孔凡科,劉東,郭吉原
(1.中國(guó)石油大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院,山東青島266580;2.新希望六和股份有限公司,山東青島266555)
光照對(duì)喹乙醇檢測(cè)結(jié)果的影響
孔凡科1,2*,劉東1,郭吉原2
(1.中國(guó)石油大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院,山東青島266580;2.新希望六和股份有限公司,山東青島266555)
分別在陽(yáng)光直射、室內(nèi)光照射兩種條件下對(duì)喹乙醇溶液進(jìn)行了不避光、簡(jiǎn)單避光及嚴(yán)格避光三種處理方式的損失率測(cè)定實(shí)驗(yàn),采用嚴(yán)格避光的標(biāo)準(zhǔn)溶液做標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(外標(biāo)校正),并用超高效液相色譜儀進(jìn)行快速分析,以比較不同條件下喹乙醇損失率。結(jié)果顯示,與嚴(yán)格避光組相比,陽(yáng)光直射組與室內(nèi)光照射組喹乙醇的損失率顯著偏高(P<0.05);在相同光照強(qiáng)度下,不避光組的損失率顯著高于簡(jiǎn)單避光組(P<0.05)。因此,光照對(duì)喹乙醇分解變質(zhì)影響很大,為了在喹乙醇的檢測(cè)中得到較高準(zhǔn)確度,整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中要做到嚴(yán)格避光。
喹乙醇;光照;損失率
喹乙醇是一種抗菌促生長(zhǎng)劑(Kamphues,1999),主要用于防止仔豬腹瀉(胡新崗等,2001)。中國(guó)獸藥典獸藥使用指南規(guī)定,喹乙醇預(yù)混劑只允許在35 kg以下的小豬飼料中使用,其添加量上限為100 mg/kg。不允許在禽料中使用喹乙醇預(yù)混劑,不允許在出口的畜產(chǎn)品中檢測(cè)到喹乙醇及其代謝物(中國(guó)獸藥典委員會(huì),2011)。我國(guó)飼料行業(yè)中大部分企業(yè)使用的是混合生產(chǎn)線,即同一條生產(chǎn)線既生產(chǎn)小豬料也生產(chǎn)大豬料及禽料,雖然生產(chǎn)小豬料后需要進(jìn)行洗倉(cāng),但是后續(xù)的飼料生產(chǎn)由于洗倉(cāng)效果的原因也可能含有微量的喹乙醇。為了確保在禽飼料和大豬飼料中不含喹乙醇,評(píng)估洗倉(cāng)效果時(shí)需要對(duì)洗倉(cāng)料進(jìn)行喹乙醇含量檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性決定洗倉(cāng)效率和食品安全。
在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中光照對(duì)喹乙醇檢測(cè)結(jié)果影響較大。原因是喹乙醇是光敏性試劑,倘若在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)避光操作不嚴(yán),會(huì)對(duì)喹乙醇檢測(cè)的準(zhǔn)確度造成嚴(yán)重影響。熾昌(1995)分別用254 nm和365 nm的紫外燈照射喹乙醇,結(jié)果表明,喹乙醇對(duì)紫外光敏感,但關(guān)于可見光對(duì)喹乙醇的影響并沒(méi)有給出明確的結(jié)論。本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)自然光照對(duì)喹乙醇溶液的影響及檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)采取的避光措施進(jìn)行了研究以期為提高喹乙醇檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度提供指導(dǎo)。
1.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)
1.1.1光照條件本實(shí)驗(yàn)所指自然光照是天然光源(太陽(yáng))發(fā)出的光,包括陽(yáng)光直射光(DS,direct sunlight)和室內(nèi)自然光(IL,internal light)。這兩種實(shí)驗(yàn)條件均是選擇在天氣晴朗、室內(nèi)采光良好的情況下。光照強(qiáng)度采用光學(xué)強(qiáng)度測(cè)定儀測(cè)定。陽(yáng)光直射光照強(qiáng)度范圍是40000~70000 lx,室內(nèi)自然光光照強(qiáng)度范圍是300~500 lx,嚴(yán)格避光條件下光照強(qiáng)度為0.1 lx。
1.1.2避光條件不避光(A):沒(méi)有任何避光保護(hù)措施,實(shí)驗(yàn)中使用無(wú)色玻璃器皿。
簡(jiǎn)單避光(B):實(shí)驗(yàn)中使用棕色玻璃器皿。
嚴(yán)格避光(C):實(shí)驗(yàn)中使用棕色玻璃器皿,避光放置,不進(jìn)行光照處理,該處理組為對(duì)照組。
1.1.3實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)具體分組見表1。
表1 喹乙醇光照損失率實(shí)驗(yàn)處理方案
1.1.4實(shí)驗(yàn)溫度室內(nèi)溫度為(20±5)℃。
1.1.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果要求每個(gè)處理組的每個(gè)時(shí)間點(diǎn)樣品重復(fù)進(jìn)樣3次,取平均值報(bào)告結(jié)果。
1.2試劑與溶液
1.2.1喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer,有標(biāo)準(zhǔn)品證書,產(chǎn)品標(biāo)識(shí)含量為99%。
1.2.2喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液稱取10.00 mg于10 mL棕色容量瓶中,用40%(V/V)甲醇-水溶解并定容至刻度,該溶液的濃度為1.0 mg/mL。
1.2.3喹乙醇工作溶液以40%的甲醇-水溶液作為稀釋劑,采用梯度稀釋法配制0、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0、50.0 μg/mL 7個(gè)不同濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制完成后立即放入密閉控溫的自動(dòng)進(jìn)樣器中上機(jī)測(cè)定,該標(biāo)準(zhǔn)溶液僅用于實(shí)驗(yàn)樣品的定量計(jì)算,不參與光照實(shí)驗(yàn)處理。
1.3儀器與設(shè)備超高效液相色譜儀(Waters UPLC H-Class)配紫外檢測(cè)器(e-λ PDA);無(wú)色進(jìn)樣瓶、棕色進(jìn)樣瓶。光學(xué)強(qiáng)度測(cè)定儀(德國(guó)SAUTER):型號(hào)SN100K,測(cè)量范圍0~100000lx。
1.4色譜條件色譜柱,BEH-C18色譜柱,內(nèi)經(jīng)2.1 mm,柱長(zhǎng)100 mm,粒徑1.7 μm;進(jìn)樣量:2 μL;流速:0.2 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):260 nm;流動(dòng)相:甲醇、超純水,梯度洗脫。梯度洗脫程序見表2。
表2 梯度洗脫程序
1.5實(shí)驗(yàn)步驟
1.5.1標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的檢測(cè)將配制好的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液按照1.4的色譜條件進(jìn)行上機(jī)測(cè)定。
1.5.2實(shí)驗(yàn)溶液的檢測(cè)配制50份10 μg/mL的喹乙醇實(shí)驗(yàn)溶液,按照表1規(guī)定的處理方法進(jìn)行處理。共有5個(gè)處理組,分別為:陽(yáng)光直射不避光(DS-A)、陽(yáng)光直射簡(jiǎn)單避光(DS-B)、室內(nèi)光照射不避光(IL-A)、室內(nèi)光照射簡(jiǎn)單避光(IL-B)、嚴(yán)格避光(C)。每個(gè)處理組有10個(gè)處理水平。處理完畢后進(jìn)行上機(jī)測(cè)定。
1.6結(jié)果計(jì)算
1.6.1喹乙醇濃度表示喹乙醇溶液的濃度以質(zhì)量分?jǐn)?shù)(μg/mL)表示。
1.6.2喹乙醇溶液損失率計(jì)算
式中:C為根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算得到的試驗(yàn)溶液中喹乙醇含量,μg/mL。
1.6.3喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖及標(biāo)準(zhǔn)曲線根據(jù)本實(shí)驗(yàn)色譜條件進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)。喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖1;喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及濃度范圍見表3。
圖1 喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖
表3 喹乙醇曲線方程、相關(guān)系數(shù)及濃度范圍
1.7實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理所有數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示,采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行方差分析,Tukey HSDa’s法進(jìn)行方差檢驗(yàn)。
2.1喹乙醇溶液光照損失率結(jié)果分析通過(guò)表4可以看出,喹乙醇溶液經(jīng)陽(yáng)光直射不避光處理,20 min后,損失率達(dá)到94%左右,且處理20~200 min差異不顯著(P>0.05);喹乙醇溶液經(jīng)室內(nèi)光照射不避光處理,80 min后損失率達(dá)到90%以上,再行照射損失率變化差異不顯著(P>0.05);喹乙醇溶液經(jīng)陽(yáng)光直射簡(jiǎn)單避光處理,180 min后損失率可達(dá)78%左右;喹乙醇溶液經(jīng)室內(nèi)光照射簡(jiǎn)單避光處理,200 min后損失率為15%;喹乙醇溶液經(jīng)嚴(yán)格避光處理,200 min后損失率在2%左右,且處理20~200 min差異不顯著(P>0.05)。
2.2自然光照對(duì)喹乙醇溶液的影響通過(guò)表4可知,在相同避光條件下,陽(yáng)光直射處理組的損失率顯著大于室內(nèi)光照射處理組的損失率(P<0.05)。說(shuō)明光照強(qiáng)度是造成喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液分解變質(zhì)的主要因素。
表4 喹乙醇光照損失率實(shí)驗(yàn)結(jié)果%
2.3避光處理方式對(duì)喹乙醇溶液的影響通過(guò)表4可知,在相同光照條件下,不避光處理組比簡(jiǎn)單避光處理組的損失率顯著偏高(P<0.05),但兩者與嚴(yán)格避光處理組相比,損失率均顯著偏高(P<0.05)。說(shuō)明簡(jiǎn)單避光可以有效緩解光照對(duì)喹乙醇的分解作用,但簡(jiǎn)單避光處理只能減緩喹乙醇的分解速度,只有在嚴(yán)格避光的條件下,才可以將喹乙醇的分解程度降到最低。
2.4實(shí)際樣品不同避光方式下回收率檢測(cè)結(jié)果為了驗(yàn)證上述結(jié)論的準(zhǔn)確性,進(jìn)行了不同飼料樣品提取過(guò)程中嚴(yán)格避光(C)與不避光(A)的加標(biāo)回收比對(duì)試驗(yàn)。加標(biāo)回收比對(duì)結(jié)果見表5。由表5可知,在飼料樣品前處理過(guò)程中,嚴(yán)格避光處理的樣品加標(biāo)回收率平均在91%左右,而不做避光處理的樣品加標(biāo)回收率平均僅有55%??梢?,與不避光處理組相比,嚴(yán)格避光處理組的加標(biāo)回收率提高了65%,大大提高了飼料中喹乙醇檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。
表5 飼料中喹乙醇加標(biāo)回收率比對(duì)結(jié)果
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,光照是造成喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液分解變質(zhì)的主要因素。在光照條件下,會(huì)造成喹乙醇檢測(cè)結(jié)果偏低甚至不能檢出。通過(guò)簡(jiǎn)單避光可以在一定程度上減緩光照對(duì)喹乙醇的分解速度。為了在喹乙醇的檢測(cè)中盡可能提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度,需要在整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中做到嚴(yán)格避光。
喹乙醇檢測(cè)過(guò)程中需要嚴(yán)格避光的關(guān)鍵點(diǎn)主要包括:(1)喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液從冰箱內(nèi)取出放在室內(nèi)回溫過(guò)程中,一定要將其放在嚴(yán)格避光的位置。(2)樣品提取時(shí)要用能避光的實(shí)驗(yàn)器皿或器具,比如不透光的離心管或棕色的具塞三角瓶。(3)SPE固相萃取柱的過(guò)程中也需要嚴(yán)格避光,一般的SPE固相萃取柱不具有避光作用,可以在SPE固相萃取柱萃取外面包裹一層錫箔紙,或者包裹一層黑色不透明膠帶,以起到避光作用。(4)接取洗脫液的玻璃試管需要用棕色的,如果沒(méi)有,可以外面包裹錫箔紙和黑色不透明膠帶等做簡(jiǎn)單避光處理。(5)上機(jī)液要裝在棕色進(jìn)樣瓶中。(6)最好選擇有避光作用的自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)行分析。
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[5]Kamphues J.Antibiotic growth promoters for the view of animal nutrition[J].Ber Munch Tierarztl Wochenschr,1999,112(10~11):370~379.■
This test studied the loss rate of olaquindox solution processed in three ways including simply avoiding light,being in the light and strictly avoiding light,respectively,under two different conditions of direct sunlight and internal light.The processed samples was determined by the ultra high performance liquid chromatograph.External standard calibration was used with the olaquindox solution which was strictly avoiding light.Results showed that the loss rate of olaquindox solution of the direct sunlight and internal light group were significantly higher than that of the strictly avoiding light group(P<0.05).Under the same light conditions,the loss rate of being in the light group was significantly higher than that of simple light group(P<0.05).The results was indicated that light was the main factor on olaquindox decomposition.In order to get the high accuracy in the detection of olaquindox,we must strictly avoid light in the testing process.
olaquindox;light;loss rate
10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20161504
S816.17
A
1004-3314(2016)15-0016-03