蘇震李建玲滕小慧夏嘉鼎李汝泓#承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院重癥醫(yī)學科，麻醉科，河北承德 67承德市中心醫(yī)院骨傷科，河北承德 67

膀胱癌CD34及podoplanin表達情況與淋巴結轉移及組織浸潤的關系分析

蘇震1李建玲2滕小慧3夏嘉鼎1李汝泓2#
承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院1重癥醫(yī)學科，2麻醉科，河北承德 0670003承德市中心醫(yī)院骨傷科，河北承德 0670000

目的探討膀胱癌組織中CD34及腎小球足突細胞膜黏蛋白（podoplanin）的表達情況，并分析其與淋巴結轉移及組織浸潤的關系。方法以45例膀胱癌患者作為觀察組，10例正常者為對照組，對比兩組膀胱組織中CD34及podoplanin表達情況；同時根據(jù)淋巴結是否發(fā)生轉移，將觀察組患者又分為無轉移組及轉移組，對比組間CD34及podoplanin表達情況；根據(jù)組織浸潤情況，將觀察組分為浸潤未超過肌層的未浸潤組及超過肌層的浸潤組，對比兩組間CD34及podoplanin表達情況。結果觀察組患者CD34及podoplanin陽性表達率均高于對照組，差異比較具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；轉移組CD34及podoplanin陽性表達率均高于無轉移組，差異比較亦具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；浸潤組CD34及podoplanin陽性表達率均高于無浸潤組，差異比較具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論膀胱癌患者膀胱組織中CD34及podoplanin表達陽性率較正常者膀胱組織升高，且組織浸潤超過肌層及發(fā)生淋巴結轉移亦可使CD34及podoplanin陽性表達率升高。

膀胱癌；CD34；腎小球足突細胞膜黏蛋白；淋巴結轉移；組織浸潤

Oncol Prog，2016，14（5）

膀胱癌為男性最為常見的惡性腫瘤之一，其在臨床具有高死亡率及高復發(fā)率的特點，臨床預后也較差［1-2］。目前，隨著人們生活及飲食習慣的改變，使得本病在我國的發(fā)病率呈上升趨勢［3］。因膀胱癌的發(fā)病機制尚未明確，因此臨床尚缺乏針對本病的特效治療方法。為更深入地分析膀胱癌的發(fā)生機制，并有效的治療本病，本研究對近年來收集的膀胱癌患者的臨床資料進行分析，分別對比膀胱癌組織中CD34及腎小球足突細胞膜黏蛋白（podoplanin）的表達情況，并探討CD34及podoplanin表達與淋巴結轉移及組織浸潤的關系，現(xiàn)將結果報道如下。

1　對象與方法

1.1研究對象

選取2008年7月至2009年8月在承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院治療的45例膀胱癌患者作為觀察組，同時收集10例正常者為對照組。入選標準為：①有無痛性肉眼血尿，尿痛、尿急、尿頻等，晚期可在下腹部觸到腫塊。②經膀胱鏡檢和影像學檢查確診為膀胱癌。③所有入選者均簽署知情同意書。排除標準：①合并其他部位原發(fā)性惡性腫瘤者。②存在繼發(fā)性惡性腫瘤者。③預計生存期＜3個月。對照組標本均取自接受恥骨上經膀胱前列腺摘除術治療的前列腺增生癥患者，觀察組標本均取自膀胱癌切除術患者，且患者術前未接受介入治療及放療，化療和免疫治療。觀察組男性35例，女性10例，年齡33～82歲，平均年齡（58.51± 10.06）歲；臨床分期為：Ⅰ期37例，Ⅱ～Ⅲ期8例。對照組男性6例，女性4例，年齡33～80歲，平均年齡（58.53±10.05）歲。兩組患者的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

1.2觀察方法

首先，比較對照組正常膀胱組織與觀察組膀胱癌組織中CD34（圖1）及podoplanin陽性表達率的差異；同時根據(jù)是否發(fā)生淋巴結轉移，將觀察組患者分為無轉移組及轉移組，對比兩組間CD34及podoplanin表達情況；根據(jù)組織浸潤情況，將觀察組分為浸潤未超過肌層的未浸潤組及超過肌層的浸潤組，對比兩組間CD34及podoplanin表達情況。

1.3標本檢測方法

應用10%福爾馬林及石蠟對標本進行固定及包埋，應用旋轉式切片機對標本進行切片，切片厚度為4 μm，并于80℃的溫度下進行恒溫烘烤，完成烘烤后進行脫蠟及脫水。隨后將標本放入3%過氧化氫中進行10 min室溫孵育，用蒸餾方式沖洗，放入PBS中浸泡5 min。完成浸泡后，將標本進行15 min沸騰枸櫞酸鈉緩沖液浸泡，完成后于室溫下放置40 min。隨后按順序進行3次PBS沖洗，加入50 μl一抗，進行10 h的4℃靜置，并再次進行PBS沖洗3次及二抗處理，進行15 min室溫孵育，再次進行PBS沖洗3次。完成以上操作后，應用DAB及蘇木素進行染色及復色，再將標本放置于顯微鏡下觀察。在所觀察的標本結果中，以棕黃色細胞質占10%為陽性。以KIT-5010免疫組化試劑盒（福州邁新生物技術開發(fā)有限公司）對標本進行制作，以DAB-0031顯色試劑盒（福州邁新生物技術開發(fā)有限公司）進行DAB染色。

1.4統(tǒng)計學方法

應用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，所有計量資料均用均數(shù)±標準差（±s）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料均用百分率（%）表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1兩組患者CCDD3344及podopllaanniinn表達率比較

觀察組患者CD34及podoplanin陽性表達率均高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），詳見表1。

表1　兩組患者CDCD3434及podoplaninlanin表達率比較［n（%）］

2.2觀察組患者中無轉移組與轉移組CCDD3344及podopllaanniinn表達率比較

轉移組患者CD34及podoplanin陽性表達率高于無轉移組患者，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），詳見表2。

表2　無轉移組與轉移組CDCD3434及podoplaninlanin表達率比較分析［n（%）］

2.3觀察組患者中無浸潤組與浸潤組CCDD3344及podopllaanniinn表達率比較

浸潤組患者CD34及podoplanin陽性表達率均高于無浸潤組患者，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），詳見表3。

表3　無浸潤組與浸潤組CDCD3434及podoplaninlanin表達率比較［n（%）］

3　討論

目前，雖然臨床對于惡性腫瘤的研究已較為深入，但對其發(fā)生機制未完全明確，因而導致臨床對惡性腫瘤的治療仍缺乏特效方法。近年有學者報道，在包括膀胱癌在內的多種惡性腫瘤組織中，多種炎性因子可呈陽性表達，因此推測惡性腫瘤的產生及發(fā)展可能與炎性因子密切相關［4-8］。

圖1　CD34在膀胱癌組織中的典型表達（免疫組化染色，×200200）

文獻資料表明，CD34及podoplanin均為惡性腫瘤臨床診療過程中具有重要意義的觀察指標［9-11］。其中CD34在造血干細胞膜及血管內皮細胞中具有較高的陽性表達率，可作為評價血管內皮細胞情況的重要標志物，同時也可用于衡量腫瘤血管的形成情況［12-13］。相關研究觀察了CD34蛋白在肝細胞癌中的表達水平，結果發(fā)現(xiàn)，在肝癌患者病變組織中，CD34蛋白呈陽性表達，均高于正常肝組織中的表達水平［14-15］。閆圣男等［16］的研究發(fā)現(xiàn)，CD34蛋白陽性表達率在腎細胞癌中顯著增高，且高病理分期患者中CD34陽性表達率顯著高于低分期患者中的表達水平。而podoplanin為淋巴管內皮細胞中表達較高的物質，其可應用于評價惡性腫瘤淋巴管生長情況［17-18］。林文俐等［19］的研究中，對podoplanin在腫瘤間質肌成纖維細胞上的表達與腫瘤淋巴管形成及淋巴道轉移的相關性進行了分析，結果發(fā)現(xiàn)，podoplanin在非小細胞肺癌細胞間質中呈顯著陽性表達，其表達水平與組織分化程度，淋巴結的轉移均具有顯著相關性（P＜0.05）。這一研究結果提示，高表達podoplanin能促進非小細胞肺癌新生淋巴管的形成，淋巴道的轉移等。

本研究為了深入探討膀胱癌的發(fā)生機制，并對臨床診斷及治療提供參考，將CD34及podoplanin兩種炎性物質作為觀察指標，分析其在膀胱癌腫瘤組織中的表達情況。結果顯示，觀察組膀胱組織中CD34及podoplanin陽性表達率均高于對照組膀胱組織（P＜0.05），可見膀胱癌組織中CD34及podoplanin陽性表達率升高。因組織浸潤及淋巴結轉移為惡性腫瘤的臨床特征，因此本研究根據(jù)患者組織浸潤及淋巴結轉移情況，將膀胱癌患者進一步分組，以分析腫瘤組織不同浸潤程度及淋巴結轉移組織中CD34及podoplanin陽性表達率情況，結果顯示，轉移組CD34及podoplanin陽性表達率均明顯高于無轉移組，比較差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；浸潤組CD34及podoplanin陽性表達率均明顯高于無浸潤組，比較差異亦具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）?？梢娫诎螂装┙M織中，發(fā)生組織浸潤及淋巴結轉移后，患者組織內的CD34及podoplanin陽性表達率可顯著升高（P＜0.05）。

綜上所述，膀胱癌組織內CD34及podoplanin表達陽性率明顯升高，且組織浸潤超過肌層及發(fā)生淋巴結轉移亦可使CD34及podoplanin表達陽性率升高。因此在膀胱癌的臨床診療過程中，可將CD34及podoplanin作為臨床指標進行觀察。

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The expression of CD34 and podoplanin in bladder cancer and the correlation with lymph node metastasis and muscular invasion

SU Zhen1LI Jian-ling2TENG Xiao-hui3XIAJia-ding1LI Ru-hong2#
1Department of ICU，2Department of Anesthesiology，Affiliated Hospital of Chengde Medical College，Chengde 067000，Hebei，China3Department of Orthopaedics and Traumatology，Central Hospital of Chengde City，Chengde 067000，Hebei，China

ObjectivectiveTo investigate the expression of CD34 and podoplanin in bladder cancer and analyze the correlation with lymph node metastasis and muscular invasion.Methodethod45 cases of bladder cancer patients were included as study group，while another 10 cases of normal adults were enrolled as control group，in which the CD34 and podoplanin expression of the two groups were compared；and the study group was further stratified as subgroups of lymph node metastasis vs no metastasis，and muscular invasion vs non-muscular invasion to compare the inter-subgroup expression levels，respectively.ResultesultThe positive expression rates of CD34 and podoplanin in study group were significantly higher than that of the control group（P＜0.05）；and were higher in lymph node metastasis subgroup than in no metastasis subgroup（P＜0.05）；and were also higher in muscular invasion subgroup than in non-muscular invasion subgroup（P＜0.05）. ConclusionusionBladder cancer tissues have higher CD34 and podoplanin positive expression than normal tissues，furthermore，muscular invasion and lymph node metastasis may also increase positive expression of CD34 and podoplanin.

bladder cancer；CD34；podoplanin；lymph node metastasis；muscular invasion

R737.14

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.05.21

（corresponding author），郵箱：ruhongli1027@163.com

2015-11-30）