于卉娟，楊　帆，江振作，王躍飛，楊欣瑩

血府逐瘀方不同制劑中揮發(fā)性成分的GC-MS分析*

于卉娟1，2，楊帆1，2，江振作1，2，王躍飛1，2，楊欣瑩3

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，中醫(yī)藥研究院，天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，天津300193；2.天津國(guó)際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院，中藥新藥研發(fā)中心，天津300457；3.天津宏仁堂藥業(yè)有限公司，天津300385）

［目的］研究血府逐瘀方不同制劑中的揮發(fā)性成分。［方法］采用頂空氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（HS-GC/MS）分析血府逐瘀膠囊、軟膠囊、片劑及口服液中的揮發(fā)性成分，通過(guò)NIST-10標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)檢索各揮發(fā)性成分，采用面積歸一化法計(jì)算各揮發(fā)性成分的相對(duì)百分含量。［結(jié)果］血府逐瘀膠囊中鑒定了21個(gè)揮發(fā)性成分，主要為乙酸、苯甲醛、藁本內(nèi)酯、2-甲基丁醛等。血府逐瘀軟膠囊中鑒定了10個(gè)揮發(fā)性成分，主要為酯類化合物。血府逐瘀片中鑒定了22個(gè)揮發(fā)性成分，主要為檸檬烯、3-甲基丁醛、藁本內(nèi)酯、2-甲基丁醛等。血府逐瘀口服液中鑒定了5個(gè)揮發(fā)性成分。［結(jié)論］構(gòu)建的HS-GC/MS法可用于血府逐瘀方不同制劑中揮發(fā)性成分的分析，為血府逐瘀制劑質(zhì)量控制研究提供依據(jù)。

頂空氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法；血府逐瘀方；揮發(fā)性成分

揮發(fā)油是中藥及復(fù)方中的一類重要成分，具有止咳、平喘、祛痰、抗菌、消炎、祛風(fēng)、解熱等作用［1］。李煌等［2］采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS法）分析栝樓桂枝湯及其入腦的揮發(fā)性成分，認(rèn)為揮發(fā)性成分可通過(guò)血腦屏障發(fā)揮治療作用，間接改善腦卒中引起的肢體痙攣等癥狀。宿樹(shù)蘭等［3］研究報(bào)道，香附四物湯中的揮發(fā)性成分可顯著抑制子宮平滑肌收縮。近年來(lái)，GC-MS法成為研究揮發(fā)性成分的重要手段，具有操作簡(jiǎn)單，分析速度快，靈敏度高，樣品用量少等特點(diǎn)［4］。

血府逐瘀方始載于清代醫(yī)家王清任的《醫(yī)林改錯(cuò)》［5］，具有活血祛瘀，行氣止痛的功效，由柴胡、當(dāng)歸、生地、赤芍、紅花、炒桃仁、麩炒枳殼、甘草、川芎、牛膝及桔梗組成，主治氣滯血瘀所致的胸痹、頭痛日久、痛如針刺而有定處、內(nèi)熱煩悶、心悸失眠、急躁易怒等［6］。此方中多味藥材含有揮發(fā)性成分，如當(dāng)歸、川芎、柴胡等［7-11］。此血府逐瘀方為基礎(chǔ)，采用現(xiàn)代制藥工藝研究開(kāi)發(fā)了血府逐瘀膠囊、軟膠囊、片劑、口服液等，廣泛應(yīng)用于臨床心腦血管疾病的治療。目前，血府逐瘀不同劑型中揮發(fā)性成分的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。

采用頂空氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（HS-GC/MS）分析血府逐瘀膠囊、軟膠囊、片劑及口服液中的揮發(fā)性成分，通過(guò)NIST-10標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)檢索各揮發(fā)性成分，采用面積歸一化法計(jì)算各揮發(fā)性成分的相對(duì)百分含量，為血府逐瘀不同劑型質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1　材料

1.1儀器BRUKER SCION 456GC-TQ型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)布魯克公司），BRUKER頂空進(jìn)樣器（美國(guó)布魯克公司），NIST-10標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)，中藥粉碎機(jī)（天津泰斯特儀器有限公司），AR-2140電子天平［奧豪斯儀器（上海）公司］。

1.2試藥血府逐瘀膠囊（TJHRT，批號(hào)：E03066，標(biāo)為HC），血府逐瘀片（SXHT，批號(hào)：140903，標(biāo)為TA1），血府逐瘀片（CQXEA，批號(hào)：150103，標(biāo)為TA2），血府逐瘀軟膠囊（JLSHNSH，批號(hào)：20140903，標(biāo)為SC），血府逐瘀口服液（JLADYB，批號(hào)：1412030，標(biāo)為OL1），血府逐瘀口服液（SDHJT，批號(hào)：1404007，標(biāo)為OL2）。

2　實(shí)驗(yàn)方法

2.1供試品的制備血府逐瘀膠囊：除去膠囊殼，取樣品粉末3 g，精密稱定，置于頂空進(jìn)樣瓶中，備用。血府逐瘀軟膠囊：除去軟膠囊殼，取樣品溶液1g，精密稱定，置于頂空進(jìn)樣瓶中，備用。血府逐瘀片：粉碎，取樣品粉末3 g，精密稱定，置于頂空進(jìn)樣瓶中，備用。血府逐瘀口服液：移取樣品溶液2 mL，精密移取，置于頂空進(jìn)樣瓶中，備用。

2.2HS-GC/MS分析條件

2.2.1頂空條件頂空平衡時(shí)間：30 min，進(jìn)樣針溫度：90℃，頂空震蕩室加熱溫度：95℃。

2.2.2氣相色譜條件色譜柱VF-5ms（30m×0.25mm× 0.25 μm，美國(guó)安捷倫公司）；程序升溫：色譜柱初始溫度40℃，保持3 min，以10℃/min升溫速率升至280℃，保持8 min；接口溫度：280℃；載氣：高純氦（純度＞99.999%）；流速：1 mL/min；分流比為10∶1；進(jìn)樣量：1 mL；溶劑延遲：1.5 min。

2.2.3質(zhì)譜（MS）條件電離方式：EI；能量：-70 eV；離子源溫度：230℃；四級(jí)桿溫度：220℃；全掃描模式，質(zhì)量掃描范圍：43～500 amu。

3　結(jié)果與討論

3.1血府逐瘀不同制劑HS-GC/MS分析采用上述優(yōu)化的HS-GC/MS條件，對(duì)血府逐瘀膠囊、軟膠囊、片劑及口服液揮發(fā)性成分進(jìn)行分析，圖1 A、B、C、D分別是血府逐瘀膠囊、軟膠囊、片劑及口服液HS-GC/MS總離子流色譜圖。

通過(guò)對(duì)上述血府逐瘀不同劑型揮發(fā)性成分的分析，血府逐瘀膠囊中鑒定了21個(gè)揮發(fā)性成分，血府逐瘀軟膠囊中鑒定了10個(gè)揮發(fā)性成分，血府逐瘀片（TA1）中鑒定了22個(gè)揮發(fā)性成分，血府逐瘀口服液（OL1）中鑒定了5個(gè)揮發(fā)性成分。血府逐瘀不同劑型中揮發(fā)性成分的差異較大，主要是由于不同劑型的生產(chǎn)工藝不同：血府逐瘀膠囊是取炒桃仁半量、當(dāng)歸、赤芍、麩炒枳殼、川芎、柴胡粉碎成細(xì)粉，與其余紅花等5味及剩余炒桃仁的水煎液稠膏制成［6］。血府逐瘀片是采用部分藥材打粉入藥、部分藥材經(jīng)提取后入藥方式制成。軟膠囊及口服液采用復(fù)方中全部藥材經(jīng)提取后制成，揮發(fā)性成分損失較多［12］。因此，血府逐瘀軟膠囊、口服液中揮發(fā)性成分較血府逐瘀膠囊、片劑中的少。

3.2血府逐瘀不同制劑揮發(fā)性成分分析血府逐瘀不同劑型揮發(fā)性成分經(jīng)NIST-10標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)檢索，同時(shí)查閱相關(guān)文獻(xiàn)［13-16］鑒定，采用面積歸一化法計(jì)算各揮發(fā)性成分的相對(duì)百分含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1　血府逐瘀膠囊（A）、軟膠囊（B）、片劑（C）及口服液（D）的總離子流圖Fig.1　HS-GC/MS total ion chromatograms of Xuefu Zhuyu capsule（A），Xuefu Zhuyu soft capsule（B），Xuefu Zhuyu tablet（C）and Xuefu Zhuyu oral liquid（D）

血府逐瘀膠囊中揮發(fā)性成分主要是脂肪族、芳香族、內(nèi)酯、單萜類等。內(nèi)酯類（17.37%）主要包括藁苯內(nèi)酯（12.52%）、洋川芎內(nèi)酯（0.58%）、3-亞丁基-1（3H）-異苯并呋喃酮（2.64%）、丁基酚內(nèi)酯（1.63%）。藁本內(nèi)酯主要存在于川芎、當(dāng)歸等傘形科植物中，具有抗腫瘤、解熱、鎮(zhèn)痛消炎等作用［17］。單萜類（6.23%）主要包括α-蒎烯、檸檬烯、γ-萜品烯。血府逐瘀軟膠囊中揮發(fā)性成分主要以醛類、丙三醇為主，主要包括乙酸乙酯（19.83%）、甲氧基乙酸丁酯（19.00%）、三乙酸甘油酯（14.76%）、丙三醇（18.26%）。不同廠家血府逐瘀片中揮發(fā)性成分基本一致，以醇、醛、酯、單萜類為主，主要包括巴豆醇、3-甲基丁醛、2-甲基丁醛、藁本內(nèi)酯、三乙酸甘油酯、檸檬烯。由于制劑工藝的不同，血府逐瘀口服液中揮發(fā)性成分檢出數(shù)量明顯少于其他3種血府逐瘀制劑，主要包括醛和酯類。

表1　血府逐瘀膠囊（HC）、軟膠囊（SC）、片劑（TB）及口服液（OL）揮發(fā)性成分分析結(jié)果Tab.1　The results of the volatile constituents of Xuefu Zhuyu capsule（HC），Xuefu Zhuyu soft capsule（SC），Xuefu Zhuyu tablet（TB）and Xuefu Zhuyu oral liquid（OL）

4　結(jié)論

筆者構(gòu)建的HS-GC/MS法能夠應(yīng)用于血府逐瘀膠囊、軟膠囊、片劑、口服液中的揮發(fā)性成分的研究。血府逐瘀不同劑型中的揮發(fā)性成分差異明顯，其主要原因在于生產(chǎn)加工工藝不同。該研究為血府逐瘀制劑的質(zhì)量控制提供了理論依據(jù)。

［1］劉因華.中藥揮發(fā)油的研究現(xiàn)狀［J］.現(xiàn)代中醫(yī)藥，2009，29（1）: 68-70.

［2］李煌，許文，徐偉，等.GC-MS分析栝樓桂枝湯及其入腦的揮發(fā)性成分［J］.中國(guó)中藥雜志，2014，39（8）:1509-1515.

［3］宿樹(shù)蘭，段金廒，趙新慧，等.四物湯及衍化方香附四物湯揮發(fā)性成分與子宮平滑肌收縮效應(yīng)相關(guān)性分析［J］.世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2008，10（2）:50-57.

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（本文編輯：高杉，于春泉）

Identification of the volatile components in different preparations of Xuefu Zhuyu by GC-MS

YU Hui-juan1，2，YANG Fan1，2，JIANG Zhen-zuo1，2，WANG Yue-fei1，2，YANG Xin-ying3
（1.Tianjin State Key Laboratory of Modern Chinese Medicine-Province and Ministry Co-established State Key Laboratory Cultivation Base，Institute of Traditional Chinese Medicine，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2.Research and Development Center of Traditional Chinese Medicine，Tianjin International Joint Academy of Biotechnology and Medicine，Tianjin 300457，China；3.Tianjin Hongrentang Pharmaceutical Co.，Ltd.，Tianjin 300385，China）

［Objective］To identify the volatile components in different preparations of Xuefu Zhuyu，a rapid GC-MS method was established.［Methods］Headspace gas chromatography-mass spectrometry（HS-GC/MS）was employed for identification of the components in Xuefu Zhuyu capsules，Xuefu Zhuyu soft capsules，Xuefu Zhuyu tablets and Xuefu Zhuyu oral liquid.The volatile components were retrieved by NIST-10 library，the relative percentage contents of which were calculated by area normalization method.［Results］The 21 volatile components were identified from Xuefu Zhuyu capsules，including acetic acid，benzaldehyde，ligustilide and 2-methyl-butanal etc.The 22 volatile components were identified in Xuefu Zhuyu tablets，including limonene，3-methyl-butanal，ligustilide and 2-methyl-butanal etc.Ten and five volatile components were identified in Xuefu Zhuyu soft capsules and Xuefu Zhuyu oral liquid，respectively.［Conclusion］In this study，the method established can be used for the detection and analysis of volatile components in different preparation of Xuefu Zhuyu.The results could provide the basis for the quality control of preparation of Xuefu Zhuyu.

pace gas chromatography-mass spectrometry；Xuefu Zhuyu preparation；volatile component

R284

A

1672-1519（2016）02-0107-04

10.11656/j.issn.1672-1519.2016.02.12

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81202877）。

于卉娟（1988-），女，碩士研究生，主要研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量控制研究。

王躍飛，E-mail：wangyuefei_2006@hotmail.com。

（2015-10-13）