黃志盛，陳業(yè)倩，劉敏健

1.廣州市番禺區(qū)沙灣人民醫(yī)院消化科，廣東廣州 511483；2.廣州市番禺區(qū)市橋醫(yī)院內(nèi)科，廣東廣州 511400；3.廣州市番禺區(qū)何賢紀(jì)念醫(yī)院手術(shù)室，廣東廣州 511400

*論著*

胸腺素β4在結(jié)腸息肉和結(jié)腸癌中表達(dá)及其意義

黃志盛1，陳業(yè)倩2，劉敏健3

1.廣州市番禺區(qū)沙灣人民醫(yī)院消化科，廣東廣州 511483；2.廣州市番禺區(qū)市橋醫(yī)院內(nèi)科，廣東廣州 511400；3.廣州市番禺區(qū)何賢紀(jì)念醫(yī)院手術(shù)室，廣東廣州 511400

目的 探討胸腺素β4在結(jié)腸息肉和結(jié)腸癌中表達(dá)及其意義。方法 選取2015年7月—2016年7月在該院治療的結(jié)腸息肉和結(jié)腸癌患者67例，根據(jù)患病類(lèi)型分為結(jié)腸息肉組28例，結(jié)腸癌組28例，結(jié)腸息肉+結(jié)腸癌組11例。分別取標(biāo)本（手術(shù)切除或息肉摘除）和距切除標(biāo)本15 cm以上正常腸粘膜組織，提取其mRNA行RT-PCR，通過(guò)凝膠掃描儀進(jìn)行各電泳條帶和光量子強(qiáng)度分析，測(cè)定各標(biāo)本中胸腺素β4的相對(duì)含量；抽取患者血清，用胸腺素β4酶聯(lián)免疫吸附試劑盒檢測(cè)患者血清中胸腺素β4在息肉和腸癌切除術(shù)前、術(shù)后1月及術(shù)后 6個(gè)月的表達(dá)情況。 結(jié)果 胸腺素β4的mRNA表達(dá) 腸息肉、腸癌患者中，均有胸腺素β4mRNA的表達(dá)；且相對(duì)其正常腸組織中含量[結(jié)腸息肉組（0.41±0.17）、結(jié)腸癌組（0.50±0.14）]，其病理標(biāo)本中mRNA均有高表達(dá)[結(jié)腸息肉組（0.59±0.22）、結(jié)腸癌組（0.75±0.23）]，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；結(jié)腸息肉組切除術(shù)前、術(shù)后1個(gè)月及術(shù)后6個(gè)月，胸腺素β4的表達(dá)，P＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；結(jié)腸癌組和結(jié)腸息肉+結(jié)腸癌組切除術(shù)前、術(shù)后1個(gè)月血清胸腺素β4的表達(dá)有顯著變化，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而術(shù)前、術(shù)后6月則無(wú)顯著變化，P＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 胸腺素 β4在息肉及腸組織中均有高表達(dá)，可作為觀察腸癌療效的參考指標(biāo)。

胸腺素β4；結(jié)腸息肉；結(jié)腸癌

胸腺素β4分子量約5KD，含有43個(gè)氨基酸，大部分沒(méi)有折疊結(jié)構(gòu)，能與多種分子結(jié)合，因此，其功能具有多樣性[1]。國(guó)外學(xué)者Kaur等[2]研究發(fā)現(xiàn)，胸腺素β4與炎癥反應(yīng)、創(chuàng)傷愈合、腫瘤轉(zhuǎn)移、血管再生、細(xì)胞調(diào)亡等密切相關(guān); Sonia等學(xué)者[3]更證實(shí)胸腺素β4在結(jié)腸息肉和結(jié)腸癌中均有表達(dá)。目前國(guó)內(nèi)對(duì)胸腺素β4在結(jié)腸息肉和結(jié)腸癌中表達(dá)的研究極少，該文選取2015年7月—2016年7月在該院治療的結(jié)腸息肉和結(jié)腸癌患者67例，用Trizol法，分別提取腸息肉、腸癌患者病變組織及距該組織15 cm以上正常腸組織，通過(guò)RT-PCR技術(shù)及分光光度計(jì)測(cè)定各標(biāo)本的mRNA相對(duì)含量；采用胸腺素β4酶聯(lián)免疫吸附試劑盒（K9520,Immunodiagnostik AG，Bensheim，German)，檢測(cè)結(jié)腸息肉和結(jié)腸癌患者切除術(shù)前、術(shù)后1個(gè)月及術(shù)后6個(gè)月血清中的胸腺素β4的表達(dá)，探討其表達(dá)意義。

1 資料與方法

1.1 入選標(biāo)準(zhǔn)

選取2015年7月—2016年7月在該院治療的結(jié)腸息肉和結(jié)腸癌患者。年齡＞18歲，病理診斷為炎性息肉、增生性息肉、腺瘤及其伴輕、中度非典型增生歸為結(jié)腸息肉，病理診斷為腺癌、黏液癌、未分化癌和腺瘤伴重度非典型歸為結(jié)腸癌。

1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)

①年齡＜18歲的患者；②除結(jié)腸息肉和結(jié)腸癌外，尚患有其它腫瘤、創(chuàng)傷、炎癥等疾病的患者；③隨訪(fǎng)失聯(lián)的患者。

1.3 分組

①結(jié)腸息肉組28例，其中男15例，女13例，年齡22～84歲；②結(jié)腸癌組28例，其中男17例，女11例，年齡42～74歲；③結(jié)腸息肉+結(jié)腸癌組11例，其中男6例，女5例，年齡41～82歲。3組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.4 標(biāo)本采集

手術(shù)切除或息肉摘除標(biāo)本和正常腸組織標(biāo)本置于-80℃冰箱保存。

1.5 血樣采集

入選患者均于清晨采取空腹靜脈血3 mL，于2 h內(nèi)以3 000 r/mim離心15 min，分離血清，置于-80℃冰箱保存待測(cè)。

1.6 檢測(cè)方法

1.6.1 mRNA的提取 切除或摘除的各標(biāo)本放入研缽研磨，按照Trizol試劑盒的方法，取標(biāo)本加入1 mL的Trizol，室溫下孵育5 min以使細(xì)胞蛋白充分裂解，后將裂解液移至1.5 mL EP管中；再每個(gè)EP管中加入0.2 mL氯仿，蓋緊管蓋，用力振蕩10～15 s，使氯仿與Trizol充分融合，再在室溫下反應(yīng)5 min，隨后以12 000 g速度下離心15 min，將上層水相移入新的EP管中，加入0.5 mL的異丙醇，在充分振蕩后室溫下孵育10 min，再次在4℃環(huán)境下以12 000 g速度離心15 min，取出EP管，棄去上清，留下管的白色沉淀，再加入75%乙醇至EP管中，每管加量700 l，用移液器小心將沉淀吹起，而后在4℃環(huán)境下以7 500 g速度離心5 min，離心后棄去上清，將EP管放置在室溫下干燥約15 min，最后加入適量的DEPC水[4-5]。

1.6.2 引物 胸腺素 β4：5’-ACAAACCCGATATGGCTGAG-3’；內(nèi)對(duì)照GAPDH：5’-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3’[6]。

1.6.3 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA、PCR擴(kuò)增及相對(duì)定量分析 提取總RNA后，經(jīng)凝膠電泳鑒定其質(zhì)量，分光光度計(jì)測(cè)定RNA含量；用TAKAPa RT逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，用7 500 Fast PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，取PCR產(chǎn)物在普通瓊脂糖凝膠電泳后，溴化乙啶染色，通過(guò)凝膠掃描儀進(jìn)行DNA電泳條帶和光量子強(qiáng)度分析，將胸腺素β4與GAPDH比值作為胸腺素β4表達(dá)水平的參數(shù)，對(duì)胸腺素β4的PCR產(chǎn)物進(jìn)行相對(duì)定量。

1.6.4 血清中胸腺素β4濃度測(cè)定 采用胸腺素β4酶聯(lián)免疫吸附試劑盒（K9520,Immunodiagnostik AG，Bensheim，German)進(jìn)行檢測(cè)。

1.7 統(tǒng)計(jì)方法

用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，胸腺素β4相對(duì)表達(dá)量用（±s）表示，兩組之間的差異采用t檢驗(yàn)，計(jì)量資料以中位數(shù)和四分位數(shù)間距表示，組內(nèi)資料比較用Wilcoxon檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

腸息肉、腸癌患者中，均有胸腺素β4mRNA的表達(dá)；且相對(duì)其正常腸組織中含量[腸息肉組（0.41±0.17）、腸癌組（0.50±0.14），其病理標(biāo)本中mRNA均有高表達(dá)[腸息肉組（0.59±0.22）]、腸癌組（0.75±0.23）]，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，如表1。

表1 腸息肉組及腸癌組中患者胸腺素β4的mRNA含量比較（±s）

表1 腸息肉組及腸癌組中患者胸腺素β4的mRNA含量比較（±s）

組別 病理標(biāo)本 距病理標(biāo)本15 cm以上正常腸組織 t P腸息肉組腸癌組0.59±0.22 0.75±0.23 0.41±0.17 0.50±0.14 4.38 6.79＜0.05＜0.05

息肉組切除術(shù)前、術(shù)后1個(gè)月及術(shù)后6個(gè)月，胸腺素β4的表達(dá)無(wú)顯著變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；腸癌和息肉腸癌組切除術(shù)前、術(shù)后1個(gè)月胸腺素β4的表達(dá)有顯著變化（P＜0.05），而術(shù)前、術(shù)后6個(gè)月則無(wú)顯著變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），如表2。

表2 息肉組、腸癌組和息肉腸癌組切除術(shù)前、術(shù)后1個(gè)月及術(shù)后6個(gè)月患者血清胸腺素β4的比較

3 討論

隨著人們生活習(xí)慣的改變，腸癌的發(fā)生率及死亡率每年呈現(xiàn)遞增的趨勢(shì)，據(jù)估計(jì)，2014年美國(guó)預(yù)計(jì)將新增136830例，因腸癌死亡50370例，位居惡性腫瘤死亡人數(shù)的第3位，成為第3大最常見(jiàn)的惡性腫瘤[6]，因此預(yù)防腸癌的發(fā)生、發(fā)展刻不容緩。大腸癌的病因尚未完全清楚，一般認(rèn)為，大部分的大腸癌起源于腸息肉和腺瘤[7-8],因此預(yù)防大腸癌的發(fā)生發(fā)展，應(yīng)從腸息肉和腺瘤開(kāi)始。

在該實(shí)驗(yàn)中，胸腺素β4的mRNA表達(dá) 腸息肉、腸癌患者中，均有胸腺素β4mRNA的表達(dá)；且相對(duì)其正常腸組織中含量，其病理標(biāo)本中mRNA均有高表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05，提示胸腺素β4的mRNA高表達(dá)與腸息肉和腸癌的發(fā)作相關(guān)；結(jié)腸息肉組切除術(shù)前、術(shù)后1個(gè)月及術(shù)后6個(gè)月，胸腺素β4的表達(dá)無(wú)顯著變化，P＞0.05差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，考慮息肉較小，其切除對(duì)胸腺素β4的表達(dá)未發(fā)作顯著變化；結(jié)腸癌組和結(jié)腸息肉+結(jié)腸癌組切除術(shù)前、術(shù)后1個(gè)月血清胸腺素β4的表達(dá)有顯著變化，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而術(shù)前、術(shù)后6個(gè)月則差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），考慮腸癌病灶切除1個(gè)月后，其胸腺素β4的mRNA表達(dá)減少，以致血清中胸腺素β4的表達(dá)也相應(yīng)減少，切除6個(gè)月后，部分患者癌癥復(fù)發(fā)，以致其血清中胸腺素β4的表達(dá)也相應(yīng)增大，由于病例較少，展望以后通過(guò)更多病例說(shuō)明這一點(diǎn)。周瑞等[9]、馮君蘭等[10]研究為該研究提供了理論依據(jù)。

綜上所述，胸腺素β4在息肉及腸組織中均有高表達(dá)，可作為觀察腸癌療效的參考指標(biāo)。

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[1]胡晨姣.胸腺素β4對(duì)重癥胰腺炎大鼠急性肝臟損傷的保護(hù)作用[J].現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2015，27（5）：585-586.

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[9]周瑞，袁宏銀，熊斌.大腸癌組織中胸腺素β4基因表達(dá)及其臨床意義[J].腫瘤防治研究，2005，32（9）:545-548.

[10]馮君蘭，汪昱.血液 miRNA檢測(cè)在結(jié)直腸癌診斷、預(yù)后及化療療效評(píng)估中的應(yīng)用進(jìn)展[J].山東醫(yī)藥，2015（11）: 98-100.

Expression and Significance of Thymosin β4 in Colon Polyps and Colon Cancer

HUANG Zhi-sheng1，CHEN Ye-qian2，LIU Min-jian3
1.Digestive Department of Guangzhou City，People's Hospital of Panyu District Bay，Guangzhou，Guangdong Province，511483 China；2.Department of Medicine，Guangzhou Panyu City Bridge Hospital，Guangzhou，Guangdong Province，511400 China；3.Operation Room,Panyu District Memorial Hospital,Guangzhou，Guangzhou，Guangdong Province,511400 China

Objective To investigate the expression and significance of thymosin β4 in colon polyps and colon cancer.Methods 67 cases of colon polyps and colon cancer patients treated in our hospital from July 2015 to July 2016 were selected.According to the type of disease,28 cases were divided into cases of colonic polyps,28 cases of colon cancer group,11 cases of colon polyps and colon cancer group.The specimens were (resection or polyp)and from resected specimens of 15 cm above the normal intestinal mucosa,extracted the mRNA useing RT-PCR analysis the electrophoretic bands and photon intensity through the gel scanner,the relative content of each sample in the determination of Serum thymosin β4.The expression of thymosin β4 in patients with polyps and colorectal cancer before、after 1 month and after 6 months of operation was detected by using the serum of patients with thymus peptide and 4 enzyme linked immunosorbent assay.Results mRNA expression of thymosin β4 of intestinal polyps,colorectal cancer patients,all have the expression of the mRNA of thymosin β4,The expression of mRNA in the pathological specimen was higher[colonic polyps（0.59±0.22）、colon cancer group（0.75±0.23)]than those of normal intestinal tissue content[(colonic polyps（0.41±0.17）、colon cancer group（0.50±0.14 ）],P＜0.05,the difference was statistically significant;the difference between the expression of thymosin β4 in before、after 1months and after 6 months in the colonic polyps was no statistically significant;the expression of thymosin β4 before the operation in the colon cancer group and colon polyps and colon cancer group was higher than those of after the operation 1 month,P＞0.05,the difference was statistically significant;difference between the expression of thymosin β4 before the operation and after the operation 6 months was no statistically significant,P＞0.05.Conclusion Thymosin β4 was highly expressed in the polyp and intestinal tissue,and serum thymic peptide 4 could be used as a reference index for the observation of the curative effect of colorectal cancer.

Thymosin β4;Colonic polyp;Colon cancer

R735.34

A doi 10.11966/j.issn.2095-994X.2016.02.04.01

2016-10-15；

2016-11-12

廣州市番禺區(qū)科技工業(yè)商務(wù)和信息化局，2015年科技計(jì)劃醫(yī)藥衛(wèi)生預(yù)立項(xiàng)項(xiàng)目（2015-Z03-45）。

黃志盛（1979.10-），男，廣東番禺人，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：胸腺素β4在腸息肉和腸癌的表達(dá)意義。