劉飛，劉軍

(河南省人民醫(yī)院，鄭州450000)

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鼻息肉與變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜IL-17水平及嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)變化及其相關(guān)性

劉飛，劉軍

(河南省人民醫(yī)院，鄭州450000)

目的探討鼻息肉和變異性鼻炎患者白細(xì)胞介素17(IL-17)表達(dá)和嗜酸性粒細(xì)胞(Eos)浸潤情況及其相關(guān)性。方法 選擇行鼻內(nèi)鏡手術(shù)的患者53例，包括鼻息肉組30例、變應(yīng)性鼻炎組23例，另選擇單純鼻中隔偏曲患者25例作為對照組。采用免疫組織化學(xué)染色法檢測鼻黏膜組織中IL-17表達(dá)，顯微鏡下觀察IL-17陽性細(xì)胞計數(shù)及Eos計數(shù)，并進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果 鼻息肉組和變應(yīng)性鼻炎組鼻黏膜組織中IL-17陽性細(xì)胞率分別為83.33%和60.87%，均明顯高于對照組的8.00%，且前兩組間比較，P<0.05。鼻息肉組鼻黏膜組織中IL-17陽性細(xì)胞數(shù)、Eos計數(shù)分別為(23.87±2.33)、(14.84±1.44)個/HP，變應(yīng)性鼻炎組鼻黏膜組織中分別為(16.49±1.89)、(12.03±1.05)個/HP；對照組分別為(4.20±0.33)、(3.27±0.30)個/HP，三組間各指標(biāo)比較，P均<0.05。鼻息肉、變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜組織中IL-17陽性細(xì)胞數(shù)與Eos計數(shù)呈顯著正相關(guān)(r分別為0.548、0.430，P均<0.05)。結(jié)論 鼻息肉和變異性鼻炎患者鼻黏膜組織中IL-17表達(dá)升高，Eos浸潤增強，且二者具有正相關(guān)關(guān)系。

鼻息肉；變應(yīng)性鼻炎；白細(xì)胞介素17；嗜酸性粒細(xì)胞

白細(xì)胞介素17(IL-17)是由Th17細(xì)胞分泌的一種強大的炎癥前細(xì)胞因子，能夠促進(jìn)多種細(xì)胞因子釋放，其異常表達(dá)與多種慢性炎癥性疾病的發(fā)生密切相關(guān)[1,2]。多項研究[3～6]指出，IL-17在慢性氣道炎癥性疾病中發(fā)揮重要作用，參與哮喘氣道黏膜的重建，而鼻息肉、變應(yīng)性鼻炎在氣道重建方面與哮喘有許多相似之處，推測其在鼻息肉和變應(yīng)性鼻炎的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。嗜酸性粒細(xì)胞(Eos)浸潤被認(rèn)為是氣道變應(yīng)性病變的主要特征，在鼻息肉等發(fā)病中發(fā)揮重要作用[7,8]。本研究重點探討鼻息肉和變應(yīng)性鼻炎患者IL-17陽性表達(dá)和Eos浸潤情況，并探討了其相關(guān)性。

1　資料與方法

1.1臨床資料研究對象均選自2014年1月～2015年6月于本院耳鼻喉科住院治療并行鼻內(nèi)鏡手術(shù)的患者，均符合2009年武夷山會議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]，且經(jīng)術(shù)后病理檢查確診。其中鼻息肉組患者30例，男20例、女10例，年齡16～54(34.43±4.44)歲；變應(yīng)性鼻炎組患者23例，男15例、女8例，年齡18～56(33.01±3.20)歲。另選擇單純鼻中隔偏曲患者25例為對照組，且CT或內(nèi)窺鏡檢查顯示無鼻息肉、鼻竇炎或變應(yīng)性癥狀，男17例、女8例，年齡16～59(32.18±3.62)歲。以上患者均為首次就診且未經(jīng)過任何系統(tǒng)治療，均排除其他全身性疾病，且術(shù)前4周未服用糖皮質(zhì)激素、抗組胺藥物、免疫抑制劑、抗生素等。研究均征得患者同意，且獲得醫(yī)院倫理委員會審核通過并全程跟蹤。3組性別、年齡等資料均衡可比。

1.2標(biāo)本收集及處理對照組患者取正常下鼻甲部分黏膜組織，鼻息肉患者于鼻內(nèi)鏡術(shù)中摘取鼻息肉組織，變應(yīng)性鼻炎患者于部分下鼻甲組織取小塊下鼻甲黏膜組織。標(biāo)本處理：標(biāo)本經(jīng)10%多聚甲醛固定后常規(guī)脫水，石蠟包埋、組織切片(4 μm)。切片常規(guī)脫蠟，0.1 mol/L PBS洗3次，每次5 min，檸檬酸抗原修復(fù)10 min后自然冷卻。

1．3鼻黏膜組織IL-17表達(dá)的檢測及IL-17陽性細(xì)胞數(shù)、Eos計數(shù)的觀察采用免疫組織化學(xué)染色法檢測鼻黏膜組織IL-17。嚴(yán)格按照說明書操作。DAB顯色后采用蘇木精輕度復(fù)染、脫水、透明，中性樹膠封片，于顯微鏡下觀察IL-17陽性細(xì)胞數(shù)、Eos計數(shù)，并以PBS代替一抗作為陰性對照。 每張切片隨機選擇5個視野，于高倍視野下進(jìn)行Eos計數(shù)，取平均值。結(jié)果判定：顯微鏡下觀察組織，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為IL-17表達(dá)陽性。組織中IL-17陽性細(xì)胞數(shù)、Eos計數(shù)陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞數(shù)≤5%為陰性(-)；陽性細(xì)胞數(shù)6%～30%為弱陽性(+)；陽性細(xì)胞數(shù)31%～50%為陽性(++)；陽性細(xì)胞數(shù)>50%為強陽性(+++)。

2　結(jié)果

2.1各組病理學(xué)特征所有切片染色背景均清晰，而陰性對照不著色。IL-17的陽性反應(yīng)為褐色，且主要存在于細(xì)胞質(zhì)中。切片鏡下觀察，鼻息肉組織中IL-17主要在漿細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)，少量在上皮細(xì)胞棘細(xì)胞層及漿液腺泡內(nèi)表達(dá)。免疫印跡顯示，IL-17及受體在鼻息肉組中呈特異性條帶表達(dá)，且強度明顯高于對照組。變應(yīng)性鼻炎組中IL-17主要在鼻黏膜下層浸潤的炎性細(xì)胞中顯著表達(dá)，而間質(zhì)中腺腔內(nèi)和血管周圍炎細(xì)胞中均有不同程度表達(dá)，但變應(yīng)性鼻炎組中未見上皮層表達(dá)，可區(qū)別于鼻息肉組織。對照組中僅見弱陽性表達(dá)且多散在分布于間質(zhì)中。

變應(yīng)性鼻炎組黏膜表面為假復(fù)層柱狀纖毛上層覆蓋，黏膜下層間質(zhì)中有大量炎細(xì)胞浸潤，且以Eos為主，伴有少量中性粒細(xì)胞及漿細(xì)胞等；鼻息肉組織表面有假復(fù)層柱狀纖毛上皮覆蓋，且上皮層及間質(zhì)中以Eos、中性粒細(xì)胞浸潤為主，另外還可見淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞和漿細(xì)胞等。對照組下鼻甲黏膜表面覆蓋鱗狀上皮組織，可見增厚基膜，黏膜下層有較多漿液黏液腺，有少量或無Eos細(xì)胞浸潤。

2.2各組鼻黏膜組織中IL-17表達(dá)比較鼻息肉組和變應(yīng)性鼻炎組鼻黏膜組織中IL-17陽性細(xì)胞率分別為83.33%和60.87%，均明顯高于對照組8.00%，鼻息肉組與變應(yīng)性鼻炎組比較，P<0.05。見表1。

表1　各組鼻黏膜組織中IL-17表達(dá)比較

注：與對照組比較，aP<0.05；與鼻息肉組比較，bP<0.05。

2.3各組鼻黏膜組織中IL-17陽性細(xì)胞數(shù)和Eos計數(shù)比較見表2。鼻息肉、變應(yīng)性鼻炎組患者鼻黏膜組織中IL-17陽性細(xì)胞數(shù)、Eos計數(shù)高于對照組，且鼻息肉組與變應(yīng)性鼻炎組兩指標(biāo)比較，P均<0.05。

表2　各組鼻黏膜組織中IL-17陽性細(xì)胞數(shù)和Eos計數(shù)比較(個

注：與對照組比較，aP<0.05；與鼻息肉組比較，bP<0.05。

2.4相關(guān)性分析鼻息肉患者鼻黏膜組織中IL-17陽性細(xì)胞數(shù)與Eos計數(shù)呈顯著正相關(guān)(r=0.548，P<0.05)；變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜組織中IL-17陽性細(xì)胞計數(shù)與Eos計數(shù)呈顯著正相關(guān)(r=0.430，P<0.05)。

3　討論

鼻息肉、變應(yīng)性鼻炎均為耳鼻喉外科的常見、多發(fā)疾病，其發(fā)生率均呈逐年上升趨勢，但其發(fā)病機制尚不十分明確，而多認(rèn)為是一個多因素、多環(huán)節(jié)、多步驟的過程，且疾病復(fù)發(fā)率高、易反復(fù)，現(xiàn)有手段治療效果有限，給臨床醫(yī)生帶來較大困擾[10～12]。IL-17是由Th17分泌的一種強有力的前炎性細(xì)胞因子，具有強大的趨化、激活中性粒細(xì)胞和Eos作用，與慢性炎癥性疾病、自身免疫系統(tǒng)疾病、過敏反應(yīng)等均有密切相關(guān)性[13，14]。Th17還可調(diào)節(jié)Th2介導(dǎo)的Eos浸潤為主的炎癥，通過不同細(xì)胞內(nèi)信號激酶而調(diào)節(jié)Eos功能，以促進(jìn)炎癥反應(yīng)[15]。

研究[16]認(rèn)為，哮喘和鼻息肉、變應(yīng)性鼻炎均是大量Eos浸潤的同一類氣道疾病，且存在氣道重建方面的相似之處。鼻息肉以Eos浸潤為主，是鼻黏膜的慢性炎癥性疾病。IL-17在鼻息肉患者中表達(dá)增加，以有助于氣道重建，在趨化炎癥細(xì)胞和組織重塑方面有重要作用;在變應(yīng)性鼻炎發(fā)病中發(fā)揮免疫炎癥反應(yīng)，與Eos趨化同等重要。

本研究重點探索鼻息肉和變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜組織中IL-17陽性表達(dá)和Eos浸潤情況，結(jié)果顯示，鼻息肉和變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜組織中IL-17陽性率均高于對照組，而IL-17陽性細(xì)胞數(shù)、Eos計數(shù)與對照組比較均有明顯增加，且上述指標(biāo)兩組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。提示Eos和IL-17均參與鼻息肉和變應(yīng)性鼻炎的發(fā)生。Eos浸潤被認(rèn)為是變態(tài)反應(yīng)的局部特征性表現(xiàn)。臨床研究認(rèn)為，鼻息肉患者絕大多數(shù)表現(xiàn)為Eos炎癥，可產(chǎn)生、分泌大量促炎細(xì)胞因子，加重氣道黏膜的慢性損傷，以促進(jìn)黏膜重塑、疾病發(fā)展。IL-17會誘導(dǎo)不同細(xì)胞產(chǎn)生大量的促炎癥因子，而這些炎癥因子與鼻息肉的發(fā)病有密切相關(guān)性；另外還與過敏反應(yīng)、自身免疫系統(tǒng)疾病的發(fā)生相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，鼻息肉患者和變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜組織中IL-17陽性細(xì)胞數(shù)與Eos計數(shù)均呈顯著正相關(guān)，提示IL-17有趨化Eos的作用，IL-17作為一種促炎細(xì)胞因子，對中性粒細(xì)胞激活、募集均有巨大的趨化作用，其會促進(jìn)Eos在氣道的浸潤和活化，促使炎癥擴散及局部組織損傷和黏膜重塑。

綜上所述，鼻息肉和變異性鼻炎患者鼻黏膜組織中IL-17表達(dá)增強，與Eos浸潤共同參與疾病的發(fā)生、發(fā)展。

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劉飛(E-mail: 450698731@qq.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.29.026

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1002-266X(2016)29-0073-03

2016-02-09)