康紅剛張靜 王寶中 劉美榮聊城市人民醫(yī)院腫瘤科，山東聊城252

DC-CIK聯(lián)合放化療對(duì)小細(xì)胞肺癌患者免疫功能的影響

康紅剛#張靜 王寶中 劉美榮
聊城市人民醫(yī)院腫瘤科，山東聊城2520000

目的探討細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK）、樹突狀細(xì)胞（DC）免疫治療聯(lián)合放化療對(duì)小細(xì)胞肺癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響及療效。方法收集60例小細(xì)胞肺癌患者資料，其中32例患者采用DC-CIK聯(lián)合放化療（化療方案為依托泊苷+順鉑/依托泊苷+卡鉑/伊立替康+順鉑，放療方案為適形調(diào)強(qiáng)放療技術(shù)）為聯(lián)合治療組；28例進(jìn)行放化療的患者為對(duì)照組。治療結(jié)束2周后采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK細(xì)胞、Treg細(xì)胞及相關(guān)因子IFN-γ、IL-2、IL-10、TGF-β1的變化，并評(píng)價(jià)療效。結(jié)果聯(lián)合治療組IFN-γ治療后較治療前升高，IL-10、TGF-β1較治療前降低（P＜0.05）；聯(lián)合治療組患者外周血CD3+CD8+、CD3+CD4+、NK細(xì)胞治療后水平高于對(duì)照組（P＜0.05）；而Treg細(xì)胞、IL-10、TGF-β1治療后水平低于對(duì)照組（P＜0.05）。對(duì)照組患者外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK細(xì)胞治療后較治療前下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；細(xì)胞因子在治療前后無變化。雖然聯(lián)合組疾病控制率較對(duì)照組高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（87.50%vs 71.43%，P＞0.05）。結(jié)論自體DC-CIK治療可以改善小細(xì)胞肺癌聯(lián)合放化療患者的細(xì)胞免疫功能，是否能改善生存需進(jìn)一步研究。

DC-CIK；小細(xì)胞肺癌；過繼性免疫細(xì)胞治療；放化療

Oncol Prog，2016，14（5）

小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）是肺癌的一種主要類型，惡性程度高，侵襲性強(qiáng)，臨床進(jìn)展明顯快于非小細(xì)胞肺癌，預(yù)后差。目前主要治療方法為同步放化療，對(duì)于耐受差的患者可行序貫化放療。放化療對(duì)機(jī)體的免疫功能有一定的損傷［1］，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也可能通過免疫抑制而增加惡性腫瘤患者疾病進(jìn)程中復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的概率。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（cytokine induced killer，CIK）具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性和NK細(xì)胞的非MHC限制性殺滅腫瘤細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)，且增殖快，具有腫瘤識(shí)別能力，已經(jīng)作為新一代抗腫瘤過繼細(xì)胞免疫治療在臨床中廣泛應(yīng)用。樹突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）是目前所知的體內(nèi)功能最強(qiáng)大的專職抗原遞呈細(xì)胞，是唯一能激活幼稚T細(xì)胞的抗原遞呈細(xì)胞［2］，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切關(guān)聯(lián)。DC與CIK共培養(yǎng)可促進(jìn)CIK的增殖，并增強(qiáng)細(xì)胞免疫應(yīng)答的功能，從而發(fā)揮抗腫瘤的功能［3］。本研究通過檢測(cè)治療前后T細(xì)胞亞群比例及細(xì)胞因子水平的變化從而觀察DC-CIK聯(lián)合放化療對(duì)小細(xì)胞肺癌患者免疫功能的影響。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取聊城市人民醫(yī)院2012年5月至2014年3月收治的經(jīng)病理學(xué)檢查確診為小細(xì)胞肺癌的患者共60例，患者心臟、肝、腎功能可耐受化放療及生物治療，血象正常，Karnofsky評(píng)分≥70分。32例接受化放療及DC-CIK治療的患者為聯(lián)合治療組，28例單純行化放療患者為對(duì)照組，兩組臨床資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表1）

表1　兩組患者的臨床特征

1.2治療方案

兩組采用的化療方案：依托泊苷+順鉑/依托泊苷+卡鉑/伊立替康+順鉑，根據(jù)化療療效2～4個(gè)周期后行三維適形放療，放療后根據(jù)病情至少進(jìn)行2個(gè)周期化療。聯(lián)合治療組生物治療方案：在化療前采用單采機(jī)采集患者外周單個(gè)核細(xì)胞，體外培養(yǎng)DC及CIK，CIK經(jīng)DC誘導(dǎo)后將培養(yǎng)好的DC及CIK細(xì)胞回輸給患者。回輸時(shí)避開化療，分3次回輸（細(xì)胞數(shù)＞10×109/次），患者每個(gè)月進(jìn)行一次治療，直至病情進(jìn)展或放棄治療，至少完成3次治療。

1.3檢測(cè)指標(biāo)

在第一次回輸DC-CIK前及完成3次DC-CIK治療結(jié)束后2周抽血送檢，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞亞群：CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK細(xì)胞、Treg細(xì)胞的變化情況；應(yīng)用ELISA檢測(cè)治療前后γ-干擾素（interferon-γ，IFN-γ）、白介素-2（interleukin-2，IL-2）、白介素-10（interleukin-10，IL-10）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）變化情況。

1.4近期療效評(píng)價(jià)

按照RECIST實(shí)體瘤近期療效判定標(biāo)準(zhǔn)分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩(wěn)定（SD）、疾病進(jìn)展（PD）。治療結(jié)束后2周評(píng)價(jià)療效，疾病控制率=（CR+PR+SD）例數(shù)/總例數(shù)×100%，患者出院后醫(yī)院對(duì)其進(jìn)行定期跟蹤隨訪，統(tǒng)計(jì)每組病例的無疾病進(jìn)展時(shí)間（PFS）。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組患者治療前后外周血 TT細(xì)胞亞群水平的比較

兩組患者均完成了放化療，且治療前兩組免疫功能指標(biāo)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在放化療結(jié)束時(shí)，聯(lián)合治療組患者共接受3個(gè)周期以上的DC-CIK治療。治療后聯(lián)合治療組CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK細(xì)胞比例高于對(duì)照組，而Treg細(xì)胞比例低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。聯(lián)合治療組CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+比例治療后較治療前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），NK細(xì)胞比例比治療前升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)照組中CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK細(xì)胞治療后較治療前降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

表2　兩組患者外周血中T T細(xì)胞亞群水平的比較（%±s）

表2　兩組患者外周血中T T細(xì)胞亞群水平的比較（%±s）

注：*與同期對(duì)照組比較，P＜0.05；#與本組治療前比較，P＜0.05

指標(biāo)CD3+CD3+CD4+CD3+CD8+Treg細(xì)胞NK細(xì)胞聯(lián)合治療組（n=32）治療前61.41±10.05 31.82±7.21 33.12±5.02 6.03±0.16 14.70±4.87治療后64.14±12.51 33.61±9.12*36.15±7.76*3.40±0.14*23.31±4.21*#對(duì)照組（n=28）治療前62.10±4.12 32.25±7.01 32.42±2.32 5.97±0.18 15.20±3.35治療后49.36±9.82#21.03±7.54#20.83±2.12#4.96±0.13 8.31±4.16#

2.2兩組患者治療前后細(xì)胞因子水平比較

治療前兩組患者IFN-γ、IL-2、IL-10、TGF-β1水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療結(jié)束后2周時(shí)，聯(lián)合治療組IFN-γ水平較治療前升高，而IL-10和TGF-β1水平較治療前下降，且低于對(duì)照組治療后水平，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)照組各種細(xì)胞因子與治療前比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表3）

表3　兩組患者治療前后IFN-IFN-γ 、IL-IL-2 2、IL-IL-1010、TGF-TGF-β 1 1水平比較（pg/ml，±s）

表3　兩組患者治療前后IFN-IFN-γ 、IL-IL-2 2、IL-IL-1010、TGF-TGF-β 1 1水平比較（pg/ml，±s）

注：*與同期對(duì)照組比較，P＜0.05；#與本組治療前比較，P＜0.05

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2.3兩組療效的比較

聯(lián)合治療組中位隨訪時(shí)間12個(gè)月（8～24個(gè)月），中位PFS 6.3個(gè)月（4～11個(gè)月），其中17例尚在隨訪中；對(duì)照組中位隨訪時(shí)間9個(gè)月（6～24個(gè)月），中位PFS 5.1個(gè)月（3～10個(gè)月），其中13例尚在隨訪中；兩組PFS比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。聯(lián)合治療組的疾病控制率為87.50%，雖高于對(duì)照組的71.43%，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表4）

表4　兩組患者的近期療效

3　討論

小細(xì)胞肺癌惡性程度高，在確診的時(shí)候多數(shù)為局部晚期或廣泛期。對(duì)于局部晚期腫瘤，以放化療為主的綜合治療為主要治療手段，廣泛期則選擇化療或姑息減癥治療。近十余年，隨著免疫學(xué)及分子生物學(xué)在惡性腫瘤治療決策中的深入研究和廣泛應(yīng)用，免疫治療已成為腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。免疫治療通過提高機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞的能力而發(fā)揮作用，且不良反應(yīng)輕微，具有廣闊的研究和應(yīng)用前景。與其他惡性腫瘤相比，小細(xì)胞肺癌在免疫治療方面仍未取得突破，可能與確診時(shí)即出現(xiàn)較大的腫瘤負(fù)荷，復(fù)雜的腫瘤異質(zhì)性，缺乏特異性的治療靶點(diǎn)等有關(guān)。既往研究提示亦可能通過免疫治療來誘導(dǎo)小細(xì)胞肺癌患者的免疫應(yīng)答，從而達(dá)到抗腫瘤的目的［4］。

腫瘤患者自身免疫力較正常低，在進(jìn)行放化療后免疫力會(huì)進(jìn)一步降低［1］。DC-CIK是目前改善患者免疫力及抗腫瘤的常用免疫治療方法。DC和CIK是目前臨床上抗腫瘤過繼性細(xì)胞免疫治療的兩種常用細(xì)胞，前者識(shí)別腫瘤抗原，激活細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL），主導(dǎo)Th1型免疫應(yīng)答，后者通過細(xì)胞毒作用，分泌細(xì)胞因子（如IL-2、IL-12、IFN-γ等）及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等途徑殺傷腫瘤細(xì)胞。DC與CIK共培養(yǎng)后，既可促進(jìn)DC的成熟，又能促進(jìn)CIK的增殖，表達(dá)CD3+CD56+雙陽性的細(xì)胞增多，從而產(chǎn)生特異性和非特異性雙重抗腫瘤效應(yīng)，DC-CIK還可釋放炎性因子，如TNF、IFN-γ、GM-CSF等，不僅對(duì)腫瘤細(xì)胞有直接殺傷作用，而且還可以通過重建和提高患者全身的機(jī)體免疫功能，降低免疫抑制T細(xì)胞（Treg）及減少相關(guān)細(xì)胞因子（IL-10、TGF-β1），從而使其抑制T細(xì)胞的增殖、活性及使NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用降低［5］。DC-CIK已經(jīng)在非小細(xì)胞肺癌［6-7］、腎癌［8］、宮頸癌［9］、食管癌［10］、胃癌［11］等高抗原表達(dá)的中晚期惡性腫瘤中進(jìn)行臨床試驗(yàn)，研究結(jié)果均顯示DC-CIK細(xì)胞治療的不良反應(yīng)輕微，改善機(jī)體免疫力及抗腫瘤作用明顯，患者能獲得較長(zhǎng)的生存期，較高的疾病緩解率及生存質(zhì)量。

人體外周血淋巴細(xì)胞CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK細(xì)胞、Treg細(xì)胞、IL-2、IFN-γ、IL-10、TGF-β1等是反映人體特異性和非特異性細(xì)胞免疫及體液免疫功能的指標(biāo)［12］。本研究中聯(lián)合治療組治療后CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK細(xì)胞比例高于單純化放療組，而Treg細(xì)胞低于單純化療組，結(jié)果提示DC-CIK治療改善了聯(lián)合治療組患者的免疫。聯(lián)合治療組治療后與治療前比較，CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+細(xì)胞比例無明顯變化，NK細(xì)胞、IFN-γ較治療前升高，而IL-10、TGF-β1治療后較治療前降低，這一結(jié)果可能是因?yàn)镈C-CIK治療抵消了放化療對(duì)機(jī)體免疫功能的損傷。對(duì)照組患者雖然免疫抑制細(xì)胞、抑制性細(xì)胞因子治療前后變化不明顯，但NK細(xì)胞降低，考慮與腫瘤的免疫抑制及放化療的免疫抑制作用有關(guān)。研究表明DC-CIK細(xì)胞可以提高機(jī)體的細(xì)胞免疫及體液免疫功能，彌補(bǔ)了放化療對(duì)免疫功能的損傷，迅速增強(qiáng)人體免疫系統(tǒng)，提高患者自身抗腫瘤能力，延長(zhǎng)患者的生存期。這與國(guó)內(nèi)張俊萍等［13］的研究結(jié)果一致。

本研究結(jié)果顯示DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合放化療治療與單純放化療患者比較，聯(lián)合治療提高了疾病控制率及PFS時(shí)間，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。國(guó)內(nèi)鐘國(guó)成等［14］在晚期小細(xì)胞肺癌進(jìn)行DC-CIK細(xì)胞姑息治療中發(fā)現(xiàn)患者免疫功能好轉(zhuǎn)，且反應(yīng)率比姑息治療組提高。本研究結(jié)果與其改善免疫功能的結(jié)果一致。Ding等［15］在小細(xì)胞肺癌進(jìn)行DC-CIK維持治療的臨床試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)局限期小細(xì)胞肺癌患者中PFS無差異，但提高了OS；而廣泛期患者PFS及OS都有提高。以上兩項(xiàng)關(guān)于小細(xì)胞肺癌的研究，客觀緩解率及PFS都有改善，但本研究未得到陽性結(jié)果，分析其原因可能與選擇的患者情況有關(guān)，所有的患者都為初治，且小細(xì)胞肺癌對(duì)放化療都比較敏感，且與病例數(shù)較少有關(guān)，需要進(jìn)一步延長(zhǎng)隨訪時(shí)間及擴(kuò)大樣本量。

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The effect of DC-CIK combined with chemoradiotherapy on the immune function of SCLC patiennttss

KANG Hong-gang#ZHANG Jing WANG Bao-zhong LIU Mei-rong
Department of Oncology，People's Hospital of Liaocheng，Liaocheng 252000，Shandong，China

ObjectivectiveTo evaluate the effect of dendritic cell（DC）-cytokine induced killer cells（CIK）combined with chemoradiotherapy in T-lymphocyte subsets of small cell lung cancer（SCLC）patients.Methodethod60 patients with SCLC were included in this study，in which 32 patients who were treated by DC-CIK+chemoradiotherapy（etoposide/irinotecan+ cisplatin/carboplatin；conformal modulating radiotherapy）were stratified as the study group；another 28 patients were treated with chemoradiotherapy alone during the same period，which was the control group.Flow cytometry was applied to detect the changes of CD3+，CD3+CD4+，CD3+CD8+，NK cell，Treg cell and related cytokines of IFN-γ，IL-2，IL-10，TGF-β1 in peripheral blood.ResultesultThe IFN-γ level was increased（P＜0.05），while IL-10 and TGF-β1 levels were significantly decreased after treatment in study group（P＜0.05）；the levels of CD3+CD8+，CD3+CD4+，and NK were higher in study group than that of control group after treatment（P＜0.05）；furthermore，the levels of Treg cell and IL-10，TGF-β1 were significantly lower in study group as compared with control group（P＜0.05）；in the control group，the levels of CD3+，CD3+CD4+，CD3+CD8+，and NK cells were significantly decreased after treatment（P＜0.05），while the cytokines remained stable.The study group had a higher though insignificant disease control rate as compared with control group （87.50%vs 71.43%，P＞0.05）.ConclusionusionTreatment with autologous DC-CIK therapy combined with chemoradiotherapy improve the immune function of patients with small cell lung cancer，while further study is needed to determine the potential survival benefits.

rdsDC-CIK；small cell lung cancer；adoptive immune cell therapy；chemoradiotherapy

R734. 2

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.05.17

（corresponding author），郵箱：sdkhg80@126.com

2015-11-05）