張杰，施務(wù)務(wù)，葛少波，王玉寶

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·藥物與臨床·

痤瘡I號顆粒制備工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

張杰，施務(wù)務(wù)，葛少波，王玉寶

目的：探討?zhàn)畀廔號顆粒制備工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用L9(34)正交設(shè)計安排實驗，用薄層法進行定性鑒別，用HPLC法測定丹參酮ⅡA的含量。結(jié)果：痤瘡I號顆粒的提取工藝為：丹參加6倍量濃度為70%乙醇，提取2次，每次1.5 h。藥渣與處方其余藥材：加入10倍量水，煎煮3次，每次2 h；在薄層色譜中可檢出特征斑點，丹參酮ⅡA進樣量在0.06～1.92 g范圍內(nèi)線性關(guān)良好(r=0.9999)，平均回收率98.36%(RSD=0.929%，n=6)；痤瘡I號顆粒中丹參酮ⅡA的含量不低于5 mg/g。結(jié)論:該方法提取工藝科學(xué)合理；定性鑒別準(zhǔn)確，HPLC法易于操作，重復(fù)性好，能夠控制痤瘡I號顆粒的質(zhì)量。

痤瘡I號顆粒； 制備工藝； 正交設(shè)計； 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

痤瘡(acne)是皮膚科最常見的慢性炎癥性毛囊皮脂腺皮膚病，俗稱“粉刺”、“青春痘”，中醫(yī)又稱“酒刺”、“風(fēng)刺”、“肺風(fēng)粉刺”等。痤瘡是一種累及毛囊皮脂腺的慢性炎癥性皮膚，好發(fā)于青春期的男性和女性顏面、頸、軀干上部等部位，男性略多于女性，是臨床常見而又棘手的疾病，它直接影響患者容貌，為青年人所苦惱[1-3]。痤瘡I號是由丹參、生地、玄參、麥冬等8味中藥組成的復(fù)方，具有涼血解毒、燥濕清熱、活血消腫之功效，用于治療血熱濕毒、瘀血阻滯所致的痤瘡。痤瘡I號作為院內(nèi)協(xié)定方(湯劑)在臨床上長期應(yīng)用，療效很好。但傳統(tǒng)的湯劑有煎煮費時，攜帶、使用不便，不易保存，口感不佳等缺點；若對處方進行優(yōu)化，研制成具有易溶解、易吸收、生物利用度高，攜帶及服用方便等特點的醫(yī)院中藥制劑，可更好地服務(wù)患者。對此，我們根據(jù)處方中各味藥的特性、劑量和臨床實際需要等進行劑型和工藝的篩選以及質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等研究，研制成功痤瘡I號復(fù)方顆粒劑，現(xiàn)報告如下。

1　材料與儀器

1.1材料藥品：丹參、地黃、玄參、麥冬、夏枯草、茵陳、白花蛇舌草、敗醬草、(均購于濟人藥業(yè)有限責(zé)任公司)；丹參ⅡA對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號110766-200416)；甲醇(GR，天津市四友精細化學(xué)品有限公司)；重蒸水。其它試劑均為AR。

1.2儀器RE-200E型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海東鈺制冷有限公司)；HG101型電熱鼓風(fēng)干燥箱(南京實驗儀器廠)；DZF-6210真空干燥箱(上海市實驗儀器廠)；DW-1K調(diào)溫電熱器(通州市申通電熱儀器廠)；HL-SHZ-95循環(huán)水試真空泵(河南鞏義市英峪儀器廠)；STC2-SC69-02C快速水分測定儀(上海第二天平儀器廠)；BC1-HW.SY21-K8C電熱恒溫水浴鍋(江蘇省醫(yī)療器械廠)；AR1140型電子天平(Adventurer)；AS312B超聲提取器(上海醫(yī)療器械五廠)。

2　方法與結(jié)果

2.1痤瘡I號顆粒提取工藝

2.1.1正交設(shè)計根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果，選擇以加醇量(A)、乙醇濃度(B)、提取時間(C)、提取次數(shù)(D)作為考察因素，按L9(34)正交表安排試驗，平行操作，以提取物干膏得率和干膏中丹參酮ⅡA的含量作為考察指標(biāo)。因素水平表見表1；結(jié)果及方差分析，見表2，表3。

表1　提取因素水平

2.1.2實驗結(jié)果及分析對正交實驗結(jié)果進行直觀分析和方差分析，表明各因素對于干膏得率影響大小順序為： C>B>A>D，主要因素為C，C因素對乙醇提取干膏得率的影響有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，其他因素?zé)o顯著性影響，其影響最佳組合為A1B3C3D3。對丹參酮ⅡA含量影響大小的順序為: A>B>C>D，主要因素為A，A因素對丹參酮ⅡA含量的影響有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，其影響最佳組合為A1B2C2D2。雖然提取物干膏得率提取2次與提取3次有差異，但提取2次主要成分丹參酮ⅡA含量較高，綜合考慮，為了降低服用量，根據(jù)生產(chǎn)的實際情況，確定最佳工藝為加6倍量濃度為70%乙醇，提取2次，每次1.5 h。藥渣與處方其余藥材以出膏率為考察指標(biāo)，采用平行實驗方法得最佳提取工藝為：加入10倍量水，煎煮3次，每次2 h。

表2　正交試驗結(jié)果

表3　丹參酮ⅡA含量方差分析

F0.01(2,2)=99，F(xiàn)0.05(2.2)=19.90

2.2痤瘡I號顆粒制備工藝將稠膏(相對密度1.30～1.35，60℃熱測)稍冷后，等量遞增加入混合均與的可溶性淀粉、處方量甜菊素攪拌均勻，70℃以下真空干燥；將干燥后的物料密閉冷卻至室溫后，可溶性淀粉補足量，然后粉碎，過80目篩，粉碎后的物料經(jīng)質(zhì)檢合格后用80%乙醇潤濕制軟材，12目篩制粒，60～70℃鼓風(fēng)干燥，整粒，鋁塑復(fù)合袋包裝，每袋裝10 g顆粒，即得。

2.3痤瘡I號顆粒的定性鑒別取本品3 g，研細，加乙醚25 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。再取丹參酮ⅡA對照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含2 mg的溶液，做為對照品溶液。取按處方工藝制成的不含丹參的樣品，同法制成陰性對照溶液。照《中國藥典》2015年版四部通則“0502薄層色譜法”試驗，吸取上述供試品溶液10 μl、對照藥材溶液5 μl、對照品溶液5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯(4：1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同的暗紅色斑點。陰性對照無干擾，見圖1。

1.缺丹參陰性對照 2. 供試品 3.丹參對照藥材4.丹參酮ⅡA對照品圖1　丹參薄層鑒別圖

2.4痤瘡I號顆粒的質(zhì)量檢查

2.4.1水分取同批痤瘡I號顆粒3份，按照《中國藥典》2015年版四部“通則0832 水分測定法”項中烘干法測定，平均含水量為4.2% (小于6.0%)。

2.4.2溶化性取痤瘡I號顆粒顆粒10 g，加熱水 200 ml，攪拌5 min，觀察，顆粒全部溶化，有輕微渾濁，說明該顆粒的溶化性合格。

2.4.3粒度按照《中國藥典》2015年版四部“通則0982粒度測定法”第二法，取顆粒30 g，稱定重量，置規(guī)定的藥篩中，保持水平狀態(tài)過篩，左右往返，邊篩動邊輕3 min，不能通過一號篩和能通過五號篩的顆粒為4.6 g(小于 15%)。

2.5含量測定

2.5.1色譜條件選擇色譜柱Waters 5C18-AR-Ⅱ色譜柱(4.6×250 mm)；流動相：甲醇-水(85:15)；檢測波長對丹參酮ⅡA對照品溶液進行紫外掃描并參照《中國藥典》2015年版一部下丹參藥材項下含量測定方法，選擇270 nm作為檢測波長；流速：1.0 ml/min；進樣量：10 μl；柱溫：25℃。此條件下對照品、供試品以及空白對照品圖譜如下所示。

2.5.2對照品溶液制備取丹參酮ⅡA對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含16 μg的溶液，搖勻，即得。

2.5.3供試品溶液制備方法取裝量差異項下的本品，研細，精密稱定樣品2 g置錐形瓶中，精密加入50 ml甲醇溶液，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，用甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45 m)濾過，即得。搖勻，0.45 m的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.5.4線性考察精密吸取濃度為0.24 mg/ml丹參酮ⅡA對照品溶液0.25 ml，0.5 ml，1 ml，2 ml，4 ml及8 ml置10 ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取上述溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖與峰面積，結(jié)果表明，丹參酮ⅡA在0.06～1.92 g范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.5.5精密度試驗精密吸取樣品供試溶液10 μl，按上述色譜條件注入液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，結(jié)果RSD=0.83%(n=6)，說明本方法精密度好，準(zhǔn)確。

2.5.6穩(wěn)定性試驗精密稱取同一批號樣品按含量測定項下制備供試液，在0，2，4，6，8，10 h分別吸取10 μl注入液相色譜儀，記錄峰面積，計算RSD=1.73%，記錄色譜圖。結(jié)果表明，本樣品溶液在10 h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.5.7重現(xiàn)性試驗精密稱取同一批號樣品(批號：100525)共6份，按含量測定項下制備供試液，精密量取該溶液10 μl，按上述色譜條件注入液相色譜儀，計算丹參酮ⅡA含量，計算RSD為0.438%(n=5)。

2.5.8加樣回收試驗精密稱取已知含量的同一批號的樣品(批號：100525，含量：含丹參酮ⅡA為0.655 mg/g)約1 g共6份，置50 ml量瓶中，再分別精密加入濃度為0.258 mg/ml的丹參酮ⅡA對照品溶液2.6 ml，以下按供試品溶液的制備方法配制供試液。分別取該溶液和對照品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并按外標(biāo)法以峰面積計算，結(jié)果見表3，結(jié)果丹參酮ⅡA平均回收率為98.36%，RSD為0.929% (n=6)。可見本品本法測丹參酮ⅡA含量回收率良好，方法準(zhǔn)確、可靠。

圖2　丹參酮ⅡA對照溶液HPLC色譜圖

圖3　樣品溶液HPLC色譜圖

圖4　空白溶液HPLC色譜圖

2.4.9樣品測定連續(xù)3批樣品按上述方法制備樣品溶液，分別精密量取樣品溶液和對照品溶液各10 μl注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計算含量，見表4。

表4　樣品含量測定結(jié)果 (n=3)

3　討論

以干浸膏提取率、丹參酮ⅡA提出量為指標(biāo)，經(jīng)正交試驗及其驗證試驗優(yōu)選，結(jié)合實際生產(chǎn)需求，最后確定的提取工藝為：丹參加6倍量濃度為70%乙醇，提取兩次，每次1.5 h。藥渣與處方其余藥材：加入10倍量水，煎煮3次，每次2 h。

采用該制備工藝制備的痤瘡I號顆粒，克服了湯劑煎煮不便、服用量大、易霉質(zhì)變等缺點。此外，可考慮選擇適宜的矯味劑如木糖醇[4]，解決該藥味苦難咽之缺點，以提高患者用藥依從度。痤瘡I號在臨床應(yīng)用時為1劑服1 d，痤瘡I號顆粒采用藥材超微粉碎、回流提取濃縮等制備工藝，從而極大地提高了中藥材的有效利用，節(jié)約了寶貴的中草藥資源，但其藥效學(xué)有待于深入研究。

[1]孫莉,李娟,顏敏,等.痤瘡的發(fā)病機制研究進展[J].山東醫(yī)藥,2013,53(32):16-19．

[2]羅瓔,胡冬裴．中西醫(yī)治療痤瘡研究進展[J].河南中醫(yī),2014,34(1):181-183．

[3]趙辨．中國臨床皮膚病學(xué)[M]．4版．南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2010：1165．

[4]張明,鄧裕全,胥蘇勛．疏肝健中顆粒制備工藝研究[J]．西部中醫(yī)藥,2014,(12):17-18．

蚌埠市2014年度醫(yī)療衛(wèi)生科技項目(No 20140325)

單位] 安徽省蚌埠市第一人民醫(yī)院 中藥房，233000

[作者簡介] 張杰(1972-)，男，主管中藥師，大專。

王玉寶，男，主任中藥師。

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10.14126/j.cnki.1008-7044.2016.05.040

R 282.71

A

1008-7044(2016)05-0590-04

2016-06-03)