn)有促進(jìn)作用，可作為評(píng)估卵巢癌細(xì)胞增殖活性及患者預(yù)后的參考指標(biāo)。

本研究分析了卵巢癌組織中P53、Ki-67、C23、EGFR蛋白表達(dá)的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)四項(xiàng)指標(biāo)中兩兩表達(dá)均呈正相關(guān)關(guān)系。EGFR為細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的上游因子，推測(cè)EGFR與C23具有協(xié)同作用[17]；EGFR的過表達(dá)可能先于Ki-67，并對(duì)Ki-67的表達(dá)有正向調(diào)節(jié)作用[18,19]，且EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑所激活的下游轉(zhuǎn)錄因子可能誘導(dǎo)Ki-67的過表達(dá)；Ki-67可激活細(xì)胞有絲分裂，使當(dāng)P53基因發(fā)生突變時(shí)可改變其他DNA結(jié)合能力，從而削弱Ki-67等細(xì)胞增殖相關(guān)基因表達(dá)抑制，使細(xì)胞過度增殖。我們推測(cè)，卵巢癌的發(fā)生發(fā)展可能需要兩種甚至更多癌基因和相關(guān)蛋白的協(xié)同作用，這些協(xié)同作用的機(jī)制及對(duì)卵巢癌生物學(xué)行為的影響尚有待深入研究。

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2013年武漢市中青年醫(yī)學(xué)骨干人才培養(yǎng)項(xiàng)目(2014-47)。

吳緒峰(E-mail: zwuxufeng@163.com)

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B

1002-266X(2016)21-0067-03

2015-12-28)