陳　燕　譚 　為　李晨陽(yáng)　徐　芳　趙　軍　邢建國(guó)*

1. 新疆醫(yī)科大學(xué)，新疆　烏魯木齊　830011；2. 新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所，新疆　烏魯木齊　830004

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藥物研究

新疆圓柏葉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

陳燕1,2譚 為2李晨陽(yáng)2徐芳2趙軍2邢建國(guó)2*

1. 新疆醫(yī)科大學(xué)，新疆烏魯木齊830011；2. 新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所，新疆烏魯木齊830004

目的：建立新疆圓柏葉的質(zhì)量控制方法。方法：采用性狀、顯微鑒別、薄層色譜鑒別、水分測(cè)定、總灰分測(cè)定、酸不溶性灰分測(cè)定、浸出物測(cè)定、揮發(fā)油含量測(cè)定等方法。結(jié)果：建立新疆圓柏葉性狀和顯微、薄層色譜等的鑒別方法，制定其水分不得過(guò)9.5%，總灰分不得過(guò)7.0%，酸不溶性灰分不得過(guò)1.0%，醇溶性浸出物不得少于23.0%，揮發(fā)油含量不得少于1.8%(mL/g)。結(jié)論：制定的新疆圓柏葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全面、可控。

新疆圓柏葉；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；顯微鑒別；薄層色譜鑒別

新疆圓柏又名砂地柏、叉子圓柏和臭柏等，為柏科圓柏屬植物SabinavulgarisAnt.的常綠匍匐灌木，廣泛分布于我國(guó)新疆、甘肅、內(nèi)蒙和陜北的干旱荒山和沙地之中[1]。多年來(lái)，新疆以圓柏葉代替?zhèn)劝厝~供藥用，為本地習(xí)用品[2]。新疆圓柏葉入蒙藥(伊曼—阿日查)，能清熱、利尿、止血、消腫、治傷及祛黃水、主治腎與膀胱熱、發(fā)癥、痛風(fēng)、游痛癥等[3]，并具有治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、小便不利等疾病的功效[4]。本所碼依拉·買(mǎi)買(mǎi)提依明[5]等只收集一批藥材對(duì)其的性狀鑒別、顯微鑒別、理化鑒別、揮發(fā)油測(cè)定進(jìn)行了初步探討。，本文收集了不同產(chǎn)地的14批新疆圓柏葉藥材，按2010版《中國(guó)藥典》要求對(duì)新疆圓柏葉的性狀、水分、灰分、浸出物及揮發(fā)油等質(zhì)量方面進(jìn)行較為系統(tǒng)的研究，以期為新疆圓柏葉的質(zhì)量控制提供試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1　儀器與材料

1.1儀器CX31RTSF型顯微鏡(奧林巴斯(中國(guó))有限公司)；AL204型電子天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；AS10200AD型超聲波清洗器(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；WHF-203B三用紫外分析儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)。

1.2藥材新疆圓柏藥材均于2014年6月采集自全疆各地，共14批；經(jīng)何江副研究員鑒定為柏科植物新疆圓柏 Sabina vulgaris Ant. Var.vulgaris 的干燥葉，批號(hào)分別為20140604、20140605-1、20140605-2、20140605-3、20140605-4、20140608-1、20140608-2、20140609-1、20140609-2、20140610-1、20140610-2、20140402、20140508-1、20140508-2。

1.3試藥蘆丁對(duì)照品(批號(hào)：100080-200707)；槲皮苷(批號(hào)：111538-200504)；其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1性狀鑒別本品葉貼伏于枝上，深綠色或黃綠色。葉二型，鱗葉交互對(duì)生，相互緊覆，菱形或菱狀卵圓形，長(zhǎng)1～2.5mm，先端鈍或微尖，全緣，背面中部生有橢圓形腺體；刺葉生于幼齡植株上，有時(shí)壯齡植株亦有少量刺葉，常交互對(duì)生或兼有三葉交叉輪生，排列緊密，向上斜展，長(zhǎng)3～7mm，先端刺尖，上面凹，下面拱圓，中肋明顯，被白粉。葉質(zhì)脆，易折斷。氣清香，味苦澀、微辛。見(jiàn)圖1。

2.2顯微鑒別表皮細(xì)胞類長(zhǎng)方形，長(zhǎng)38～133μm，寬10～25μm；氣孔甚多，凹陷形，略木質(zhì)化，副衛(wèi)細(xì)胞環(huán)式，氣孔長(zhǎng)36～57μm，寬21～37μm；纖維細(xì)長(zhǎng)，單個(gè)或成束，有的壁較厚，孔溝狹窄，有的壁較薄，孔溝寬，直徑7～35 μm；木薄壁細(xì)胞多見(jiàn)，呈念珠狀，略為木質(zhì)化，長(zhǎng)20～119μm，寬11～36μm。偶見(jiàn)梯紋或具緣紋孔管胞。見(jiàn)圖1。

葉橫切面呈類橢圓形或不規(guī)則形，中央為小枝部分，周邊為鱗片狀葉。外被厚角質(zhì)層，表皮細(xì)胞整齊1列，葉肉柵欄細(xì)胞短柱狀，海綿組織細(xì)胞環(huán)狀排列，細(xì)胞間隙較疏松，其間有1～2個(gè)樹(shù)脂道；嫩枝部分韌皮部細(xì)胞細(xì)小，排列整齊，形成層1列，木質(zhì)部由管胞組成，中央髓部細(xì)胞類圓形、扁小。見(jiàn)圖2。

2.3薄層色譜鑒別取藥材粉末5g，加50mL石油醚(60℃～90℃)，加熱回流提取3次，每次1h，棄去石油醚液，藥渣揮干，加甲醇20mL，超聲處理20min，濾過(guò)，將濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液。另取蘆丁對(duì)照品、槲皮苷對(duì)照品，加甲醇分別制成每1mL含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和對(duì)照品溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-水-甲酸(7∶3∶1∶0.2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的斑點(diǎn)。見(jiàn)圖3。

2.4水分[6]水分測(cè)定參照中國(guó)藥典2010年版一部附錄IX H水分測(cè)定法(甲苯法)，結(jié)果見(jiàn)表1。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，新疆圓柏葉水分平均為6.57%，最高7.99%，以最高值的20%設(shè)限，建議制定新疆圓柏葉水分限度為不得過(guò)9.5%。

2.5總灰分和酸不溶性灰分[6]總灰分和酸不溶性灰分測(cè)定參照中國(guó)藥典2010年版一部附錄IX K灰分測(cè)定法，結(jié)果見(jiàn)表1。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，新疆圓柏葉總灰分平均4.57%，最高5.76%，酸不溶性灰分平均0.37%，最高0.54%，以最高值的20%設(shè)限，建議制定新疆圓柏葉總灰分限度不得過(guò)7.0%，酸不溶性灰分限度不得過(guò)1.0%。2.6浸出物測(cè)定[6]浸出物測(cè)定參照中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅩA浸出物測(cè)定法，以70%乙醇為溶劑，采用熱浸法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，新疆圓柏葉熱醇法浸出物含量平均29.01%，幅度23.85%～40.69%，建議制定新疆圓柏葉醇溶性浸出物限度為不得少于23.0%。

2.7揮發(fā)油含量測(cè)定[6]揮發(fā)油含量測(cè)定參照中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅩD揮發(fā)油測(cè)定法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，新疆圓柏葉揮發(fā)油含量平均2.33%，含量幅度0.60%～4.20%，以平均值的80%設(shè)限，建議制定新疆圓柏葉揮發(fā)油含量限度為不得少于1.8%(mL/g)。

表1　新疆圓柏葉水分、灰分、浸出物和揮發(fā)油含量測(cè)定結(jié)果

3　討論

3.1新疆圓柏為裸子植物，在顯微鑒別中，新疆圓柏葉的氣孔比較特殊，當(dāng)做粉末制片，加入間苯三酚時(shí)，氣孔可以染成紅色，原因?yàn)樾陆畧A柏葉為沙地荒山植物，喜干旱，保衛(wèi)細(xì)胞側(cè)壁較厚，凹陷型，為了防止水分蒸發(fā)，略為木質(zhì)化。

3.2張文斌等[2]在文獻(xiàn)中記載新疆圓柏葉槲皮素的含量測(cè)定，流動(dòng)相為乙腈-0.4%磷酸(45∶55)，槲皮素平均含量為1.04%。李晨陽(yáng)等[6]在文獻(xiàn)中記載，對(duì)新疆圓柏葉中槲皮苷的含量測(cè)定，流動(dòng)相為乙腈-0.0036mol/L磷酸。結(jié)果，槲皮苷2.2～88.0μg/mL與峰面積的線性關(guān)系良好(r=0.9999)，樣品在32h穩(wěn)定。兩者都采用乙腈-磷酸為流動(dòng)相對(duì)新疆圓柏葉的不同成分進(jìn)行了測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定、可行，為新疆圓柏葉的進(jìn)一步研究提供了一定的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。3.3黃酮類化合物是新疆圓柏中所含的主要化學(xué)成分之一，其中蘆丁和槲皮苷在是其中含量較高的成分。蘆丁具有抗炎、抗病毒等作用，在臨床用于防治腦溢血、高血壓、視網(wǎng)膜出血、紫瘢和急性出血性腎炎[8-10]；槲皮苷具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗病毒等多種生物活性[11-12]；兩者藥理活性與新疆圓柏葉抗炎、活血止痛的功能主治相符合。在薄層色譜鑒別中，以蘆丁和槲皮苷為對(duì)照品進(jìn)行新疆圓柏葉藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。本文通過(guò)對(duì)不同展開(kāi)劑的篩選，優(yōu)選出了適合新疆圓柏葉藥材中蘆丁和槲皮苷的薄層色譜鑒別方法。

[1]中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志(第7卷)[M].北京:科學(xué)出版社,1978:360.

[2] 張文斌,趙汝海,程斌.HPLC法測(cè)定新疆圓柏葉中槲皮素的含量[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2004,20(3)：223-224.

[3] 田旭平,胡開(kāi)峰.不同季節(jié)新疆圓柏總黃酮含量的變化[J]生物科技通訊[J],2006,17(3):387-388.

[4] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(下冊(cè))[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1977:1886.

[5] 瑪依拉·買(mǎi)買(mǎi)提明，滿而哈巴·海如拉，于睿，等.新疆圓柏葉藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的探討[J].時(shí)珍國(guó)藥醫(yī)藥，2010,21(7)：1686-1687.

[6] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010：附錄52,53,62,63.

[7] 李晨陽(yáng),高慧,陳燕，等,HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地新疆圓柏葉中槲皮苷[J].華西藥學(xué)雜志，2015,30(6):720-721.

[8]黃尚榮.藥用蘆丁化學(xué)成分提取方法及其藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2009(23): 100-103.

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[10] 徐魁,孫兆偉,蔡艷麗.荷花中蘆丁含量測(cè)定方法研究[J].藥學(xué)研究,2013(8):452-454.

[11] 劉麗,侯立強(qiáng),滿瑩.槲皮苷對(duì)撲熱息痛誘導(dǎo)的大樹(shù)急性肝損傷的保護(hù)作用研究[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生,2007,8(10):98.

[12] 楊琳.槲皮苷藥理活性研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2015,3(6):61-62.

(編輯：穆麗華)

Study on the Quality Standard ofSabinaVulgarisFolium

CHEN Yan1,2TAN wei2LI chenyang2XU fang2ZHAO jun2XING jianguo2*

1. Chinese Medicial Department , Xinjiang Medicial University,Urumqi 830011,China;2.Xinjiang Institute of Materia Medica, Urumqi 830004, China

Objective To establish the quality standard ofSabinaVulgarisFolium. Methods It was indentified by macroscopical identification, microscopical identification and TLC identification. The methods for quality control were also including the determination of water, total ash, acid-insoluble ash, extract and volatile oil. Results To establish the characters in macroscopical identification, microscopical identification and TLC identification of Leaves ofSabinaVulgaris. The maximum of moisture should not exceed 9.5%. The maximum of total ash and acid-insoluble ash should not exceed 7.0% and 1.0%, respectively. The yield of ethanol extracts should not be less than 23.0%. The content of volatile oil should not be less than 1.8%(mL/g). Conclusion The quality standard established can be used for the quality control of the Leaves ofSabinaVulgaris.

SabinaVulgaris.; Quality Standard; Microscopical Identification; TLC Identification

2016-05-27

新疆維吾爾自治區(qū)科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(201433103)。

陳燕(1985-)，女，在讀研究生，助理研究員，主要從事維吾爾藥材質(zhì)量和化學(xué)成分研究。E-mail:chenmaomao158@163.com

邢建國(guó)(1968-)，男，漢族，碩士研究生，研究員，研究方向?yàn)橹兴幖熬S吾爾藥新劑型制劑。E-mail: xjgdd@163.com

R282.5

A

1007-8517(2016)16-0014-03