王　帥，程建軍，倪春蕾，尹　園，佟　露

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,黑龍江哈爾濱 150030)

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乳酸菌對(duì)玉米加工特性的影響及基于均勻設(shè)計(jì)優(yōu)化玉米發(fā)酵條件

王帥，程建軍*，倪春蕾，尹園，佟露

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,黑龍江哈爾濱 150030)

本實(shí)驗(yàn)選擇東北地區(qū)大面積推廣種植具有代表性的8個(gè)普通玉米品種和2個(gè)糯玉米品種進(jìn)行研究,通過乳酸菌發(fā)酵,分析玉米保水力、膨脹勢(shì)、溶解度和糊化特性的變化趨勢(shì);并以膨脹勢(shì)作指標(biāo),采用均勻?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì),優(yōu)化適于發(fā)酵的玉米品種及發(fā)酵條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:經(jīng)乳酸菌發(fā)酵,玉米品種間加工特性變化差異顯著(p<0.05),糯玉米的保水力、溶解度顯著高于普通品種玉米(p<0.05);而膨脹勢(shì)、回生值顯著低于普通品種玉米(p<0.05);普通品種玉米的峰值粘度和衰減值經(jīng)發(fā)酵作用有所降低,而糯玉米品種的峰值粘度和衰減值經(jīng)發(fā)酵后升高。在所選品種中鄭單958最適于發(fā)酵,料液比1∶2(g/mL),37 ℃發(fā)酵5 d,所得玉米粉膨脹勢(shì)高達(dá)12.93 g/g,其加工特性得到有效改善。

玉米,乳酸菌,均勻設(shè)計(jì),膨脹勢(shì),加工特性

玉米是我國人民日常生活中主要糧食之一,富含多種微量元素、氨基酸、維生素、纖維素等[1]。玉米雖然營養(yǎng)豐富,但由于其口感粗糙、加工過程中難以形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),黏彈性欠佳,柔韌性差,因此玉米面團(tuán)品質(zhì)較差,這極大地限制了玉米在主食方面的應(yīng)用[2-4]。因此,改善玉米加工品質(zhì)是擴(kuò)大其應(yīng)用的關(guān)鍵。玉米粉的膨脹特性對(duì)加工面條、餃子等面食品的品質(zhì)有重要影響,McCormick[5]和劉銳[6]研究發(fā)現(xiàn)膨脹勢(shì)與面條感官品質(zhì)及面條質(zhì)量相關(guān)極顯著,可用于快速測(cè)定面食品品質(zhì)。

發(fā)酵是加工谷物類食品的傳統(tǒng)方法,經(jīng)微生物發(fā)酵作用可改變產(chǎn)品的質(zhì)構(gòu)、改善產(chǎn)品的風(fēng)味和口感、提高產(chǎn)品的安全性和營養(yǎng)價(jià)值[7]。目前,關(guān)于發(fā)酵改善谷物食品品質(zhì)的研究報(bào)道很多,許梅[8]等研究了糯玉米粉經(jīng)4種乳酸菌發(fā)酵作用后的性質(zhì)變化,發(fā)酵過程中pH下降,乳酸含量增加,玉米粉的黏度、保水力均有所增加;袁美蘭[9]對(duì)乳酸菌發(fā)酵改善玉米淀粉凝膠質(zhì)地的機(jī)理進(jìn)行了研究,表明發(fā)酵提高了玉米淀粉的凝膠性;李麗等[10]研究表明自然發(fā)酵能顯著地降低黃米中的蛋白、脂肪、和灰分,純化了淀粉,改變了黃米的物化性質(zhì),提高其營養(yǎng)價(jià)值?？梢钥闯鐾ㄟ^微生物發(fā)酵的方法改善谷物加工特性是國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。

本實(shí)驗(yàn)采用實(shí)驗(yàn)室保存分離于自然發(fā)酵玉米中的兩株優(yōu)勢(shì)乳酸菌,研究其對(duì)10個(gè)品種玉米加工特性的影響,通過均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)化適于發(fā)酵加工的玉米品種及發(fā)酵條件,篩選出適宜發(fā)酵加工的玉米專用品種及條件,為玉米深加工及傳統(tǒng)食品的工業(yè)化提供理論基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

植物乳桿菌(LactobacillusplantarumA9)和彎曲乳桿菌(LactobacilluscurvatusA2)本實(shí)驗(yàn)室分離篩選于自然發(fā)酵玉米中的兩株優(yōu)勢(shì)乳酸菌;MRS培養(yǎng)基北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司;脫脂乳粉黑龍江省完達(dá)山乳業(yè)股份有限公司;玉米品種:龍單76,龍單56,龍單49,吉單27,先玉335,遼禾6,京科糯,墾粘1號(hào)黑龍江省玉米研究所提供;鄭單958,墾單13 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院提供(其中京科糯和墾粘1號(hào)為糯玉米品種;其它為普通玉米品種)。

恒溫培養(yǎng)箱；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱上海一恒科學(xué)儀器有限公司;水浴恒溫振蕩器江蘇金壇億通電子有限公司;PHM200 pH計(jì)美國哈希公司;RVA-Super3-型快速黏度分儀澳大利亞新港科學(xué)儀器公司;漩渦振蕩器德國IKA公司;膠體磨溫州市膠體磨廠;離心機(jī)Centrifuge 5430R德國eppendorf公司;高速冷凍離心機(jī)GL-21M湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1發(fā)酵種子液的制備將乳酸菌經(jīng)脫脂乳培養(yǎng)活化后,3%接種MRS液體培養(yǎng)基中,37 ℃培養(yǎng)20 h,活菌數(shù)約6～7×108CFU/mL[11]。

1.2.2發(fā)酵玉米粉的制備300 g玉米粒加600 mL無菌水于1000 mL錐形瓶中。乳酸菌A2和A9按1∶1的比例,107CFU/mL的接種量,37 ℃發(fā)酵3 d[12]。玉米發(fā)酵后經(jīng)破碎、去胚和渣皮,漿液經(jīng)膠體磨均質(zhì)后脫水,45 ℃烘干12 h(含水量約7.5%),粉碎過80目篩。以未發(fā)酵的玉米同樣操作做對(duì)照。

1.2.3發(fā)酵過程中pH的測(cè)定在玉米發(fā)酵過程中,每24 h測(cè)定發(fā)酵液的pH,記錄0～7 d發(fā)酵液pH的變化情況。

1.2.4玉米保水力的測(cè)定稱取干重0.20 g玉米粉樣品加入5 mL蒸餾水,振蕩20 min,5000 r/min(2935×g)離心20 min,棄上清液,稱重。保水力表示為每g樣品所吸附的水量[13]。

1.2.5玉米膨脹勢(shì)和溶解度的測(cè)定取玉米粉樣品0.25 g加入5 mL蒸餾水70 ℃的水浴振蕩加熱4 min,取出后漩渦振蕩器振蕩20 s,繼續(xù)水浴振蕩加熱6 min。將其移至沸水浴中再加熱10 min,冷卻后3000 r/min(1700×g)離心4 min。分別取上清液和沉淀物測(cè)定玉米的溶解度和膨脹勢(shì)[14]。

1.2.6玉米糊化特性的測(cè)定采用ICC國際標(biāo)準(zhǔn)No.162推薦的測(cè)定方法。稱取3.50 g玉米粉樣品加入25 mL蒸餾水,測(cè)定樣品的糊化溫度、峰值粘度、保持粘度、最終粘度、衰減值、回生值。

1.2.7均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)化乳酸菌發(fā)酵玉米的品種及發(fā)酵條件本實(shí)驗(yàn)采用非等水平均勻?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì),對(duì)10個(gè)品種玉米進(jìn)行乳酸菌發(fā)酵處理,以膨脹勢(shì)為指標(biāo),優(yōu)化發(fā)酵玉米的發(fā)酵條件。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平表如表1,其中X1(玉米品種)為定性因子,發(fā)酵溫度、料液比和發(fā)酵時(shí)間,3個(gè)因素為定量因子,經(jīng)過DPS分析軟件優(yōu)化后中心化偏差CD=0.1260。

表1　均勻設(shè)計(jì)因素水平表

1.3數(shù)據(jù)處理

每組實(shí)驗(yàn)均進(jìn)行三次以上的平行和重復(fù)實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS分析軟件Origin7.5繪圖軟件和DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行分析。

2　結(jié)果與分析

2.1乳酸菌發(fā)酵玉米過程中pH的測(cè)定

10個(gè)品種玉米發(fā)酵過程中發(fā)酵液pH變化情況如圖1所示,從圖中可以看出,隨著發(fā)酵時(shí)間的延長,發(fā)酵液的pH在不斷下降,這表明乳酸菌代謝玉米中的糖類物質(zhì),產(chǎn)生乳酸。

圖1　玉米發(fā)酵液pH的變化Fig.1　Changes in pH value of fermented maize

乳酸菌在發(fā)酵初期0～2 d,代謝活力旺盛,產(chǎn)生了大量乳酸,發(fā)酵液的pH迅速下降;而從第3 d開始,逐漸進(jìn)入發(fā)酵中期與后期,乳酸菌代謝緩慢,乳酸產(chǎn)量漸漸減少,pH呈緩慢下降的趨勢(shì)。10個(gè)品種玉米發(fā)酵過程中pH的變化大致可分為兩組其中龍丹49、龍丹56、墾單13、先玉335、京科糯和吉單27品種玉米發(fā)酵液的pH整體下降較緩,而龍丹76、遼禾6、鄭單958和墾粘1號(hào)品種玉米發(fā)酵液的pH下降相對(duì)明顯,從pH的降低幅度可以看出龍丹76、遼禾6、鄭單958和墾粘1號(hào)品種玉米更適宜乳酸菌生長[8]。

2.2乳酸菌發(fā)酵對(duì)玉米保水力的影響

乳酸菌發(fā)酵對(duì)玉米保水力的影響如圖2所示,不同品種玉米發(fā)酵前后保水力在品種間有顯著性差異(p<0.05)。在所研究的玉米品種中,未發(fā)酵玉米保水力的范圍在1.27～1.78 g/g。其中,普通玉米品種的保水力顯著低于糯玉米品種(p<0.05)。

圖2　乳酸菌發(fā)酵對(duì)玉米粉保水力的影響Fig.2　The water retention capacity of fermented maize flour by Lactic Acid Bacteria(LAB)注:小寫字母a,b,c等代表未發(fā)酵玉米性質(zhì)在p<0.05水平差異顯著;大寫字母A,B,C等代表發(fā)酵玉米性質(zhì)在p<0.05水平差異顯著，圖3、圖4同。

經(jīng)過乳酸菌發(fā)酵10個(gè)品種玉米的保水力均有所提高,發(fā)酵玉米保水力從先玉335品種1.6 g/g到墾粘1號(hào)品種2.18 g/g,其中墾粘1號(hào)玉米保水力經(jīng)發(fā)酵作用提高最大(32.12%);糯玉米品種的保水力顯著高于普通品種玉米的保水力(p<0.05)。

保水力的提高是由于乳酸菌在發(fā)酵過程中會(huì)產(chǎn)生葡萄糖氧化酶,它在氧化葡萄糖生成葡萄糖酸的過程中所產(chǎn)生的過氧化氫會(huì)氧化蛋白質(zhì)中的巰基(-SH),形成二硫鍵(-S-S-),從而起到增強(qiáng)面團(tuán)的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的作用[15]。在玉米粉中的一些蛋白質(zhì)含有巰基,因此通過葡萄糖氧化酶的作用形成了二硫鍵,使蛋白質(zhì)具有較高的保水力,也可以增強(qiáng)面團(tuán)的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。高的保水力意味著在凝膠中淀粉顆粒能吸收更多的水分,淀粉顆粒吸收更多水分將會(huì)促進(jìn)凝膠的形成。

2.3乳酸菌發(fā)酵對(duì)玉米膨脹勢(shì)的影響

乳酸菌發(fā)酵對(duì)玉米膨脹勢(shì)的影響如圖3所示,不同品種玉米發(fā)酵前后膨脹勢(shì)在品種間有顯著性差異(p<0.05)。在所研究的玉米品種范圍內(nèi),發(fā)酵前,普通玉米鄭單958品種膨脹勢(shì)最高9.98 g/g;而其他玉米品種間無顯著差異(p<0.05);經(jīng)發(fā)酵玉米的膨脹勢(shì)均有所提高,墾單13、鄭單958品種的膨脹勢(shì)顯著高于其他品種(p<0.05),但龍單49品種玉米膨脹勢(shì)經(jīng)發(fā)酵作用提高了36.47%。糯玉米品種的膨脹勢(shì)發(fā)酵前后均低于普通品種玉米。

圖3　乳酸菌發(fā)酵對(duì)玉米粉膨脹勢(shì)的影響Fig.3　The swelling power of fermented maize flour by LAB

由于淀粉顆粒結(jié)晶結(jié)構(gòu)的影響,直鏈淀粉分子間由氫鍵結(jié)合成晶態(tài)結(jié)構(gòu),乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)生的酸及酶類物質(zhì)滲入困難,所以直鏈淀粉的α-1,4糖苷鍵不易被分解。而淀粉顆粒中無定形區(qū)域中支鏈淀粉分子的α-1,4鍵和α-1,6鍵其較易被滲入,發(fā)生降解,使玉米粉中支鏈淀粉含量降低,直鏈淀粉的相對(duì)含量升高[16-17],膨脹勢(shì)增加。由于糯玉米品種基本不含直鏈淀粉,所以發(fā)酵后糯玉米品種膨脹勢(shì)低于普通玉米品種。

2.4乳酸菌發(fā)酵對(duì)玉米溶解度的影響

乳酸菌發(fā)酵對(duì)玉米溶解度的影響如圖4所示,不同品種玉米發(fā)酵前后溶解度在品種間有顯著性差異(p<0.05)。發(fā)酵前,普通玉米鄭單958和墾單13品種溶解度顯著高于其他玉米品種(p<0.05);經(jīng)發(fā)酵玉米的溶解度均有所提高,京科糯玉米溶解度達(dá)5.69%顯著高于其他品種玉米(p<0.05),其中龍單76品種溶解度經(jīng)發(fā)酵作用提高最大(237.41%)。

圖4　乳酸菌發(fā)酵對(duì)玉米粉溶解度的影響Fig.4　The solubility of fermented maize flour by LAB

表2　乳酸菌發(fā)酵對(duì)玉米糊化性質(zhì)的影響

注:不同英文字母表示在p<0.05水平差異顯著。

玉米粉的溶解性對(duì)淀粉基制品的加工特性有較大影響。玉米粉經(jīng)過乳酸菌發(fā)酵后,乳酸菌產(chǎn)生的乳酸及酶類物質(zhì)都會(huì)引起玉米內(nèi)部結(jié)構(gòu)的改變尤其是無定形區(qū)的支鏈淀粉降解,使得玉米粉中的可溶性物質(zhì)更易析出導(dǎo)致溶解度提高。同時(shí)由于發(fā)酵作用破壞了淀粉顆粒的結(jié)構(gòu),淀粉受熱膨脹過程中直鏈淀粉也更易溶出而導(dǎo)致溶解度增加[18]。

2.5乳酸菌發(fā)酵對(duì)玉米糊化性質(zhì)的影響

乳酸菌發(fā)酵對(duì)玉米糊化性質(zhì)影響如表2所示。由表2可知,不同品種玉米發(fā)酵前后糊化溫度在品種間有顯著差異(p<0.05)。發(fā)酵前,糊化溫度從京科糯70 ℃到吉單27的73.1 ℃;經(jīng)發(fā)酵,玉米的糊化溫度有所提高,其中發(fā)酵玉米鄭單958、墾單13的糊化溫度顯著低于其他品種玉米。這是由于發(fā)酵對(duì)淀粉無定形區(qū)域的優(yōu)先降解導(dǎo)致淀粉結(jié)晶結(jié)構(gòu)、片層結(jié)構(gòu)等聚集態(tài)結(jié)構(gòu)比例變化、排列程度更趨于完美,顆粒結(jié)構(gòu)更加緊密[19];此外,發(fā)酵強(qiáng)化了淀粉分子的重排[20],使玉米粉中淀粉顆粒結(jié)構(gòu)難以被破壞,從而提高了糊化溫度。

經(jīng)過乳酸菌的發(fā)酵作用,玉米的峰值粘度變化因品種不同而有所差異。普通品種玉米的峰值粘度經(jīng)發(fā)酵作用后有所降低,其中發(fā)酵后的鄭單958品種峰值粘度顯著高于其他普通品種玉米(p<0.05);但糯玉米品種經(jīng)發(fā)酵后峰值粘度卻有所升高,京科糯和墾粘1號(hào)品種玉米發(fā)酵后峰值粘度達(dá)5541 cp和5527 cp分別提高了42.6%和22.0%。發(fā)酵降低玉米的峰值粘度是由于發(fā)酵使玉米淀粉中無定型區(qū)域支鏈淀粉的短鏈降解從而導(dǎo)致支鏈淀粉平均聚合度和平均鏈長降低淀粉分子變小、空間位阻減小,這已被Chang[21]等所證實(shí)。

衰減值的變化趨勢(shì)與峰值黏度相似,發(fā)酵前,普通玉米品種遼禾6衰減值2345 cp顯著低于其他玉米品種(p<0.05);發(fā)酵后,普通玉米品種的衰減值均降低,衰減值是反映淀粉在加熱攪拌過程中抵抗機(jī)械剪切的能力,是淀粉在加熱過程中顆粒結(jié)構(gòu)瓦解難易程度的量度[22]。研究表明發(fā)酵使普通品種玉米粉抗高溫下剪切力的能力得到增強(qiáng);但京科糯和墾粘1號(hào)兩個(gè)糯玉米品種經(jīng)發(fā)酵后衰減值有所提高。發(fā)酵對(duì)糯玉米品種峰值粘度和衰減值的影響與普通品種玉米不同,這有待進(jìn)一步研究探討。

不同品種玉米發(fā)酵前后回生值在品種間有顯著性差異(p<0.05),糯玉米品種的回生值顯著低于普通品種玉米(p<0.05);發(fā)酵前,普通玉米墾單13、吉單27回生值顯著低于其他普通玉米品種(p<0.05);經(jīng)過乳酸菌發(fā)酵作用,所有玉米品種的回生值均有所降低,其中普通玉米鄭單958回生值降低最明顯(22.07%),顯著低于其他普通玉米品種(p<0.05)。

支鏈淀粉的平均外支鏈長度對(duì)玉米粉回生速率有重要影響,隨著發(fā)酵的進(jìn)行,支鏈淀粉分支部分被適度降解,支鏈淀粉外支鏈長度發(fā)生變化,使回生速率降低[23]?；厣悼稍u(píng)價(jià)玉米粉的抗老化性質(zhì),經(jīng)發(fā)酵玉米回生值降低,說明其抗老化性能得到增強(qiáng)。

2.6均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)化乳酸菌發(fā)酵玉米的品種及發(fā)酵條件

2.6.1回歸分析和顯著性分析本實(shí)驗(yàn)采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)中的二次多項(xiàng)式逐步回歸求解。經(jīng)過DPS軟件優(yōu)化后得出實(shí)驗(yàn)方案見表3,優(yōu)化后回歸方程及相關(guān)系數(shù)計(jì)算結(jié)果見表4,可以看出,以膨脹勢(shì)為指標(biāo)的回歸方程的相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.9999;顯著水平p為0.004,相關(guān)極顯著(p<0.01)。

表4　回歸方程及顯著性分析

表3　實(shí)驗(yàn)方案及實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.6.2乳酸菌發(fā)酵玉米的最適品種及最佳發(fā)酵條件經(jīng)DPS數(shù)據(jù)處理后,根據(jù)回歸方程及顯著性分析得到最優(yōu)發(fā)酵條件組合為:品種鄭單958,料液比1∶2,溫度37 ℃發(fā)酵5 d,膨脹勢(shì)可達(dá)12.59 g/g。

2.6.3驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)根據(jù)上述分析,選擇適于乳酸菌發(fā)酵的玉米品種鄭單958,在料液比1∶2的條件下,37 ℃發(fā)酵5 d。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果如表5。結(jié)果表明,在此條件下所得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致,說明此條件的實(shí)驗(yàn)效果是穩(wěn)定可靠的。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)膨脹勢(shì)(12.93 g/g)高于方程預(yù)測(cè)值(12.59 g/g),說明此條件具有實(shí)際意義。所以選擇適于乳酸菌發(fā)酵的玉米品種鄭單958,在料液比1∶2(g/mL)的條件下,37 ℃發(fā)酵5 d制備發(fā)酵玉米粉。

表5　驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3　結(jié)論

乳酸菌發(fā)酵使玉米的保水力、膨脹勢(shì)以及溶解度提高。其中普通品種玉米品種與糯玉米品種相比其膨脹勢(shì)較高而保水力和溶解度較低。乳酸菌發(fā)酵對(duì)不同品種玉米的糊化性質(zhì)影響不同,經(jīng)發(fā)酵10個(gè)品種玉米的糊化溫度有所升高,回生值降低。普通玉米品種的峰值粘度和衰減值經(jīng)發(fā)酵作用有所降低,而糯玉米品種的峰值粘度和衰減值經(jīng)發(fā)酵后升高。通過均勻設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化得出:適于發(fā)酵的玉米品種為鄭單958,在料液比1∶2(g/mL),37 ℃條件下發(fā)酵5 d,經(jīng)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),按此方法生產(chǎn)出的發(fā)酵玉米粉膨脹勢(shì)高達(dá)12.93 g/g,加工品質(zhì)得到改善。

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Effect of Lactic acid bacteria on maize characteristics and optimazation of fermentation conditions by uniform design

WANG Shuai,CHENG Jian-jun*,NI Chun-lei,YIN Yuan,TONG Lu

(College of Food Science,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China)

The main 8 common maize and 2 waxy corn representative varieties,which were cultivated in the Northeastern region,were selected and fermented by lactic acid bacteria. The water retention capacity,swelling power,solubility and pasting properties of fermented maize were analyzed. The optimal maize variety and fermentative conditions were obtained using the Uniform design according to swelling power variation. The results were as follows:The processing characteristics of maize varieties were significantly different by fermentation.(p<0.05). Waxy corn varieties of water retention capacity,solubility were significantly higher than common maize(p<0.05);the swelling power and setback were significantly lower than the common maize(p<0.05);the peak viscosity and breakdown of common maize decreased,while the waxy corn increased. The uniform design optimization results showed that Zhengdan 958 was the optimal maize variety to fermentation. The largest swelling power(12.93 g/g)of fermented maize flour was gotten when mixture of Zhengdan 958 variety and solvent ratio 1∶2(g/mL) had fermented at 37 ℃ for 5d.

maize;Lactic acid bacteria;uniform design;swelling power;processing characteristics

2016-01-12

王帥(1990-)，男，碩士研究生，研究方向：糧食加工，E-mail：wangshuaifood@163.com。

程建軍(1969-)，男，博士，教授，主要從事農(nóng)產(chǎn)品加工方向研究，E-mail：cheng577@163.com。

黑龍江省應(yīng)用技術(shù)研究與開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目。

TS213.4

A

1002-0306(2016)13-0183-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.13.028