常 健，王 琪（山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西太原030006）

晉西北酸粥發(fā)酵過程中微生物基因組DNA提取方法的比較

常 健，王 琪*
（山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西太原030006）

為了找到一種簡單高效的晉西北酸粥發(fā)酵過程中微生物基因組DNA提取方法，本文采取對提取的微生物基因組DNA進(jìn)行濃度測定的方法，比較了溶菌酶-SDS-蛋白酶K法、改良CTAB法和改良CTAB-溶菌酶法三種方法的提取效果。結(jié)果表明：溶菌酶-SDS-蛋白酶K法效果最好，可以獲得質(zhì)量較高的微生物基因組DNA，DNA濃度為1657.53 ng/μL；改良CTAB-溶菌酶法比溶菌酶-SDS-蛋白酶K法效果差，DNA濃度為1308.08 ng/μL；改良CTAB法對微生物基因組DNA的提取效果比溶菌酶-SDS-蛋白酶K法更差，DNA濃度為1098.36 ng/μL。以提取到的微生物基因組總DNA為模板，進(jìn)行16S rDNA基因的PCR擴(kuò)增，在回收產(chǎn)物中目的條帶清晰，表明提取到的微生物基因組DNA含量高、結(jié)構(gòu)完整。整體實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，溶菌酶-SDS-蛋白酶K法對于提取晉西北酸粥發(fā)酵過程中微生物基因組DNA效果最好。

晉西北酸粥，微生物基因組DNA，提取方法

目前提取微生物基因組DNA的方法有很多，例如：物理法（液氮研磨、超聲、凍融、顆粒破碎等）［1］、化學(xué)法（SDS法、CTAB法、螯合樹脂法等）、酶解法（溶菌酶法、蛋白酶K法等）以及它們的相互組合等方法［2］。相對于物理法而言，條件劇烈，大多為需要研磨來破碎細(xì)胞［3-4］，同時(shí)容易由于機(jī)械剪切力而打斷基因組DNA，化學(xué)法中普遍使用的是SDS法、CTAB法，因其成本低、見效快、效果好而使用廣泛。酶解法因條件溫和，提取效果好也被廣泛應(yīng)用于微生物基因組DNA的提取中。而對于酸粥微生物基因組DNA的提取還鮮見報(bào)道。

由于研究對象和研究目的不同，國內(nèi)外對于微生物基因組DNA的提取方法各異，針對不同方法提取的微生物基因組DNA而言，提取DNA的純度及結(jié)構(gòu)完整性是進(jìn)行基因工程各項(xiàng)研究所必需的條件［5］。

酸粥是我國西北地區(qū)傳統(tǒng)的谷物發(fā)酵食品，主要食用地區(qū)分布在內(nèi)蒙古西部、晉西北、陜西北部等地［6］，是一種典型的地方特色食品，具有口感順滑、氣味酸香、余味綿長、生津止渴等特點(diǎn)。晉西北酸粥是多菌種混合發(fā)酵谷物的產(chǎn)物，為了解晉西北酸粥中所含有的微生物種類，可以采用傳統(tǒng)培養(yǎng)法和基于分子生物學(xué)的免培養(yǎng)法來進(jìn)行深入研究。文獻(xiàn)指出，傳統(tǒng)的研究方法是通過純培養(yǎng)獲得菌株后才能對其特性進(jìn)行描述，然而在自然環(huán)境中有相當(dāng)多的菌種（90%～99%）無法通過傳統(tǒng)培養(yǎng)的方法培養(yǎng)出來［7-8］。隨著研究的不斷深入，可以借鑒分子生物學(xué)的方法來克服傳統(tǒng)培養(yǎng)方法的不足，可以更加全面地對環(huán)境微生物多樣性加以探索［9］。而高效的微生物基因組DNA提取方法是對微生物多樣性進(jìn)行研究的重要條件。不同方法對微生物基因組DNA提取效果不同，單一提取方法得到的基因組DNA可能不全面，所以一般多采用幾種方法混合使用。

針對不同的材料可以采用不同的方法，在植物基因組DNA提取中，多采用物理法和化學(xué)法相結(jié)合［10］，也有多種化學(xué)法與物理法共同使用的例子［11-13］；在土壤微生物基因組DNA提取中，多有研磨步驟［14］。在晉西北酸粥這一谷物發(fā)酵產(chǎn)物中，其粘稠度的產(chǎn)生可能是由于產(chǎn)物中多糖含量較高的緣故，因此，在提取其微生物基因組DNA時(shí)，不得不考慮多糖對提取效果的影響［11-12］，綜合多種基因組DNA提取方法，最終選定了溶菌酶-SDS-蛋白酶K法、改良CTAB法、改良CTAB-溶菌酶法三種方法，對晉西北酸粥微生物基因組DNA提取效果進(jìn)行比較，確定最佳的提取方法。

國內(nèi)外對谷物發(fā)酵過程中微生物的數(shù)量和菌相進(jìn)行了一些研究［15-16］。內(nèi)蒙古酸粥中的微生物不僅包含乳酸菌，還有酵母菌、霉菌［17-18］等。但是對晉西北酸粥的研究還未見報(bào)道。因此本文比較了3種提取方法（溶菌酶-SDS-蛋白酶K法、改良CTAB法以及改良CTAB-溶菌酶）對晉西北酸粥中的微生物基因組DNA提取效果，旨在找到一種高效的提取方法來獲得高質(zhì)量的基因組DNA，為下一步研究晉西北酸粥中的微生物類群奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

晉西北酸粥發(fā)酵原液 從忻州本地獲得；Sodium-Chloride-Tris-EDTA Buffer（STE）（20 mL） NaCl 0.12 g，20 mmol/L Tris-Cl（pH8.0）10 mL，0.5 mol/L（w/v）EDTA 40 μL，ddH2O 9.96 mL；裂解緩沖液（20 mL）20 mmol/L Tris-Cl（pH8.0）10 mL，NaCl 0.12 g，0.5 mol/L （w/v）EDTA 400 μL，ddH2O 9.96 mL，121℃滅菌20 min，滅菌后加入溶菌酶200 mg；2×CTAB 2%CTAB（w/v），1.4 mol/L NaCl，0.1 mol/L EDTA（pH8.0），121℃滅菌20 min；10%SDS（十二烷基硫酸鈉）、蛋白酶-K （10 mg/mL） 購自生工生物工程（上海）股份有限公司；Tris-飽和酚 北京博奧拓達(dá)科技有限公司；TE 10 mmol/L Tris-HCl（pH8.0），1 mmol/L EDTA（pH8.0），121℃滅菌20 min；50×TAE（1 L） 準(zhǔn)確稱取Tris 242 g，EDTA 37.2 g于1 L燒杯中加入800 mL去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?，?7.1 mL冰乙酸，充分溶解，最后加去離子水定容至1 L，室溫保存；1×TAE 取50×TAE母液20 mL定容至1 L，室溫保存；Mr中科瑞泰（北京）生物科技有限公司。

試管恒溫加熱儀 北京來亨科貿(mào)有限責(zé)任公司；電熱恒溫水浴鍋 北京市醫(yī)療設(shè)備總廠；5417R型高速冷凍離心機(jī) 德國艾本德股份公司；DYY-6C型電泳儀 北京六一儀器廠；Gel Doc 2000 UV凝膠成像系統(tǒng)、ALS 1296 PCR儀 美國伯樂公司；酶標(biāo)儀 美國伯騰儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 溶菌酶-SDS-蛋白酶-K法［19］取酸粥發(fā)酵原液9 mL，每1 mL置于1支1.5 mL無菌離心管中，12000 r/min離心10 min，棄上清，用STE緩沖液洗菌兩次，取沉淀。將每三支離心管中的沉淀富集于一支無菌離心管中，得到三支含有3 mL菌液中菌體沉淀的離心管，標(biāo)號(hào)E1、E2和E3，用400 μL裂解液吹勻，37℃水浴裂解18 h（每隔1 h混勻一次）。裂解結(jié)束后加入45 μL 10%SDS，4.5 μL蛋白酶-K，55℃水浴1 h，每隔10 min上下混勻一次。在離心管中加入Tris-飽和酚、氯仿各225 μL進(jìn)行抽提，上下緩慢搖晃多次，12000 r/min離心10 min，吸上清至無菌離心管中，用與無菌離心管中液體等體積的氯仿抽提，上下緩慢搖晃多次之后，12000 r/min離心10 min，將所得上清液吸出置于新的無菌離心管中，加入2倍體積的異丙醇，上下輕輕振蕩，可見白色絮狀沉淀析出。將沉淀用1 mL 75%乙醇洗滌2次，風(fēng)干后溶于100 μL TE，60℃水浴1 h，4℃、12 h溶解。

1.2.2 改良CTAB法 根據(jù)張曉祥等［20］的CTAB法進(jìn)行改良。取酸粥發(fā)酵原液9 mL，每1 mL置于1支1.5 mL無菌離心管中，12000 r/min離心10 min，棄上清，用STE洗菌兩次，取沉淀。將每三支離心管中的沉淀富集于一支無菌離心管中，得到三支含有3 mL菌液中菌體沉淀的離心管，標(biāo)號(hào)C1、C2和C3，分別加入經(jīng)65℃預(yù)熱的300 μL 2×CTAB提取緩沖液，加2%β-巰基乙醇（1 mL 2×CTAB提取緩沖液中加2 μL），65℃水浴中輕輕混勻［11-12］，加400 μL 10%SDS，10 μL 10 mg/mL蛋白酶-K，混勻，置于65℃水浴1 h，每隔10 min上下?lián)u晃混勻，冷卻至室溫。在離心管中加入Tris-飽和酚、氯仿各355 μL進(jìn)行抽提，上下緩慢搖晃多次，12000 r/min離心10 min，吸上清至無菌離心管中，用與無菌離心管中液體等體積的氯仿抽提，上下緩慢搖晃多次之后，12000 r/min離心10 min，將所得上清液吸出置于新的無菌離心管中，加入2倍體積的異丙醇，上下輕輕振蕩，可見白色絮狀沉淀析出。將沉淀用1 mL 75%乙醇洗滌2次，風(fēng)干后溶于100 μL TE，60℃水浴1 h，4℃、12 h溶解。

1.2.3 改良CTAB-溶菌酶法 根據(jù)張曉祥等［20］的CTAB法進(jìn)行改良。取酸粥發(fā)酵原液9 mL，每1 mL置于1支1.5 mL無菌離心管中，12000 r/min離心10 min，棄上清，用STE洗菌兩次，取沉淀。將每三支離心管中的沉淀富集于一支無菌離心管中，得到三支含有3 mL菌液中菌體沉淀的離心管，標(biāo)號(hào)L1、L2和L3，分別加入經(jīng)65℃預(yù)熱的300 μL 2×CTAB提取緩沖液，加2%β-巰基乙醇（1 mL 2×CTAB提取緩沖液中加2 μL），在65℃水浴中輕輕混勻，加入溶菌酶（100 mg/mL）使其終濃度為10 mg/mL，加400 μL 10%SDS，10 μL 10 mg/mL蛋白酶-K，65℃水浴1 h，每隔10 min混勻。在離心管中加入Tris-飽和酚、氯仿各360 μL進(jìn)行抽提，上下緩慢搖晃多次，12000 r/min離心10 min，吸上清至無菌離心管中，用與無菌離心管中液體等體積的氯仿抽提，上下緩慢搖晃多次之后，12000 r/min離心10 min，將所得上清液吸出置于新的無菌離心管中，加入2倍體積的異丙醇，上下輕輕振蕩，可見白色絮狀沉淀析出。將沉淀用1 mL 75%乙醇洗滌2次，風(fēng)干后溶于100 μL TE，60℃水浴1 h，4℃、12 h溶解。

1.2.4 酶標(biāo)儀測DNA濃度 取對照液TE 2 μL，4℃、12 h溶解后的DNA樣品2 μL，點(diǎn)樣于酶標(biāo)儀點(diǎn)樣孔，測定所提取得到的微生物基因組DNA在260 nm和280 nm處吸光度值，以及在260 nm和280 nm處的比值，測得微生物基因組DNA的濃度，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.5 電泳 將提取到的DNA樣品，經(jīng)0.6%瓊脂糖凝膠電泳，Mr為λDNA/HindⅢ，Mr上樣2 μL，DNA樣品2 μL加1 μL 6×DNA Loading Buffer，電泳結(jié)果UV凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行檢測。

1.2.6 提取到的DNA樣品PCR及產(chǎn)物回收 將提取得到的微生物基因組DNA進(jìn)行PCR，方法如下。

反應(yīng)體系（50 μL）：10×Trans Easy Taq Buffer，5 μL；dNTP，2 μL；引物（20 μmol/L）各5 μL；Trans Easy Taq DNA polymerase，1 μL；DNA模板，1 μL；ddH2O補(bǔ)至50 μL。各試劑加好后，輕輕混勻。陰性對照不加模板。

反應(yīng)條件為：預(yù)變性94℃、5 min；變性94℃、30 s；退火55℃、30 s；延伸72℃、90 s；35個(gè)循環(huán)后，72℃保溫10 min。

擴(kuò)增產(chǎn)物和回收產(chǎn)物均經(jīng)0.6%的瓊脂糖凝膠電泳分離，UV凝膠成像系統(tǒng)檢測。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS軟件（版本18.0）Duncan多重比較法［21］進(jìn)行多個(gè)均數(shù)間的差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 晉西北酸粥微生物基因組DNA濃度比較

由圖1可知，溶菌酶-SDS-蛋白酶-K法所得離心管中DNA濃度為（1657.53±136.65）ng/μL。改良CTAB法所得離心管中DNA濃度為（1098.36±49.18）ng/μL。改良CTAB-溶菌酶法所得離心管中DNA濃度為（1308.08±55.38）ng/μL。溶菌酶-SDS-蛋白酶-K法提取所得的微生物基因組DNA濃度最高，改良CTAB-溶菌酶法次之，改良CTAB法最少。三種方法提取所得的微生物基因組DNA濃度之間存在顯著差異（p＜0.05）。

溶菌酶-SDS-蛋白酶K法，反應(yīng)條件比較溫和，需要時(shí)間較長，主要原因是酸粥這種谷物發(fā)酵產(chǎn)品中的微生物種類多、天然成分多，所以較長的裂解有利于基因組的提取，裂解時(shí)間約為18 h。沉淀基因組時(shí)加入75%的乙醇后，得到的是較為致密的DNA。TE溶解后DNA濃度高；改良CTAB法，試劑作用強(qiáng)烈，在短時(shí)間內(nèi)迅速裂解細(xì)胞，釋放出DNA，可能會(huì)對微生物基因組DNA造成損傷。提取到的DNA先呈松散絮狀，在不斷晃動(dòng)過程中逐漸致密，TE溶解后DNA濃度較溶菌酶-SDS-蛋白酶K法少，實(shí)驗(yàn)中所用到的β-巰基乙醇，刺激性強(qiáng)，有一定的毒性；改良CTAB-溶菌酶法，在改良CTAB法的基礎(chǔ)上，又加入了溶菌酶，希望在溶菌酶的作用下，可以更快地裂解細(xì)胞。但經(jīng)TE溶解后DNA濃度仍低于溶菌酶-SDS-蛋白酶K法，整個(gè)實(shí)驗(yàn)中所用到的β-巰基乙醇，刺激性強(qiáng)，有一定的毒性。提取時(shí)間也沒有縮短，反而消耗了大量試劑。

圖1 酶標(biāo)儀測定微生物基因組濃度Fig.1 Microbial genomic concentrations determined by microplate reader

2.2 晉西北酸粥微生物基因組DNA ABS260 nm/ ABS280 nm的結(jié)果比較

由圖2可知，溶菌酶-SDS-蛋白酶-K法所得DNA 的ABS260 nm/ABS280 nm為1.95±0.01。改良CTAB法所得DNA的ABS260 nm/ABS280 nm為1.92±0.03。改良CTAB-溶菌酶法所得DNA的ABS260 nm/ABS280 nm為1.94±0.03。結(jié)果表明3種方法提取得到的微生物基因組DNA純度高，所得到的微生物基因組DNA中蛋白質(zhì)以及RNA含量低，ABS260 nm/ABS280 nm均在1.8～2.0之間，可用于進(jìn)行后續(xù)相關(guān)研究。三種方法提取所得的微生物基因組DNA濃度之間存在顯著差異（p＜0.05）。

圖2 酶標(biāo)儀測定微生物基因組DNA ABS260 nm/ABS280 nm的比值Fig.2 The ratio of microbial genome DNA ABS260 nm/ABS280 nmdetermined by microplate reader

2.3 晉西北酸粥微生物基因組DNA樣品電泳檢測結(jié)果比較

由圖3可以看出，上述3種方法均可以提取到酸粥微生物完整的基因組DNA，大小約為23 ku，條帶較單一，未見明顯降解現(xiàn)象。溶菌酶-SDS-蛋白酶-K法DNA最亮，點(diǎn)樣孔處無蛋白質(zhì)殘留，改良CTAB 法DNA亮度最低，點(diǎn)樣孔處有少量蛋白質(zhì)殘留，改良CTAB-溶菌酶法DNA較亮，但比溶菌酶-SDS-蛋白酶-K法所得DNA亮度低，點(diǎn)樣孔處有少量蛋白質(zhì)殘留。

圖3 3種方法提取的DNA瓊脂糖凝膠電泳圖Fig.3 Agarose gel electrophoresis of DNA extracted by 3 methods

2.4 晉西北酸粥微生物基因組DNA樣品PCR結(jié)果比較

由圖4可知，不論是溶菌酶-SDS-蛋白酶-K法、改良CTAB法還是改良CTAB-溶菌酶法提取的DNA均可直接用于PCR，其PCR產(chǎn)物凝膠電泳結(jié)果均很亮，雜帶與目的條帶有一較為明顯的分界，陰性對照中無目的條帶。

圖4 3種方法提取的DNA PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖Fig.4 Agarose gel electrophoresis of PCR products ofDNA extracted by 3 methods

2.5 晉西北酸粥微生物基因組DNA樣品PCR產(chǎn)物膠回收結(jié)果比較

由圖5可知，溶菌酶-SDS-蛋白酶-K法、改良CTAB法、改良CTAB-溶菌酶法提取得到的DNA PCR產(chǎn)物膠回收后凝膠電泳條帶單一，亮度高，證明所提取的微生物基因組DNA中含有所需要的目的片段。

3 結(jié)論

溶菌酶-SDS-蛋白酶K法、改良CTAB法、改良CTAB-溶菌酶法這三種方法提取所得DNA濃度的平均值依次為1657.53、1098.36、1308.08 ng/μL，同時(shí)，三種方法得到DNA的ABS260 nm/ABS280 nm平均值依次為1.95、1.92、1.94，都表明本文中所使用的三種方法都可以得到質(zhì)量較高的酸粥微生物基因組DNA。但溶菌酶-SDS-蛋白酶K法實(shí)驗(yàn)刺激性弱、安全系數(shù)高，可以得到較高含量的微生物基因組DNA，所得微生物基因組DNA對后續(xù)實(shí)驗(yàn)有較大幫助；改良CTAB法雖然時(shí)間短，但是有刺激性氣味和一定的毒性，所得DNA濃度也較低；改良CTAB-溶菌酶法時(shí)間短，但與改良CTAB法效果相似，且耗費(fèi)試劑多。所以，溶菌酶-SDS-蛋白酶K法對于提取晉西北酸粥發(fā)酵過程中微生物基因組DNA效果最好。

圖5 3種方法提取的DNA PCR產(chǎn)物膠回收瓊脂糖凝膠電泳圖Fig.5 Agarose gel electrophoresis of PCR products recovery of DNA extracted by 3 methods

［1］（美）J.薩姆布魯克（Sambrook.J），（美）D.W.拉塞爾（Russell David W）.分子克隆實(shí)驗(yàn)指南［M］.第3版.黃培堂譯.北京：科學(xué)出版社，2005.

［2］熊麗莎，程月花，陸利霞，等.食品中致病菌總DNA快速提取方法比較［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（34）：13392-13394.

［3］李德林，敖宗華，鄧波，等.酒醅微生物總DNA提取方法研究［J］.釀酒科技，2014（1）：33-37.

［4］Zhao XM，Duszynski DW，Loker ES.A simple method of DNA extraction for Eimeria species［J］.Journal of Microbiological Methods，2001，44：131-137.

［5］張寧，王鳳山.DNA提取方法進(jìn)展［J］.中國海洋藥物，2004 （2）：40-46.

［6］薛建崗.內(nèi)蒙古西部地區(qū)自然發(fā)酵酸粥化學(xué)成分及微生物組成分析［J］.食品科技，2013，38（7）：11-14.

［7］陳邦，范代娣，王琰.土壤微生物DNA提取方法的研究［J］.西北大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2009，39（5）：785-788.

［8］李紅，周友兵，陳炳耀，等.分子生物學(xué)技術(shù)在微生物多樣性研究中的應(yīng)用［J］.河北大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2004，23（4）：450-454.

［9］許文濤，郭星，羅云波，等.微生物菌群多樣性分析方法的研究進(jìn)展［J］.食品科學(xué)，2009，30（7）：258-265.

［10］謝冬梅，陳國明，何德，等.華山松不同部位DNA提取方法比較研究［J］.湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2014，32（3）：255-261.

［11］陳昆松，李方，徐昌杰，等.改良CTAB法用于多年生植物組織基因組DNA的大量提?。跩］.遺傳，2004，26（4）：529-531.

［12］余志雄，歐高政，陳清西，等.火龍果總DNA提取方法比較研究［J］.中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2010，26（4）：300-303.

［13］陳艷秋.樺褐孔菌菌株遺傳多樣性及人工培養(yǎng)條件優(yōu)化模式研究［D］.長春：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

［14］宋培勇.從土壤中提取DNA方法比較［J］.微生物學(xué)雜志，2006，26（1）：109-112.

［15］劉小翠，李云波，趙思明.生米發(fā)酵食品的研究進(jìn)展［J］.食品科學(xué)，2006，26（10）：616-619.

［16］Ishii S.Study on the kumiss（airag）of Mongolian nomads after severe cold in the winters of 2000 and 2001［J］.Milk Science， 2003，52（1）：49-52.

［17］陳忠軍，楊曉清，烏尼.內(nèi)蒙古河套地區(qū)酸粥中乳酸菌的分離及其生物學(xué)特性的研究［J］.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，23 （3）：62-65.

［18］張軼，王玉麗，陳曉前，等.傳統(tǒng)發(fā)酵食品—漿水中微生物的分離與初步鑒定［J］.食品科學(xué)，2007，28（1）：219-222.

［19］王慶容，李順，宋培勇，等.2種改進(jìn)的未知細(xì)菌DNA提取方法［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（12）：5381-5382，5607.

［20］張曉祥，王玲，壽路路.一種快速提取小麥基因組DNA的改良CTAB方法［J］.中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2012（36）：46-49.

［21］Ray A A.SAS User's Guide：Statistics［M］.Cary，NC：SAS Institute，1985.

Comparison of microbial genome DNA extraction methods used in the fermentation process of northwestern Shanxi acid gruel

CHANG Jian，WANG Qi*
（School of Life Science，Shanxi University，Taiyuan 030006，China）

In order to obtain a simple and efficient extraction method of microbial genome DNA from northwestern Shanxi acid gruel，three extraction methods（lysozyme-SDS-proteinase K method，improved CTAB method and improved CTAB-lysozyme method）were compared according to the concentrations of extracted microbial genome DNA.The results showed that the effect of the lysozyme-SDS-proteinase K method was the best，flowed by improved CTAB-lysozyme method and improved CTAB method.By lysozyme-SDS-proteinase K method，higher quality of microbial DNA could be obtained and the DNA concentration was 1657.53 ng/μL.When using the improved CTAB-lysozyme method and improved CTAB method，the DNA concentrations were respectively 1308.08 ng/μL and 1098.36 ng/μL.The total DNA of 16S rDNA gene PCR amplification was tested.The results showed that the purpose stripe was clear in recycling products，which indicated that the microbial genome DNA obtained in this experiment had high content and complete structure.All the results showed that the lysozyme-SDS-proteinase K method was the best to extract the microbial genome DNA of northwestern Shanxi acid gruel.

northwestern Shanxi acid gruel；microbial genome DNA；extraction method

TS201.3

A

1002-0306（2016）02-0209-05

10.13386/j.issn1002-0306.2016.02.034

2015－06－30

常?。?990-），男，碩士研究生，研究方向：資源微生物，E-mail：yizizhan151@163.com。

*通訊作者：王琪（1982-），女，博士，講師，研究方向：資源微生物，E-mail：wangqi@sxu.edu.cn。