樊鵬飛，盛 楠，田 丹，張婷婷，李 馨，濮智穎

（陜西學(xué)前師范學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)系，陜西 西安 710100）

富硒平菇栽培技術(shù)研究

樊鵬飛，盛 楠，田 丹，張婷婷，李 馨，濮智穎

（陜西學(xué)前師范學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)系，陜西 西安 710100）

平109是陜西省微生物研究所培育出的一株適宜關(guān)中地區(qū)栽培的高產(chǎn)平菇菌種。利用平菇具有較強(qiáng)富硒能力的特點(diǎn)，向培養(yǎng)料中添加一定濃度的亞硒酸鈉，對(duì)平109進(jìn)行富硒栽培試驗(yàn)。結(jié)果表明，在以棉籽殼85%、麩皮12%、蔗糖1%、過(guò)磷酸鈣1%、石膏粉1%為栽培原料的培養(yǎng)料中加入40 mg/kg亞硒酸鈉，菌絲體階段培養(yǎng)溫度為28℃時(shí)，硒的富集量最高，同時(shí)其生物量亦有所提高。無(wú)機(jī)硒不僅可以提高平菇的產(chǎn)量，還可以使硒在菇體內(nèi)富集，因此可以用于平菇富硒栽培。

平菇；亞硒酸鈉；菌絲體

硒是人體必需的微量元素，因其獨(dú)特的預(yù)防、治療及保健功能而被稱為“生命的有效元素”或“生命第五要素”。研究表明，人體缺硒會(huì)導(dǎo)致克山病、癌癥、白內(nèi)障、心血管病、糖尿病、艾滋病等40多種疾?。?］。補(bǔ)硒可消除體內(nèi)的自由基，降低全血黏度和血漿黏度；補(bǔ)硒有利于促進(jìn)兒童生長(zhǎng)發(fā)育；老年人補(bǔ)硒可防治動(dòng)脈硬化、腦血栓等疾?。?］。補(bǔ)硒對(duì)肝、結(jié)腸、肺、前列腺、乳腺等器官的癌癥和白血病均有明顯的預(yù)防和防治作用。

土壤缺硒是全世界廣泛存在的問(wèn)題［3］，在我國(guó)就有大部分省區(qū)存在不同程度的缺硒，特別是從東北到西南的15個(gè)?。ㄊ小⒆灾螀^(qū)）的部分地區(qū)還構(gòu)成了“貧硒地帶”。蘇、晥、魯、甘、寧等?。ㄗ灾螀^(qū)）的部分地區(qū)也相對(duì)貧硒［4-5］。但是，只靠天然食品補(bǔ)硒卻難以從根本上改善缺硒的現(xiàn)狀。因此，著手開(kāi)發(fā)與生產(chǎn)富硒食品，人工加硒生產(chǎn)富硒食物，是解決缺硒問(wèn)題的有效方法。平菇營(yíng)養(yǎng)豐富，味道鮮美，風(fēng)味獨(dú)特，并具有優(yōu)異的自然保健價(jià)值，含有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能和抑制腫瘤生長(zhǎng)等生理活性成分。另外，平菇還有較強(qiáng)的富硒能力，以平菇作為富硒載體，培養(yǎng)富硒平菇，可同時(shí)發(fā)揮硒和平菇固有的以及協(xié)同的生理作用。平菇在我國(guó)大部分地區(qū)都適宜種植，這就為富硒平菇的研究和推廣創(chuàng)造了條件。目前，人們利用平菇有較強(qiáng)富硒能力的特點(diǎn)，在培養(yǎng)過(guò)程中向培養(yǎng)料中施加一定濃度的無(wú)機(jī)硒，或者直接向子實(shí)體噴灑硒溶液，使其在菇體中富集轉(zhuǎn)變成有機(jī)硒，以此提高平菇的硒含量和產(chǎn)量。但由于栽培地域不同，各地區(qū)氣溫有較大差異，導(dǎo)致富硒栽培過(guò)程中硒的利用率不高，進(jìn)而達(dá)不到較好的富集效果。該研究通過(guò)向培養(yǎng)料中添加不同濃度的亞硒酸鈉，采用固體培養(yǎng)技術(shù)，研究平菇的富硒能力和適宜栽培的條件，所選用的菌種為陜西省微生物研究所培育出的一株適宜關(guān)中地區(qū)栽培的高產(chǎn)平菇——平109菌株，旨在為平109富硒高產(chǎn)栽培提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 供試菌株 平菇：平109（陜西省微生物研究所提供）。

1.2 供試母種培養(yǎng)基 PDA培養(yǎng)基斜面：馬鈴薯200 g、葡萄糖 20 g、瓊脂 20 g、蒸餾水 1 000 mL，pH自然，121℃滅菌30 min。該培養(yǎng)基主要用于平菇母種的擴(kuò)大培養(yǎng)。

1.3 培養(yǎng)料配方 選定3種適宜平菇栽培的培養(yǎng)料，其配方如下：

配方1：棉籽殼98%、蔗糖1%、石膏粉1%。

配方2：棉籽殼85%、麩皮12%、蔗糖1%、過(guò)磷酸鈣1%、石膏粉1%。

配方3：棉籽殼86%、麩皮10%、石灰2%、二銨（復(fù)合肥）+硫酸鎂（2∶1）2%。

1.4 主要儀器和試劑 BT25S電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器），SW-CJ-1FD潔凈工作臺(tái) （蘇凈安泰），PHY-DSH-40*5隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠），Q/BKYY31-2000電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 （上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司），YXQ-LS-40S11立式壓力蒸汽滅菌器（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠），L5S紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海精密儀器儀表有限公司）；亞硒酸鈉，硫酸高氯酸，鉬酸鈉，氫氧化鈉，鹽酸羥胺，EDTA溶液，磷酸，鄰苯二胺，甲苯，75%酒精。

1.5 試驗(yàn)方法

1.5.1 母種擴(kuò)大培養(yǎng)：將購(gòu)買的母種轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基斜面上進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，得到再生母種，以供后續(xù)試驗(yàn)使用。

1.5.2 配制硒標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取105℃烘干至恒重的市售亞硒酸鈉2.19 g，定容至1 000 mL，得到濃度為1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，備用。

1.5.3 培養(yǎng)料加硒濃度的確定：據(jù)曹素芳等對(duì)佛羅里達(dá)平菇的富硒研究發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)料中加入1～100 mg/kg范圍內(nèi)的硒，平菇能將硒有規(guī)律的富集，富硒量與加入量呈正相關(guān)［6］。該試驗(yàn)將配方1、配方2、配方3三種培養(yǎng)料，按每千克培養(yǎng)料添加不同的硒標(biāo)準(zhǔn)液， 制成含硒量分別 0、10、15、20、25、30、35、40、45 mg/kg的栽培料，每種配方每個(gè)濃度5袋，每袋裝料0.5 kg，并標(biāo)記。高壓蒸汽滅菌鍋126℃，滅菌1 h。滅菌完成后，待冷卻后在超凈工作臺(tái)上接入提前備好的母種（接種時(shí)要注意防止雜菌污染，并盡量將菌絲接入袋料的中間，以便菌絲盡快長(zhǎng)滿）。接種完成后將菌袋放入隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱28℃恒溫培養(yǎng)，定期觀察菌絲發(fā)育狀況并作記錄（見(jiàn)表1）。待白色菌絲長(zhǎng)滿料袋，菌袋兩端開(kāi)始有白色或淡黃色瘤狀突起時(shí)（即子實(shí)體原基），菌絲即將進(jìn)入生殖生長(zhǎng)階段，這時(shí)就可以進(jìn)行子實(shí)體生長(zhǎng)管理。將料袋搬入半地下菇房進(jìn)行子實(shí)體管理，在這期間按照桑葚期、珊瑚期、伸長(zhǎng)期、成熟期不同階段的管理要求嚴(yán)格控制溫度、濕度、光照、通風(fēng)等。當(dāng)子實(shí)體生長(zhǎng)至七八成熟，菌蓋充分展開(kāi)，孢子尚未彈射時(shí)采收，并測(cè)定頭潮菇產(chǎn)量和含硒量。

表1 3種培養(yǎng)料中不同硒濃度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

1.5.4 硒含量的測(cè)定

1.5.4.1 樣品處理：將菌絲與培養(yǎng)料分離，清洗過(guò)濾，60℃電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中烘干至恒重，并在干燥箱中自然冷卻，然后用研缽將樣品粉碎，過(guò)80目篩。

1.5.4.2 測(cè)定硒含量：準(zhǔn)確稱量處理好的樣品0.02 g于250 mL三角瓶中，加3︰4（V/V）硫酸高氯酸消解液6 mL，放置于室溫中，至瓶中內(nèi)容物為糊狀時(shí)，加入1.5 mL鉬酸鈉溶液，搖勻，水浴加熱至激烈反應(yīng)后，繼續(xù)加熱至逐漸變成淡黃色為止，取下冷卻，加蒸餾水 18 mL，加分析純 NaOH 4.8 g，然后滴加8 mol/L NaOH溶液至pH值為中性，加1 mL 40%鹽酸羥胺溶液，0.5 mL 0.2 mol/L EDTA溶液，1 mL 1︰1（V/V）磷酸溶液，搖勻，加 1 mL 0.2%鄰苯二胺溶液，搖勻后靜置2 h，加5 mL甲苯，搖動(dòng)1 min，靜置10 min，取上清液于紫外波長(zhǎng)335 nm處測(cè)其A值，處理樣品的同時(shí)，用空白作對(duì)照。

1.5.5 不同培養(yǎng)料配方對(duì)菌絲富硒效率的影響：根據(jù)表1中3種培養(yǎng)料配方在每千克培養(yǎng)料含有不同亞硒酸鈉濃度下的菌絲生長(zhǎng)狀況，選取可使菌絲發(fā)育濃白健壯的最佳亞硒酸鈉濃度，即40 mg/kg，配制相應(yīng)的固體培養(yǎng)料，每種培養(yǎng)料裝10袋。滅菌，按要求接入平109，28℃條件下進(jìn)行菌絲體培養(yǎng)。期間仔細(xì)觀察記錄菌絲生長(zhǎng)狀況，待菌絲長(zhǎng)滿料袋，取菌絲體并進(jìn)行硒含量測(cè)定。然后將料袋搬入半地下菇房進(jìn)行子實(shí)體管理，子實(shí)體成熟后采收測(cè)定頭潮菇的產(chǎn)量和含硒量。

1.5.6 不同溫度條件對(duì)菌絲富硒效率的影響：選取可使菌絲發(fā)育濃白健壯的最佳亞硒酸鈉濃度，即40 mg/kg，按配方2配制相同的固體培養(yǎng)料，分裝成30袋。滅菌，按要求接入平109。分別設(shè)定20、22、24、26、28、30℃6個(gè)溫度條件，每個(gè)溫度5袋進(jìn)行栽培管理。期間仔細(xì)觀察記錄菌絲生長(zhǎng)狀況，待菌絲長(zhǎng)滿料袋，取菌絲體并測(cè)定菌絲的含硒量。

1.5.7 栽培條件優(yōu)化：在單因子試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以培養(yǎng)料加硒濃度、培養(yǎng)料配方、溫度為因素分別選取2個(gè)水平，設(shè)計(jì)1個(gè)三因素兩水平的正交試驗(yàn)，且至少需進(jìn)行4次試驗(yàn)。按照正交軟件設(shè)計(jì)的4個(gè)試驗(yàn)組合進(jìn)行試驗(yàn)，并分別測(cè)定子實(shí)體含硒量和生物量。最后利用正交軟件計(jì)算均值和極差，根據(jù)計(jì)算結(jié)果分析得出最佳的培養(yǎng)條件。

表2 硒濃度對(duì)平109生長(zhǎng)狀況和體內(nèi)硒含量的影響

表3 培養(yǎng)料配方對(duì)平109富硒效率的影響

2 結(jié)果與分析

2.1 加硒濃度對(duì)平109生長(zhǎng)狀況和體內(nèi)硒含量的影響 在不同硒含量培養(yǎng)料中栽培的平109，加硒濃度對(duì)平菇菌絲體生長(zhǎng)和菌絲細(xì)胞內(nèi)硒積累影響結(jié)果見(jiàn)表2。

隨著加硒濃度的遞增（45 mg/kg以下），菌絲每天的平均生長(zhǎng)速度有一定的增加。頭潮菇的產(chǎn)量在施硒濃度0～45 mg/kg時(shí)隨著加硒濃度的逐級(jí)增加而增加。施硒濃度在15 mg/kg以下時(shí)，子實(shí)體的含硒量與施硒濃度呈正相關(guān)；施硒濃度在20～40mg/kg時(shí)，子實(shí)體的含硒量基本不變；施硒濃度為45 mg/kg時(shí)，子實(shí)體含硒量突然增加，達(dá)到16.124 mg/kg。該試驗(yàn)設(shè)計(jì)的亞硒酸鈉濃度梯度只到45 mg/kg，是因?yàn)榧尤雭單徕c在45 mg/kg時(shí)，子實(shí)體對(duì)硒的富集量達(dá)到16.124 mg/kg，按每人每天進(jìn)食100～200 g含硒量為16.124 mg/kg的鮮平菇計(jì)算，攝入的硒已超出人體硒的需要量標(biāo)準(zhǔn)（50～250 μg/d）［7］。

2.2 培養(yǎng)料配方對(duì)平109生長(zhǎng)及菌絲富硒效率的影響 向選定的3種適宜平菇栽培的培養(yǎng)料中加入相同濃度的亞硒酸鈉溶液（40 mg/kg），28℃條件下進(jìn)行菌絲體培養(yǎng)。期間定時(shí)測(cè)定菌絲生長(zhǎng)速度。待菌絲長(zhǎng)滿料袋后，將料袋移入半地下菇房進(jìn)行子實(shí)體管理，在這期間按照桑葚期、珊瑚期、伸長(zhǎng)期、成熟期不同階段的生長(zhǎng)要求嚴(yán)格管理。當(dāng)子實(shí)體生長(zhǎng)至七八成熟，菌蓋充分展開(kāi)，孢子尚未彈射時(shí)采收，并測(cè)定頭潮菇產(chǎn)量和含硒量。其測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

由表3可知，平109在配方2和配方3中菌絲生長(zhǎng)速度相同，且較配方1快；菌絲硒含量、頭潮菇產(chǎn)量和子實(shí)體含硒量均為配方2中最高，故配方2更利于平109的栽培和硒的富集。

2.3 溫度對(duì)平109富硒效率的影響 選用配方2配制培養(yǎng)料，并加入40 mg/kg亞硒酸鈉，滅菌，接入平109，在不同溫度下進(jìn)行栽培管理。待菌絲長(zhǎng)滿料袋，取菌絲體測(cè)定其含硒量。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 溫度對(duì)平109富硒效率的影響

由表4可知，平109菌絲生長(zhǎng)階段，當(dāng)溫度在28℃左右時(shí)平菇的菌絲更有利于硒的富集。

2.4 栽培條件優(yōu)化 根據(jù)培養(yǎng)料配方、溫度、亞硒酸鈉濃度3個(gè)因素對(duì)平109生長(zhǎng)及富硒效率影響的試驗(yàn)結(jié)果，各取2個(gè)水平按L4（23）試驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)（見(jiàn)表5）。

表5 栽培條件正交試驗(yàn)因素水平

以平109子實(shí)體硒含量及頭潮菇生物量為指標(biāo)進(jìn)行分析，找出平109富硒栽培的最佳條件。

2.5 培養(yǎng)料、亞硒酸鈉濃度及溫度對(duì)平109菌絲生長(zhǎng)及富硒效率的影響 培養(yǎng)料、亞硒酸鈉濃度及溫度對(duì)平109菌絲生長(zhǎng)及富硒效率的影響試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 栽培條件正交試驗(yàn)結(jié)果

關(guān)于硒含量的條件分析，由表6可知，從亞硒酸鈉濃度來(lái)看，均值2大于均值1，說(shuō)明亞硒酸鈉濃度在水平2時(shí)硒的富集量高。從培養(yǎng)料種類來(lái)看，均值1大于均值2，說(shuō)明培養(yǎng)料在水平1時(shí)硒的富集量高。從溫度來(lái)看，均值2大于均值1，說(shuō)明溫度在水平2時(shí)硒的富集量高。綜合以上3個(gè)因素，亞硒酸鈉濃度在水平2，培養(yǎng)料種類在水平1，溫度在水平2時(shí)最有利于硒的富集，與試驗(yàn)3相符，為最佳條件組合。從極差來(lái)看，亞硒酸鈉濃度對(duì)硒的富集影響最大，溫度次之，培養(yǎng)料影響最小。

關(guān)于生物量的條件分析，由表6可知，從亞硒酸鈉濃度來(lái)看，均值2大于均值1，說(shuō)明亞硒酸鈉濃度在水平2時(shí)生物量高。從培養(yǎng)料種類來(lái)看，均值1大于均值2，說(shuō)明培養(yǎng)料在水平1時(shí)生物量高。從溫度來(lái)看，均值2大于均值1，說(shuō)明溫度在水平2時(shí)生物量高。綜合以上3個(gè)因素，亞硒酸鈉濃度在水平2，培養(yǎng)料種類在水平1，溫度在水平2條件下時(shí)，生物量最高，與試驗(yàn)3相符，為最佳水平組合。從極差來(lái)看，亞硒酸鈉濃度對(duì)生物量的影響最大，溫度影響次之，培養(yǎng)料影響最小。

3 討論

3.1 加硒濃度對(duì)平109生長(zhǎng)狀況和體內(nèi)硒含量的影響 隨著加硒濃度的遞增 （45 mg/kg以下），菌絲每天的平均生長(zhǎng)速度基本不變，菌絲生長(zhǎng)不受硒濃度的影響。在施硒濃度為0～45 mg/kg時(shí)，頭潮菇的產(chǎn)量隨著加硒濃度的逐級(jí)增加而增加，因此低濃度的硒溶液對(duì)平109的產(chǎn)量有促進(jìn)作用。施硒濃度在15 mg/kg以下時(shí)，子實(shí)體的含硒量與施硒濃度呈正相關(guān)，可以達(dá)到約10 mg/kg；施硒濃度在20～40 mg/kg時(shí)，子實(shí)體的含硒量基本不變；施硒濃度為45 mg/kg時(shí)，子實(shí)體含硒量突然增加，達(dá)到16.124 mg/kg。所以，在富硒平菇的栽培中，施硒濃度控制在30～40 mg/kg的范圍時(shí)，既可以保證平菇子實(shí)體富集到較高濃度的有機(jī)硒，提高平菇的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，改善平菇品質(zhì)，還可以提高平菇的產(chǎn)量，進(jìn)而增加經(jīng)濟(jì)收入。

3.2 培養(yǎng)料對(duì)平109富硒效率的影響 平109菌絲在培養(yǎng)料配方2和配方3中的生長(zhǎng)速度相同，且均快于配方1，說(shuō)明配方2有利于菌絲的生長(zhǎng)，可有效縮短栽培時(shí)間。菌絲含硒量、頭潮菇鮮重和子實(shí)體含硒量都是在配方2中較高，表明配方2有利于平109對(duì)硒的富集，同時(shí)產(chǎn)量較高。因此，綜合考慮，配方2有利于平109的富硒栽培。

3.3 溫度對(duì)平109富硒效率的影響 平109菌絲生長(zhǎng)階段，當(dāng)溫度在28℃左右時(shí)其菌絲更有利于富硒。這是由于28℃平菇菌絲體內(nèi)酶活性最高，代謝旺盛，從外界吸收的營(yíng)養(yǎng)成分就越多（包含硒），因此硒的富集量也隨之增高。

4 結(jié)論

雖然采用噴施和向培養(yǎng)料添加硒的方法都可以達(dá)到富硒的目的，但是，直接噴施會(huì)導(dǎo)致菇體和袋料表面形成高硒積累，從而影響子實(shí)體原基的發(fā)育和生長(zhǎng)，而與直接噴施硒溶液相比，向培養(yǎng)料添加硒可有效控制硒的添加量，同時(shí)操作簡(jiǎn)單方便。因此，向培養(yǎng)料中直接添加硒較適于平菇的富硒栽培。通過(guò)正交試驗(yàn)可以看出，亞硒酸鈉濃度對(duì)平109硒的富集影響最大，溫度次之，培養(yǎng)料影響最小。平109硒的富集效率最高的栽培條件是在配方2的培養(yǎng)料中按40 mg/kg添加亞硒酸鈉，溫度為28℃時(shí)最有利于硒的富集。就生物量分析，栽培條件在配方2的培養(yǎng)料中按40 mg/kg添加亞硒酸鈉，溫度為28℃時(shí)生物量最高。

針對(duì)平109富硒栽培，在以棉籽殼85%、麩皮12%、蔗糖1%、過(guò)磷酸鈣1%、石膏粉1%為栽培原料的培養(yǎng)料中加入40 mg/kg亞硒酸鈉，菌絲體階段培養(yǎng)溫度為28℃時(shí)，硒的富集量最高，同時(shí)其生物量亦有所提高。試驗(yàn)結(jié)果表明，無(wú)機(jī)硒不僅可以提高平菇的產(chǎn)量，同時(shí)還可以使硒在菇體內(nèi)富集。

［1］黃春燕，萬(wàn)魯長(zhǎng)，張海蘭，等.高溫富硒平菇栽培技術(shù)研究［J］.山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，45（11）：63-65.

［2］王新風(fēng)，張艷軍，李揚(yáng)，等.富硒平菇栽培的應(yīng)用研究［J］.北方園藝，2005（4）：90-92.

［3］黃春燕，張柏松，萬(wàn)魯長(zhǎng)，等.食用菌富硒培養(yǎng)研究進(jìn)展［J］.山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，44（7）：81-87.

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［7］孫悅迎.平菇富硒能力的研究［J］.中國(guó)食用菌，1996，15（6）：28.

Study on Cultivation Technique for Selenium-enriched Oyster Mushroom

FAN Peng-fei，SHENG Nan，TIAN Dan，ZHANG Ting-ting，LI Xin，PU Zhi-ying
（Department of Biological Science and Technology，Shaanxi Xueqian Normal University，Xi′an 710100，China）

″Ping 109″,a strain of oyster mushroom with high-yield,is bred by Shaanxi Provincial Institute of Microbiology which is suitable for cultivation in Guanzhong regions.Based on the strong ability of oyster mushroom in selenium enriching,cultivation experiment was conducted by adding certain concentration of sodium selenite to the culture medium of″Ping 109″.The results showed that the highest enrichment of selenium was obtained when 40 mg/kg of sodium selenite was added in the culture medium consisting of 85%of cotton seed hull,12%of wheat bran,1%of sucrose,1%of calcium superphosphate,1%of gypsum powder,and the culture temperature during mycelium stage was 28 ℃.Meanwhile,under this culture condition,the biomass of″Ping 109″was also improved.The results suggest that adding inorganic selenium to culture medium is not only able to improve the production of oyster mushroom,but also accelerates the enrichment of selenium within mushroom.Supplementation of inorganic selenium is recommended in cultivation of selenium-enriched oyster mushroom.

oyster mushroom；sodium selenite；mycelium

S646.14

A文章順序編號(hào)：1672-5190（2016）04-0054-04

2016－04－05

項(xiàng)目來(lái)源：陜西省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃（1841）。

樊鵬飛（1992—），男，所學(xué)專業(yè)為生物工程。

（責(zé)任編輯：慕宗杰）