趙南晰，王曼力

(北華大學(xué)藥學(xué)院，吉林 吉林　132013)

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雙氯芬酸鉀乳膠劑的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

趙南晰，王曼力

(北華大學(xué)藥學(xué)院，吉林 吉林132013)

目的考查自制的雙氯芬酸鉀乳膠劑的抗炎鎮(zhèn)痛作用及有效性.方法采用小鼠二甲苯致耳腫脹實(shí)驗(yàn)、皮膚毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)及小鼠扭體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)3 種模型比較自制的雙氯芬酸鉀乳膠劑和市售扶他林乳膠的抗炎作用和鎮(zhèn)痛作用的區(qū)別.結(jié)果與空白組比較，雙氯芬酸鉀乳膠劑與扶他林均具有顯著的抗炎鎮(zhèn)痛作用.自制的雙氯芬酸鉀乳膠劑的耳腫脹抑制率和疼痛抑制率高于陽性藥扶他林，但雙氯芬酸鉀乳膠劑的小鼠腹部皮膚毛細(xì)血管通透性抑制率低于陽性藥扶他林.結(jié)論自制雙氯芬酸鉀乳膠劑與扶他林比較具有較強(qiáng)的全身抗炎鎮(zhèn)痛作用.

雙氯芬酸鉀；乳膠劑；抗炎作用；鎮(zhèn)痛作用

【引用格式】趙南晰，王曼力.雙氯芬酸鉀乳膠劑的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究[J].北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2016，17(5)：644-647.

非甾體抗炎鎮(zhèn)痛藥(non-steroidal anti-inflamm- atory drug，NSAID)是在世界上應(yīng)用最為廣泛的一種處方藥，僅美國年銷售額就可達(dá)20億美元.但NSAID副反應(yīng)發(fā)生率較高，美國的一項(xiàng)調(diào)查顯示：在住院患者中有約有8%的患者死于與NSAID相關(guān)的胃腸道潰瘍綜合征.具有消化道潰瘍出血病史的患者在應(yīng)用NSAID時(shí)，消化道再次出血的發(fā)生率極高.另外還有很多研究[1-2]報(bào)道了NSAIDs的不良反應(yīng)發(fā)生情況.由于NSAIDs胃腸道毒副反應(yīng)極其常見，使它們在臨床上的應(yīng)用受到了一定限制.因此，NSAIDs經(jīng)皮給藥系統(tǒng)研究成為近年的研究熱點(diǎn).

經(jīng)皮給藥可提高患者的可接受性，能顯著提高某些具有肝臟首過效應(yīng)藥物的生物利用度，降低胃腸道不良反應(yīng)，能保持長效、藥物釋放速度恒定，能降低給藥次數(shù)，利于自主用藥，并能在發(fā)生不良反應(yīng)時(shí)及時(shí)停止用藥[3].雙氯芬酸(diclofenac acid)為苯乙酸類衍生物，是一種常用的非甾體抗炎藥，1988年在美國上市，主要用于治療骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎以及其他由于創(chuàng)傷或手術(shù)引起的疼痛等.雙氯芬酸可局部應(yīng)用，這種藥物肝首過效應(yīng)大，口服后只有50%的藥物能夠進(jìn)入體循環(huán)，且口服胃腸道副反應(yīng)高達(dá)10%.同時(shí)雙氯芬酸還具備可以制成經(jīng)皮給藥制劑的特點(diǎn)：生物利用度低，生物半衰期短和劑量小等.目前，市售的雙氯芬酸局部外用制劑都是以雙氯芬酸鹽為主藥，如雙氯芬酸吡咯烷軟膏、雙氯芬酸鈉凝膠、雙氯芬酸二乙胺貼劑和乳膠劑(扶他林，Votalin)等.其中，扶他林乳膠劑的市場占有率最高.本研究中將以扶他林為陽性對(duì)照，考察自制的雙氯芬酸鉀乳膠劑的抗炎鎮(zhèn)痛作用.

1　材料與方法

1.1試藥

受試藥：雙氯芬酸鉀乳膠，規(guī)格：10 mg/g(按雙氯芬酸鈉計(jì))，自制；空白對(duì)照：空白乳膠，空白乳膠給藥面積與受試藥相同，自制 ；陽性對(duì)照藥：扶他林(雙氯芬酸二乙胺乳膠劑)，規(guī)格：10 mg/g(按雙氯芬酸鈉計(jì)，北京諾華制藥有限公司).

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠，雄性，18～22 g，由長春生物制品研究有限責(zé)任公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(吉)2011-0007.在良好通風(fēng)的環(huán)境下飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)室溫度為(20±2)℃，實(shí)驗(yàn)室相對(duì)濕度為(50±5)%.所有動(dòng)物均能自由地?cái)z取飼料和生活用水，顆粒飼料由長春生物制品研究有限責(zé)任公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供.

1.3試劑

二甲苯(AR)(麥克林(中國)有限公司)；甲醛溶液(AR)(天津市永大化學(xué)試劑有限公司)；依文思藍(lán)(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；丙酮(AR)(沈陽市華東試劑廠)；冰乙酸(AR)(沈陽化學(xué)試劑廠).

1.4儀器

微量移液器(上海求精生化試劑儀器有限公司)；ESJ110-4B 電子分析天平(沈陽龍騰電子有限公司)；TDZ4-WS型低速自動(dòng)平衡離心機(jī)(長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；7200型可見分光光度計(jì)(尤尼柯(上海)儀器有限公司).

1.5雙氯芬酸鉀乳膠劑對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

昆明種小鼠，雄性，體質(zhì)量18～22 g，30只，隨機(jī)分成3組，每組10只.在試驗(yàn)前12 h于小鼠腹部相同部位剃毛，脫毛面積約1.5 cm×1.5 cm.

受試組于小鼠腹部剃毛區(qū)給予雙氯芬酸鉀乳膠劑(自制)0.5 mL，然后用紗布覆蓋，再用無刺激性膠布和繃帶加以固定,給藥面積為1.2 cm×0.6 cm.空白組給予空白乳膠0.5 mL，給藥方法和給藥面積與給藥組相同.陽性對(duì)照組給予扶他林(雙氯芬酸二乙胺乳膠劑)0.5 mL，給藥方法和給藥面積與給藥組相同.末次給藥1 h后，將二甲苯涂于小鼠右耳，20 min后處死小鼠，用打孔器打下耳片，稱重，計(jì)算耳腫脹度(mg)及腫脹抑制率(%)[4]：

腫脹度(mg)= 右耳耳片重(mg)-左耳耳片重(mg)；

腫脹抑制率= [空白組平均耳片重(mg)-給藥組平均耳片重(mg)]/空白組平均耳片重(mg)×100%.

1.6雙氯芬酸鉀乳膠劑對(duì)二甲苯致小鼠腹部皮膚毛細(xì)血管通透性的影響

動(dòng)物分組及給藥方式同1.5.末次給藥1 h后，去除藥物及其固定物，小鼠尾靜脈注射依文思藍(lán)溶液，劑量10 mL/kg，而后在小鼠腹部的給藥處涂抹二甲苯，劑量20 μL/只.脫頸椎處死小鼠后剪下其腹部呈藍(lán)色的皮膚，搗碎，用70%丙酮水溶液4 mL浸泡，浸泡兩次，2 h/次，合并浸泡液，1 500 r/min離心10 min，取上清液，590 nm處測其光密度值[5-6].

抑制率=空白組吸光度-給藥組吸光度/空白組吸光度×100%.

1.7雙氯芬酸鉀乳膠劑對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

動(dòng)物分組及給藥方式同1.5.給藥1次/h，連續(xù)給藥3次，末次給藥1 h后除去藥物，并用清水擦拭給藥部位.而后小鼠腹腔注射乙酸溶液(臨用前配制)，劑量0.1 mL/10 g，在安靜的環(huán)境中，記錄小鼠在腹腔注射后20 min內(nèi)的扭體次數(shù)(writhing response frequency，WRF)，并計(jì)算疼痛抑制率[7-8](pain inhibition ratio，PIR)(%).

疼痛抑制率=(空白組扭體反應(yīng)次數(shù)-給藥組扭體反應(yīng)次數(shù))/空白組扭體反應(yīng)次數(shù)×100%.

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2　結(jié)　　果

2.1雙氯芬酸鉀乳膠劑對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制作用

與空白組相比，雙氯芬酸鉀乳膠劑與扶他林均能顯著抑制二甲苯所致的小鼠耳腫脹，且雙氯芬酸鉀乳膠劑耳腫脹抑制率高于陽性藥扶他林.見表1.

2.2雙氯芬酸鉀乳膠劑對(duì)二甲苯致小鼠腹部皮膚毛細(xì)血管通透性的抑制作用

與空白組相比，雙氯芬酸鉀乳膠劑與扶他林均能顯著抑制二甲苯所致的小鼠腹部皮膚毛細(xì)血管通透性，且雙氯芬酸鉀乳膠劑的小鼠腹部皮膚毛細(xì)血管通透性抑制率(57.64%)低于陽性藥扶他林(69.95%).見表2.

2.3雙氯芬酸鉀乳膠劑對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的抑制作用

與空白乳膠組比較，自制的雙氯芬酸鉀乳膠劑和陽性對(duì)照組均可顯著減少由醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)，其疼痛抑制率分別為67.80%(P<0.001)和45.52%(P<0.05)，并且雙氯芬酸乳膠劑組的疼痛抑制率高于陽性對(duì)照組(P<0.05).見表3.

表1　雙氯芬酸鉀乳膠劑對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

注：與空白乳膠劑組比較，*：P<0.05，**：P<0.01

表2　雙氯芬酸鉀乳膠劑對(duì)二甲苯致小鼠腹部皮膚毛細(xì)血管通透性的影響

注：與空白乳膠劑組比較，*：P<0.05，**：P<0.01

表3　雙氯芬酸鉀乳膠劑對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

注：與空白乳膠劑組比較，*：P<0.05，**：P<0.01

3　討　　論

現(xiàn)今，NSAIDs的外用制劑已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于鎮(zhèn)痛和抗炎.雙氯芬酸是一種常用的NSAIDs，經(jīng)常用于治療各種急性的或長期的疼痛和炎癥.在制劑中，雙氯芬酸通常是以鈉鹽或鉀鹽的形式存在，雙氯芬酸具有弱酸性，而且其血漿蛋白結(jié)合率高，分布容積低，更易于在深部的炎性區(qū)域濃集.據(jù)報(bào)道，雙氯芬酸在關(guān)節(jié)處的濃度是其在血漿中的20倍以上.像其他的NSAIDs一樣，雙氯芬酸通過抑制環(huán)氧化酶的活性，進(jìn)一步抑制前列腺素的生成.雙氯芬酸口服制劑在臨床上有近30 a的應(yīng)用歷史，而且其有效性和良好的耐受性已經(jīng)得到充分證實(shí).然而，某些患者口服雙氯芬酸后會(huì)出現(xiàn)全身性副作用，尤其是需要長期大劑量服用這種藥物時(shí).為降低副作用的發(fā)生率，研究人員研制了雙氯芬酸局部外用制劑，以達(dá)到向疼痛和炎性區(qū)域定向輸送藥物的目的，同時(shí)達(dá)到降低藥物在全身系統(tǒng)中吸收的目的.

雙氯酸鉀凝膠經(jīng)過皮膚局部外用給藥，可方便患者使用、減少胃腸刺激，不經(jīng)肝首過代謝，肝毒性小[9].雙氯芬酸是一種常用的弱肝酸性非甾體抗炎藥，易與堿成鹽.雙氯芬酸自身的脂溶性較高，成鹽后可以在一定程度上改變其溶解性能，適度增加其水溶性.藥物局部吸收的首要屏障是表皮,表皮是由角質(zhì)層和真皮層組成，脂溶性藥物易于通過角質(zhì)層，而藥物通過水性真皮層則必須具備一定的水溶性.在過去二十年中，人們致力于雙氯芬酸鹽的研制[10-15]，制備出雙氯芬酸的鈉鹽、鉀鹽、乙醇胺鹽、二乙醇胺鹽、三乙醇胺鹽、二乙胺鹽、三乙胺鹽、吡咯烷醇胺鹽等.在這些鹽中，有一些雙氯芬酸鹽與雙氯芬酸相比，具有更低的熔點(diǎn)和較高的水中溶解度，因此更易于經(jīng)皮吸收.目前上市的雙氯芬酸外用產(chǎn)品多數(shù)為其鹽.本研究中，自制的雙氯芬酸鉀乳膠劑的耳腫脹抑制率和疼痛抑制率高于陽性藥扶他林，但雙氯芬酸鉀乳膠劑的小鼠腹部皮膚毛細(xì)血管通透性抑制率低于陽性藥扶他林，造成這一現(xiàn)象的原因可能與雙氯芬酸鉀和雙氯芬酸二乙胺的性質(zhì)有關(guān).雙氯芬酸鉀的水中溶解度高，而脂溶性低于雙氯芬酸二乙胺，因此，兩者相比，雙氯芬酸鉀經(jīng)皮吸收進(jìn)入血液循環(huán)的速度更快一些，從而能發(fā)揮更好的全身作用；與此相反，雙氯芬酸二乙胺更易于在局部組織中滯留，從而局部抗炎作用更高.另外，在本研究中，雖然未對(duì)藥物的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行測定，但通過藥效實(shí)驗(yàn)的結(jié)果我們可以推斷，雙氯芬酸鉀乳膠能夠及時(shí)、足量地將主藥輸送到靶部位以發(fā)揮其抗炎鎮(zhèn)痛作用.

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【責(zé)任編輯：陳麗華】

On the Anti-inflammatory and Analgesic Effects of Diclofenac Potassium Emulgel

Zhao Nanxi，Wang Manli

(School of Pharmacy，Beihua University，Jilin 132013，China)

Objective To study the anti-inflammatory and analgesic effects of self-made diclofenac potassium emulgel，and to evaluate the efficiency of the emulgel.Method The anti-inflammatory and analgesic effects were compared between the self-made diclofenac potassium emulgel and purchased Votalin emulgel based on three animal models，including ear swelling and capillary permeability of abdominal skin induced by xylene in mice，and writhing response induced by acetic acid in mice.Results Compared with the control group，both the self-made emulgel and purchased emulgel exhibited obvious anti-inflammatory and analgesic effects.The ear swelling inhibition ratio and pain inhibition ratio of the self-made emulgel were both higher than those of vltaren emulgel.While，the capillary permeability inhibition ratio of the self-made was lower than that of the positive control.Conclusion Compared with Votalin，the self-made diclofenac potassium emulgel has better anti-inflammatory and analgesic effects in the whole body.

Diclofenac potassium；emulgel；anti-inflammatory effect；analgesic effect

1009-4822(2016)05-0644-04

10.11713/j.issn.1009-4822.2016.05.019

2016-02-04

吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(20140520048JH，20130522054JH).

趙南晰(1985-)，女，博士，講師，主要從事經(jīng)皮給藥系統(tǒng)研究，E-mail：nancy_z3023@126.com；通信作者：王曼力(1979-)，女，博士，講師，主要從事經(jīng)皮給藥系統(tǒng)研究，E-mail：bhwangml@163.com.

R971.1；R969.4

A