薛一峰，黃建榮

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇無錫 214023)

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·論著·

自制電化學(xué)發(fā)光檢測(cè) N末端B型利鈉肽原室內(nèi)質(zhì)控品及應(yīng)用評(píng)價(jià)

薛一峰，黃建榮

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇無錫 214023)

目的探討制備電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)N末端B型利鈉肽原(NT-proBNP)室內(nèi)質(zhì)控品的方法。方法收集NT-proBNP檢測(cè)結(jié)果較高的冠心病患者血清及NT-proBNP正常者血清，分為低值組和高值組。進(jìn)行預(yù)期靶值及批內(nèi)重復(fù)精度測(cè)定、批內(nèi)天間不精密度測(cè)定、穩(wěn)定性試驗(yàn)，并與羅氏公司原廠質(zhì)控品比較，評(píng)估自制室內(nèi)質(zhì)控品與原廠質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果的偏倚是否在可接受范圍內(nèi)。結(jié)果自制NT-proBNP質(zhì)控品日內(nèi)重復(fù)性和穩(wěn)定性良好、不精密度符合臨床檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，在控范圍明顯小于羅氏公司提供的質(zhì)控允許范圍，可滿足室內(nèi)質(zhì)控要求。結(jié)論自制NT-proBNP室內(nèi)質(zhì)控品可以替代進(jìn)口原配質(zhì)控品。

N末端B型利鈉肽原；室內(nèi)質(zhì)控品；檢測(cè)

N末端B型利鈉肽原(NT-proBNP)作為心力衰竭(HF)的標(biāo)志物，已被廣泛應(yīng)用于HF的診斷、鑒別診斷與病死評(píng)估中，對(duì)HF、心肌梗死等疾病的預(yù)后、危險(xiǎn)度分級(jí)、手術(shù)時(shí)機(jī)選擇也有較高的判斷價(jià)值，其臨床應(yīng)用也逐漸拓展到治療領(lǐng)域[1-2]。臨床驗(yàn)證NT-proBNP是目前管理HF的最佳生化指標(biāo)，其檢測(cè)結(jié)果為臨床診療提供客觀依據(jù)[3-5]。目前臨床上用于NT-proBNP的檢測(cè)方法多為電化學(xué)發(fā)光法，其中Cobas E601 采用電化學(xué)發(fā)光技術(shù)、生物素-鏈霉親和素技術(shù)及二維條碼技術(shù)，具有高敏感性和特異性、可檢測(cè)范圍寬、檢測(cè)速度快、標(biāo)記物穩(wěn)定無污染、結(jié)果準(zhǔn)確穩(wěn)定、操作簡(jiǎn)便、自動(dòng)化程度高等諸多優(yōu)點(diǎn)，精密度和穩(wěn)定性均可適合臨床需求。自2009年該科使用Roche 公司的Cobas e601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀進(jìn)行NT-proBNP檢測(cè)，現(xiàn)探討自制NT-proBNP室內(nèi)質(zhì)控品，并對(duì)其穩(wěn)定性、重復(fù)性進(jìn)行評(píng)價(jià)，報(bào)道如下。

1　材料與方法

1.1儀器與試劑Roche 公司的Cobas e601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀及其配套NT-proBNP試劑、室內(nèi)質(zhì)控品。

1.2自制質(zhì)控品

1.2.1收集多份NT-proBNP檢測(cè)結(jié)果較高的住院冠心病患者血清及NT-proBNP正常者血清，要求無溶血、無黃疸、無脂濁，乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒(HCV)、人類免疫缺陷病毒(HIV)、梅毒均陰性，初步定值，分為低值組和高值組。

1.2.2參照文獻(xiàn)[6-7]的方法將2份血清于65 ℃滅活10 h，1 500 r/min 離心10 min，取上清液，并加入5‰的疊氮鈉防腐，分裝到1 mL的Eppendorf管中，每支0.5 mL，保存于-80 ℃冰箱。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

2.12種自制不同濃度的NT-proBNP質(zhì)控品日間重復(fù)性檢測(cè)不同濃度的NT-proBNP質(zhì)控品日間重復(fù)性良好。見表1。

表1　　2種不同濃度NT-proBNP質(zhì)控品日間重復(fù)性檢測(cè)(n=20，pg/mL)

2.22種自制不同濃度的NT-proBNP質(zhì)控品批內(nèi)天間不精密度檢測(cè)22 d不精密度符合臨床檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。見表2。

表2　　2種不同濃度NT-proBNP質(zhì)控品批內(nèi)天間不精密度檢測(cè)(n=22，pg/mL)

2.32種不同濃度的NT-proBNP質(zhì)控品穩(wěn)定性檢測(cè)分別以1～4個(gè)月的累積、SD作為中心線，觀測(cè)1～4個(gè)月積累和SD的走勢(shì)圖，未發(fā)現(xiàn)明顯的數(shù)據(jù)呈連續(xù)上升或下降趨勢(shì)，同時(shí)也未發(fā)現(xiàn)有數(shù)據(jù)升高或降低超過±2SD。見表3。

表3　　2種不同濃度NT-proBNP質(zhì)控品穩(wěn)定性檢測(cè)(pg/mL)

2.4自制質(zhì)控品與羅氏原廠質(zhì)控物比較羅氏公司的質(zhì)控物以靶值±18%為允許范圍，而自制質(zhì)控物的在控范圍，經(jīng)計(jì)算得出為靶值±8.3%～±8.9%，自制質(zhì)控品的在控范圍明顯小于羅氏公司提供的質(zhì)控允許范圍，說明完全可以滿足室內(nèi)質(zhì)控要求。經(jīng)過4個(gè)月的評(píng)估,自制NT-proBNP質(zhì)控品具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性,在-80 ℃能較長(zhǎng)時(shí)間保持穩(wěn)定。見表4。

表4　　自制質(zhì)控品與羅氏原廠質(zhì)控品靶值及在控范圍比較(pg/mL)

3　討　　論

自有關(guān)學(xué)者從豬腦內(nèi)分離得到B型利鈉肽(BNP)和首次在人類血漿中發(fā)現(xiàn)NT-proBNP以來，大量基礎(chǔ)和臨床研究迅速推動(dòng)其在臨床中的應(yīng)用。包括BNP和NT-proBNP在內(nèi)的利尿肽家族在維持人體循環(huán)系統(tǒng)的容量、滲透壓、壓力穩(wěn)態(tài)方面起著重要作用，也是近年來最受關(guān)注的心血管功能性標(biāo)志物[8]。BNP和NT-proBNP有相同的生物學(xué)來源，但生物學(xué)效應(yīng)和臨床意義不完全相同。心肌細(xì)胞受刺激后產(chǎn)生含134個(gè)氨基酸的B型利鈉肽原前體(Pre-proBNP)，隨后形成含108個(gè)氨基酸的BNP前體(proBNP)，后者在內(nèi)切酶的作用下裂解生成2個(gè)產(chǎn)物，即BNP和NT-proBNP[9]。BNP由第77～108個(gè)氨基酸殘基組成，半衰期短(22 min)，抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)和腎上腺素活性，體外穩(wěn)定性差，具有強(qiáng)力的利鈉、利尿、擴(kuò)血管和降壓作用；NT-proBNP由第1～76個(gè)氨基酸殘基組成，半衰期較長(zhǎng)(2 h)，無生物活性，體外的穩(wěn)定性長(zhǎng)(> 48 h)。當(dāng)心肌受到牽張刺激時(shí)將兩者同時(shí)釋放入血液循環(huán)中，NT-proBNP濃度相對(duì)較穩(wěn)定，有效檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，血液中含量較高(比BNP 高約16～20 倍)，臨床檢測(cè)多針對(duì)相對(duì)容易的NT-proBNP[10]。臨床檢測(cè)NT-proBNP大多采用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法，是免疫分析未來發(fā)展方向。

近年來，隨著臨床實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)和檢測(cè)水平的提高，全面質(zhì)量控制越來越受到各方面的關(guān)注與重視。包括Cobas e601在內(nèi)的各種進(jìn)口全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)在我國(guó)應(yīng)用非常廣泛，Cobas e601所需試劑、質(zhì)控品等各種耗材均需進(jìn)口，成本較高。而室內(nèi)質(zhì)控的目的在于監(jiān)測(cè)檢測(cè)結(jié)果的精密度以提高常批間和批內(nèi)檢測(cè)結(jié)果的一致性，因此質(zhì)控物是調(diào)查檢驗(yàn)分析儀器質(zhì)量控制和實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度必不可少的物質(zhì)，其質(zhì)量與應(yīng)用是否得當(dāng)，直接關(guān)系實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果與檢測(cè)成績(jī)。臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正法案最終規(guī)則的標(biāo)準(zhǔn)493.1256中要求：實(shí)驗(yàn)室可使用商品化定值的質(zhì)控品，其定值是與實(shí)驗(yàn)室所使用方法和儀器有關(guān)，實(shí)驗(yàn)室需要對(duì)其定值進(jìn)行驗(yàn)證。有學(xué)者認(rèn)為實(shí)驗(yàn)室不僅可以購(gòu)買商品化的質(zhì)控品，也可以用實(shí)驗(yàn)室剩余的檢測(cè)樣品制備質(zhì)控品，國(guó)內(nèi)已有研究表明自制室內(nèi)質(zhì)控品可以替代進(jìn)口原配質(zhì)控品[11]，本研究也證實(shí)。因此，在日常工作中可以嘗試自制各種室內(nèi)質(zhì)控品，降低運(yùn)行成本，提高經(jīng)濟(jì)效益。

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The comparison and evaluation of the self-developed control products and the internal quality control products detection of NT-proBNP by electrochemiluminescence

XUEYifeng,HUANGJianrong

(DepartmentofClinicalLaboratory,WuxiPeople′sHospitalAffiliatedofNanjingMedicalUniversity,Wuxi,Jiangsu214023,China)

ObjectiveTo investigate the preparation of internal quality control products of NT-proBNP by electrochemiluminescence detection.MethodsThe serum with high and normal levels of NT-proBNP were collected and divided into low-value group and high -value group.The expected target value，inter-batch duplicability,imprecision and the stability within batch were detected.After effective verification,we evaluated the bias between self developed internal quality control products and Roche factory quality control materials by comparative test.ResultsThe repeatability,stability and imprecision of self developed NT-proBNP were all appropriate to internal quality control products and meeting meet the clinical testing standards.The control range was significantly less than that permitted by Roche,so it can meet the internal quality control requirements.ConclusionThe self developed NT-proBNP internal quality control products can replace the imports quality control products.

NT-proBNP;internal quality control products;detection

薛一峰，女，副主任技師，主要從事臨床免疫學(xué)研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.023

A

1673-4130(2016)19-2718-03

2016-02-18

2016-04-13)