張永豪

黔東南民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州　凱里　556000

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正交法優(yōu)化白芍炮制工藝的研究

張永豪

黔東南民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州凱里556000

目的：通過(guò)正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化白芍炮制工藝，篩選出最佳提取工藝。方法：采用正交試驗(yàn)法，對(duì)乙醇提取白芍中芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷的工藝條件進(jìn)行研究，以芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷含量為綜合考察指標(biāo)；對(duì)炮制方法酒炙、蜜麩制、酒潤(rùn)麩炒等主要影響因素進(jìn)行考察，用HPLC法分析比較不同炮制法對(duì)白芍總苷(芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷)含量變化的影響。結(jié)果：最終確定的較佳酒炙方法為：悶潤(rùn)時(shí)間為60min，炮制酒量為15%(每100g藥材加15ml酒)，烘制溫度100℃，烘制時(shí)間60min；蜜麩炙白芍較佳，蜜麩比例為麥麩：蜂蜜：水=10∶5∶1；酒潤(rùn)后麩炒白芍較佳，用酒量為12%。結(jié)論：優(yōu)選出的炮制方法能有效保證白芍中指標(biāo)性成分含量，為制定其飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)以及臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

白芍；炮制；正交試驗(yàn)；高效液相色譜法

白芍系毛莨科植物芍藥(PaeonialactifloraPall.)的去皮干燥根[1-3]，其性微苦，味苦酸[4]，具有養(yǎng)血柔肝，緩中止痛，斂陰收汗的功能。其主要化學(xué)成分為單萜類(lèi)、三萜類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)及黃酮類(lèi)化合物等[5]。白芍的質(zhì)量控制一般以其主要成分芍藥苷(Paeoniflorin)為指示成分，而芍藥苷也是主要藥效成分[6]。白芍炮制后有效成分的作用是目前臨床運(yùn)用的研究熱點(diǎn)之一[7-11]。近年來(lái)，對(duì)白芍常用的生品、清炒品、麩炒品、酒炒品、醋炒品等炮制方法[12]，通過(guò)查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，對(duì)白芍中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷提取工藝研究報(bào)道較多[13-14]，為合理提取白芍有效成分提供了一定支撐。因此，研究擬以芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷含量為綜合考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)方法對(duì)炮制影響提取工藝的主要影響因素進(jìn)行系統(tǒng)深入研究，以期獲得能夠同時(shí)兼顧化學(xué)和藥效學(xué)指標(biāo)的工藝參數(shù)，為白芍藥材的深度開(kāi)發(fā)利用提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，同時(shí)也為其他中藥炮制品的提取工藝提供科學(xué)參考。

1　儀器與試藥

1.1儀器高效液相色譜儀(日本島津)；電子分析天平(AB204-S)；HS10260D型號(hào)超聲波清洗器(天津恒奧科技公司)；SKP-01型號(hào)烘箱(湖北黃石市醫(yī)療器械廠)。

1.2試藥芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)：0736-201117，中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所)；芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品(批號(hào)：0532-201159，中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所)；乙腈、甲醇為色譜純；水為娃哈哈純凈水，紹興黃酒(浙江古越龍山紹興酒股份有限公司)，其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1樣品含量測(cè)定方法學(xué)考察2.1.1色譜條件色譜柱：Agilent-zorbax C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μL。對(duì)照品，樣品色譜圖見(jiàn)圖1～3。

2.1.2對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取芍藥內(nèi)酯苷及芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成20μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.1.3供試品溶液的制備取白芍藥材粉末(過(guò)60目篩)約0.1g，精密稱(chēng)定，置50mL容量瓶中，加35mL稀乙醇，密塞，搖勻超聲處理30min，放冷，用稀乙醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò)；取續(xù)濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。2.1.4線性關(guān)系考察分別精密吸取芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品溶液8μL、10μL、12μL、14μL、16μL，注入液相色譜儀，依法測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別吸取芍藥苷對(duì)照品溶液8μL、10μL、12μL、14μL、16μL注入高效液相色譜儀，指標(biāo)成分體積為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得芍藥苷的回歸方程為：y=78491x+27847，R2=0.9992；在0.16～0.32μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。芍藥內(nèi)酯苷的回歸方程：y=24590x+6374.2，R2=0.999；在0.48～0.96μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.1.5精密度試驗(yàn)分別精密吸取芍藥苷對(duì)照品和芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品10μL，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算峰面積的積分值。芍藥內(nèi)酯苷峰面積的RSD=0.67%；芍藥苷峰面積的RSD=0.83%。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.1.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液分別在2、4、6、8、10、12h時(shí)進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積積分值。芍藥內(nèi)酯苷峰面積的RSD=0.95%，芍藥苷峰面積的RSD=1.77%，結(jié)果表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.1.7重復(fù)性試驗(yàn)精密稱(chēng)取同一樣品6份，每份約0.1g，按2.3項(xiàng)下方法制備，按上述方法測(cè)定。結(jié)果芍藥內(nèi)酯苷峰面積的RSD=1.44%，芍藥苷峰面積的RSD=2.05%。表明此方法重復(fù)性良好。2.1.8加樣回收率試驗(yàn)分別精密稱(chēng)取白芍藥材粉末9份，每份約0.05g，按80%、100%、120%分別加入芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品溶液，按供試品溶液制備方法處理，按上述色譜條件測(cè)定；結(jié)果芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷平均回收率分別為：102.87%、101.84%，RSD分別為：1.03%、1.08%。見(jiàn)表1、2。

表1　芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表2　芍藥內(nèi)酯苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.2酒炙正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.2.1方法根據(jù)炮制工藝，傳統(tǒng)鍋炒法難以實(shí)現(xiàn)對(duì)溫度的控制，將傳統(tǒng)的鍋炒改用烘箱烘制，選擇可能影響酒炙白芍飲片質(zhì)量的四個(gè)因素：悶潤(rùn)時(shí)間、酒量、烘制溫度、烘制時(shí)間，選用L9(43)正交實(shí)驗(yàn)，見(jiàn)表3。各組分取凈白芍片，實(shí)驗(yàn)安排表依照《中國(guó)藥典》(2010版)酒白芍項(xiàng)下炮制。

表3　正交實(shí)驗(yàn)因素水平表

2.2.2結(jié)果取上述酒炙正交試驗(yàn)項(xiàng)下樣品按2.1.3項(xiàng)溶液的制備方法制成各供試品溶液。按上述色譜分離條件，進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表4。

2.2.3結(jié)論經(jīng)SPSS對(duì)下表數(shù)據(jù)分析知，因素B炮制酒量在水平3下對(duì)芍藥苷的含量存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，最佳的炮制方法為：悶潤(rùn)時(shí)間為60min，炮制酒量為15%(每100g藥材用15ml酒)，烘制溫度100℃，烘制時(shí)間60min。酒炙后提高白芍有效成分的提取，通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)選較佳酒炙白芍的炮制品，對(duì)提高藥物的療效具有一定意義。

2.2.4驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)根據(jù)酒炙正交試驗(yàn)得出最佳酒炙炮制條件為2.2.3項(xiàng)結(jié)論。取白芍生品按照最佳酒炙炮制條件進(jìn)行處理，然后取樣品按2.1.3項(xiàng)溶液的制備方法制成各供試品溶液。按上述色譜分離條件，進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表5。

表4　酒炙正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表5　酒炙正交實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3蜜麩制白芍實(shí)驗(yàn)

2.3.1方法先用麩∶蜜∶水為10∶10∶1、10∶5∶1、10∶2∶1制不同比例的蜜麩，取10%蜜麩(每100g藥材用蜜麩10g)，依照《中國(guó)藥典》(2010版)麩炒炮制項(xiàng)下進(jìn)行炮制，用中火將炒鍋加熱至麩下煙起，即可投入藥材，迅速均勻翻動(dòng)，炒至藥材表面黃色或深黃色，取出，攤開(kāi)晾涼。

2.3.2結(jié)果取上述蜜麩炙實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下樣品按2.1.3項(xiàng)溶液的制備方法制成各供試品溶液。按上述色譜分離條件，進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表6。

2.3.3結(jié)論從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，用10∶5∶1的蜜麩炒制白芍，其炮制品的芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷含量較高，由此可優(yōu)化和選擇白芍的炮制方式。

表6　蜜麩炙白芍實(shí)驗(yàn)結(jié)果　(n=2)

2.4酒潤(rùn)麩炒白芍實(shí)驗(yàn)

2.4.1方法取白芍藥材，先將待炮制品分別用12%、15%黃酒悶潤(rùn)60min，再用10%麥麩(每100g藥材用麥麩10g)照“麩炙法”項(xiàng)下進(jìn)行炮制，即得。

2.4.2結(jié)果取上述酒潤(rùn)后麩炒項(xiàng)下樣品按2.1.3項(xiàng)溶液的制備方法制成各供試品溶液。按上述色譜分離條件，進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表7。

2.4.3結(jié)論從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，用12%的酒量，使白芍在酒潤(rùn)后麩炒后，其炮制品的芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷含量最高；可多方面增加白芍的炮制方法，從中優(yōu)選最佳方式。

表7　酒潤(rùn)后麩炒白芍實(shí)驗(yàn)結(jié)果　(n=2)

3　討論

實(shí)驗(yàn)為使炮制溫度便于控制,采用烘箱進(jìn)行炮制。供試品酒白芍中芍藥苷的提取方法按照《中國(guó)藥典》(2010版)超聲提取法進(jìn)行提?。淮送膺€可用回流提取方法，同時(shí)對(duì)一批樣品進(jìn)行兩種提取方法制得兩組供試品溶液，經(jīng)HPLC法測(cè)定，其芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷含量各有差異，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理提取率基本一致，根據(jù)提取工藝的復(fù)雜性，故選擇超聲提取法。本文通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化白芍炮制，優(yōu)選炮制品，以提高藥物療效。試驗(yàn)結(jié)果表明，為臨床選用蜜麩炒白芍及制定麩炒白芍飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)并確定了最佳炮制工藝方法；酒潤(rùn)后麩炒白芍結(jié)合兩種輔料的優(yōu)點(diǎn)，使炮制過(guò)后的白芍更有利于臨床使用；探討白芍的炮制方法，通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行驗(yàn)證分析，優(yōu)化出較佳炮制工藝，有利于提高白芍有效成分的提取；優(yōu)選出的炮制方法能有效保證白芍中指標(biāo)性成分含量，為制定其飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)以及臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

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(編輯：陶希睿)

The research of radix paeoniea alba processing method

ZHANG Yonghao

Qiaodongnan National Polytechnic,Kaili 556000,China

Objective The orthogonal experimental method radix paeoniae alba was optimized processing technology, selected the best extraction process.By orthogonal test, the ethanol extract of paeonia lactiflora lactone and paeoniflorin in radix paeoniae alba process conditions were studied, with peony lactone glycosides and paeoniflorin content as a comprehensive indicator;Bran system for main processing method of wine, honey and wine embellish bran Fried is intended to explore the main influence factors, using HPLC analysis and comparison of different processing method on radix paeoniae alba total glycosides (paeonia lactiflora lactone and paeoniflorin content changes.Results Better wine for the final main method is: boring time for 60min, processing capacity of 15% (per 100g medicine plus 10ml wine), baking temperature of 100℃, bake time 60min;Honey bran main root of herbaceous peony better bran ratio of wheat gluten: honey: water = 10∶5∶1;After wine embellish bran Fried radix paeoniae alba better use alcohol is 12%.Conclusion Optimization of processing methods can effectively guarantee the major ingredient content in radix paeoniae alba, to develop its yinpian quality standards, and provide evidence for clinical use.

Radix paeoniae alba,Processing;The orthogonal experiment.High performance liquid chromatography

2016-05-21

張永豪(1987-)，男，苗族，在讀研究生，助教，研究方向?yàn)橹兴帉W(xué)及民族藥苗提取，分析及產(chǎn)品開(kāi)發(fā)等研究。E-mailL:501209935@qq.com

R284

A

1007-8517(2016)16-0023-04