李桂華

紫外分光光度法與反相高效液相色譜法測(cè)定阿昔洛韋眼用凝膠中阿昔洛韋的含量

李桂華

目的 探討紫外分光光度法及反相高效液相色譜法測(cè)定阿昔洛韋眼用凝膠中阿昔洛韋含量的可行性。方法 采用紫外分光光度法、反相高效液相色譜法根據(jù)相同方法制備阿昔洛韋眼用凝膠試品后于252 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其阿昔洛韋含量。結(jié)果 高效液相法測(cè)定阿昔洛韋眼用凝膠中阿昔洛韋含量為（100.49±0.14）%，明顯低于紫外分光光度法所測(cè)的（101.55±0.47）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 高效液相色譜方法因可有效分離相關(guān)物質(zhì)，減少雜質(zhì)干擾，方法簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高，相比于紫外分光光度法更利于阿昔洛韋凝膠中阿昔洛韋的含量測(cè)定。

反相高效液相色譜法；阿昔洛韋；眼用凝膠；紫外分光光度法

【Abstract】Objective To explore the feasibility of the determination of A Silowe in A Silowe ophthalmic gel by UV spectrophotometry and reversed phase high performance liquid chromatography.Methods By UV spectrophotometry，reversed phase high performance liquid chromatography according to the same method of preparing the aciclovir eye gel sample at 252 nm wavelength determination the content of aciclovir.Results Cntent of acyclovir in acyclovir ophthalmic gel（100.49±0.14）% lower than the measured UV spectrophotometry （101.55±0.47）%，the difference was statistically significant（P＜0.05）.Conclusion HPLC method is effective because of the separation-related substances，reducing interference of impurities，the method is simple，accurate and sensitive than UV spectrophotometry，it'is more conducive to the determination content of acyclovir in acyclovir gel.

【Key words】HPLC method；Acyclovir；Ophthalmic gel；UV spectrophotometry

阿昔洛韋因其選擇性高、不良反應(yīng)發(fā)生率低、藥物耐受好，且為特異性抗單純皰疹病毒藥物［1］，已成為目前治療單皰病毒性角膜炎的最佳藥物［2］。早期眼部用藥治療多采用眼膏或滴眼劑，因使用方便、患者接受性好等特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于臨床。但近期研究發(fā)現(xiàn)，由于滴眼劑在眼內(nèi)停留時(shí)間較多，易被體內(nèi)吸收，藥物生物利用度低，重復(fù)多次應(yīng)用又可能引發(fā)較多不良反應(yīng)［3］。凝膠型眼用制劑的出現(xiàn)，有效解決了上述問題［4］。阿昔洛韋凝膠劑可有效解決單皰病毒性角膜炎治療需反復(fù)用藥、生物利用度低等問題［5］。如何快速測(cè)定此類眼用凝膠中主成分含量，有效監(jiān)測(cè)此類藥物質(zhì)量，已成為眾多藥學(xué)工作者所關(guān)注的熱點(diǎn)［6］。目前，檢測(cè)阿昔洛韋含量方法較多，以紫外分光光度法及高效液相色譜法為主［7］。本研究就紫外分光光度法及反相高效液相色譜法測(cè)定阿昔洛韋眼用凝膠中阿昔洛韋含量的可行性進(jìn)行探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1藥品與試劑 甲醇、冰醋酸，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；阿昔洛韋對(duì)照品，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：150913-151102；阿昔洛韋凝膠，江蘇圣寶羅藥業(yè)有限公司，批號(hào)：140911、150212、150622。

1.2儀器 島津LC-20A型高效液相色譜儀；島津UV-2501型紫外分光光度計(jì)；離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1方法學(xué)驗(yàn)證

2.1.1色譜條件 波長(zhǎng)選擇：以流動(dòng)相做空白對(duì)照，于200～400 nm波長(zhǎng)下對(duì)阿昔洛韋對(duì)照品溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果顯示在252 nm處阿昔洛韋有最大吸收；以空氣為對(duì)照，對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行全波段掃描顯示，其在252 nm內(nèi)基線平行，無干擾，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)252 nm。

色譜柱：Zorbax Extend C18不銹鋼柱（250 mm ×4 mm，5 μm）；流動(dòng)相：水-甲醇-冰醋酸（90：10：0.1）；檢測(cè)波長(zhǎng)：252 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：25 ℃。

2.1.2溶液制備

2.1.2.1供試品溶液的制備 精密稱取0.3 g阿昔洛韋凝膠，加入流動(dòng)相25 ml稀釋，充分混勻后，3000 r/min，離心半徑10 cm，離心5 min，取上清液，0.2 mm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液做供試液。

2.1.2.2對(duì)照溶液的制備 精密量取阿昔洛韋對(duì)照品15 mg，置于100 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻即得。

2.1.3高效液相色譜法

2.1.3.1精密度試驗(yàn) 精密量取20 μl對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)定峰面積，并計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）=1.2%（小于2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.1.3.2重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同批號(hào)阿昔洛韋凝膠6份，根據(jù)供試品2.1.2.1項(xiàng)下操作制備溶液，取10 μl溶液注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，可得到6份供試品溶液的RSD，RSD=0.9%（小于2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，因此具有良好重復(fù)性。

2.1.3.3穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液與對(duì)照品溶液，分別在0 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h精密量取10 μl溶液注入液相色譜儀中進(jìn)行測(cè)定，對(duì)照品溶液峰面積的RSD為1.16%（小于2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定；供試品溶液峰面積RSD為1.23%（小于2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，提示對(duì)照品及供試品溶液在48 h內(nèi)均較穩(wěn)定。

2.1.3.4回收率考察 分別精密稱取約10 mg同一批次的阿昔洛韋凝膠，保存至3個(gè)錐形瓶?jī)?nèi)，依次加入阿昔洛韋對(duì)照品2.23 mg、5.17 mg和10.31 mg，根據(jù)2.1.2.1項(xiàng)下步驟，取續(xù)濾液10 μl進(jìn)樣，對(duì)峰面積進(jìn)行測(cè)定，分別計(jì)算回收率為101.23%、101.18%和99.79%，平均回收率為100.67%，RSD為1.32%，與藥典標(biāo)準(zhǔn)相符。

2.1.3.5線性關(guān)系考察 精密稱取阿昔洛韋對(duì)照品13.4 mg置于100 ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取0.05 ml、0.10 ml、0.20 ml、0.40 ml、0.80 ml、1 ml、2 ml、5 ml、6 ml溶液置于10 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別取10 μl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，并以峰面積對(duì)其濃度進(jìn)行線性回歸，得線性方程為Y=633 417X－52 341（r=0.9996），結(jié)果表明，阿昔洛韋濃度在0.12～1.44 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.1.4紫外分光光度法 以流動(dòng)相為空白于252 nm下，選擇2.1.3.6項(xiàng)下不同濃度對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外掃描，建立阿昔洛韋含量標(biāo)準(zhǔn)曲線，并以峰面積對(duì)其濃度進(jìn)行線性回歸，得線性方程為Y=634 517X－55 321（r=0.9998），結(jié)果表明，阿昔洛韋濃度在0.12～1.44 μg/m范圍內(nèi)與吸光度值線性關(guān)系良好。參考2.1.3.1項(xiàng)至2.1.3.4項(xiàng)下過程并結(jié)合藥典標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)紫外分光光度法進(jìn)行精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果上述RSD均小于2%，與藥典標(biāo)準(zhǔn)相符。

2.2樣品中阿昔洛韋含量測(cè)定 結(jié)合上述檢測(cè)條件，分別測(cè)定阿昔洛韋對(duì)照品溶液與3批阿昔洛韋凝膠供試品溶液（取供試品0.2 g），高效液相色譜法及紫外分光光度法均采用自身對(duì)照組對(duì)供試品內(nèi)的阿昔洛韋含量進(jìn)行測(cè)定。

2.3結(jié)果 研究顯示，高效液相法測(cè)定阿昔洛韋凝膠中阿昔洛韋平均含量（與標(biāo)識(shí)量比較）為（100.49± 0.14）%，而紫外分光光度法測(cè)定的平均含量為（101.55±0.47）%，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1　阿昔洛韋凝膠中阿昔洛韋含量測(cè)定結(jié)果（%）

3 討論

阿昔洛韋（C8H11N5O3）屬嘌呤類抗病毒藥物［8］，在高效液相色譜條件摸索過程中，通過前期試驗(yàn)及文獻(xiàn)調(diào)查顯示［9-10］，凝膠中存在大分子物質(zhì)，可導(dǎo)致色譜柱堵塞，進(jìn)而影響測(cè)定［11］。經(jīng)試驗(yàn)分析，在酸性流動(dòng)相處理后，對(duì)應(yīng)高聚物配合離心可有效去除，故考慮先對(duì)樣品稀釋后離心，排除干擾［12］；在色譜條件選擇上，本研究參考了早期［13］的文獻(xiàn)報(bào)道，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室條件優(yōu)選所得。通過本研究結(jié)果可知，高效液相色譜法結(jié)果低于紫外分光光度法，相較而言，高效液相法更接近藥物標(biāo)識(shí)含量。考慮為高效液相法通過色譜柱分離作用，將阿昔洛韋凝膠制備過程中的有關(guān)物質(zhì)、雜質(zhì)等干擾進(jìn)行有效分離［14］，而紫外分光光度采用直接測(cè)定方式，故高效液相法測(cè)定結(jié)果相對(duì)更為準(zhǔn)確，且對(duì)于已知工藝流程及相關(guān)物質(zhì)已知情況，高效液相法相較于紫外分光光度法能更為方便的定位相關(guān)物質(zhì)含量，從而更好地用于此類物質(zhì)的質(zhì)量控制，確保用藥安全［15］。

綜上所述，高效液相色譜法及紫外分光光度法測(cè)定阿昔洛韋凝膠中阿昔洛韋含量均具有準(zhǔn)確性高、精密度好的特點(diǎn)，重現(xiàn)性和相關(guān)性均符合相關(guān)要求，但高效液相色譜法所測(cè)結(jié)果更接近藥物真實(shí)含量，建議考慮此種方式來測(cè)定阿昔洛韋凝膠中阿昔洛韋含量。

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Determination of A Silowe in A Silowe Ophthalmic Gel by UV Spectrophotometry and Reversed Phase high Performance Liquid Chromatography

Li Guihua

R927.2

A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.09.004

新疆瑪納斯佳園醫(yī)院，新疆昌吉回族自治州 832200

李桂華（1967.9-），碩士學(xué)位，副主任藥師。研究方向：藥劑及藥事管理