趙　瑩　張小婷　蔡澤明　葉艷婷　張　斌　章星琪

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·論著·

斑禿皮損凋亡因子Annexin V表達及與T細胞浸潤的相關(guān)性

趙瑩1張小婷2蔡澤明3葉艷婷4張斌4章星琪4

目的：檢測斑禿皮損凋亡因子Annexin V的表達并確定其與T細胞浸潤的相關(guān)性。方法：對22例斑禿患者皮損(11例早期斑禿和11例中晚期斑禿)和10例正常頭皮進行CD3/CD4/CD8和Annexin V的免疫組化雙染。結(jié)果：早期斑禿Annexin V在淺層血管和毛囊周圍的陽性細胞數(shù)顯著高于中晚期斑禿，而在深層毛囊周圍顯著低于中晚期斑禿(P<0.05)。早期斑禿深層毛囊周圍T細胞浸潤與Annexin V陽性細胞數(shù)量呈顯著正相關(guān)，而淺層毛囊周圍兩者無明顯相關(guān)性。結(jié)論：早期斑禿淺層永久性毛囊細胞凋亡與T細胞浸潤無相關(guān)性,而深層周期性毛囊周圍T細胞浸潤是毛囊細胞凋亡的主要原因。

斑禿；凋亡因子；T細胞

斑禿發(fā)病機制不清，研究多傾向于認為其是精神壓力及遺傳因素等原因?qū)е旅业拿庖呋砻鈫适?，局部T細胞在毛囊周圍"蜂擁狀"浸潤，而后通過多種機制誘導(dǎo)毛囊上皮細胞凋亡，使生長期毛囊提前進入退行期及休止期，從而引起毛發(fā)脫落[1-3]。

研究發(fā)現(xiàn)，早期斑禿患者皮損生長期毛囊促凋亡因子表達增高，抑制凋亡因子表達下降[4]，且頭皮淺層存在明顯炎癥細胞浸潤[5]，而對炎癥浸潤與毛囊凋亡的相關(guān)性及斑禿早期毛囊凋亡部位尚不清。凋亡因子Annexin V是檢測細胞早期凋亡的靈敏指標[6]。本研究通過免疫組化雙染的方法對早期及中晚期斑禿皮損淺層和深層毛囊Annexin V的表達和淋巴細胞亞群的浸潤情況進行檢測，并對兩者進行相關(guān)性分析，以了解早期斑禿淋巴細胞浸潤部位及浸潤程度，并探討早期斑禿凋亡的始發(fā)部位及毛囊凋亡與炎癥浸潤的相關(guān)性。

1　研究對象及方法

1.1研究對象本研究納入斑禿患者22例(早期斑禿11例，中晚期11例)。入選標準：經(jīng)臨床確診的斑禿患者診斷標準參照趙辨《中國臨床皮膚病學(xué)》；脫發(fā)部位無外傷；入選前2個月內(nèi)未接受系統(tǒng)性糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑及調(diào)節(jié)劑等治療。排除標準：假性斑禿及其他瘢痕性脫發(fā)，真菌感染，梅毒性脫發(fā)、拔毛癖及其他因素引起的脫發(fā)患者。根據(jù)患者病程分為早期斑禿組(病程≤3個月，且輕拉發(fā)試驗陽性)和中晚期斑禿組(病程>3個月，且輕拉發(fā)試驗陰性)。正常對照10例，均來自本院外科及皮膚科頭皮手術(shù)如皮膚色素痣或良性腫物切除術(shù)所取皮疹邊緣正常組織。正常對照組無脫發(fā)表現(xiàn)，與斑禿患者的性別、年齡相匹配。

1.2實驗方法取斑禿患者皮損活動性邊緣組織及正常對照頭皮，分別為橫切部和縱切部，再將橫切部置于解剖顯微鏡下，沿皮脂腺下緣層面離斷為淺層及深層兩部分，石蠟包埋后行免疫組織化學(xué)雙染，分別為Annexin V與 CD3、CD4、CD8雙染。

1.2.1免疫組化雙染方法玻片經(jīng)脫蠟，水化，抗原修復(fù)，消除內(nèi)源性過氧化物酶活性，蛋白阻斷后，加Annexin V一抗兔單克隆抗體(EPITMICS, No.3225-1，克隆號EPR3979，胞膜染色)100 μL，濕盒孵育TBS沖洗后，加生物素連接二抗100 μL(Alkaline phosphatase rabbit IgG VECTASTAIN ABC KIT(No. AK-5005))，濕盒孵育TBS沖洗后加Vecastain regent 100 μL ，濕盒孵育TBS沖洗后顯色劑(VECTOR Nova RED Substrate Kit)顯色5 min，顯微鏡下控制顯色程度，顯色合適時終止反應(yīng)。再次蛋白阻斷后，滴加一抗[鼠抗人CD3單抗(DAKO,No.M7254，克隆號F7.2.38)或鼠抗人CD4單抗(DAKO, No. M7310，克隆號4B12)，或鼠抗人CD8單抗(DAKO, No. M7103，克隆號C8/144B]100 μL，濕盒孵育TBS沖洗后加生物素連接二抗100 μL(ELITE MOUSE IgG VECTASTAIN ABC KIT(No.PK-6102))，濕盒孵育TBS沖洗后加Alkaline phosphatase rabbit IgG VECTASTAIN ABC KIT(No. AK-5005)100 μL,濕盒孵育TBS沖洗后加顯色劑(VECTOR Alkaline phosphatase Substrate Kit III)顯色5 min，顯微鏡下控制顯色程度，以水溶性封片劑封片。

1.2.2免疫組化計數(shù)方法細胞計數(shù)分別由兩位實驗者獨立完成，計數(shù)每位患者病理片5個高倍鏡視野(*400)并取其平均值。CD3,CD4,CD8 陽性細胞的判定為胞膜天藍色染色；Annexin V陽性細胞判定為胞膜呈紅色。

1.2.3統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 13.0軟件包進行統(tǒng)計分析。計量資料先用Kolmogorov-Smirnov法檢驗正態(tài)性，兩個或多樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA)。計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(根據(jù)頻數(shù)情況決定是否采用校正的χ2檢驗，F(xiàn)isher精確概率法)。計量資料的相關(guān)性分析選用Pearson和Spearman檢驗。所有統(tǒng)計結(jié)果均采用雙側(cè)檢驗，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　研究結(jié)果

2.1早期和中晚期斑禿皮損CD3/CD4/CD8陽性T細胞的分布早期斑禿患者CD3+、CD4+、CD8+T細胞在淺層毛囊、深層毛囊及淺層血管周圍皆有中到大量浸潤(圖1a、b、c、d)，而中晚期斑禿T細胞的浸潤主要集中在毛囊深層。

與正常對照組相比，早期斑禿患者在淺層血管、淺層毛囊和深層毛囊周圍T細胞的浸潤明顯增多(P<0.05)，而中晚期斑禿患者深層毛囊周圍T細胞浸潤顯著增多，但淺層血管和毛囊周圍T細胞浸潤與正常對照組無顯著差異(圖2a、b、c)。早期斑禿患者淺層血管和毛囊周圍T細胞浸潤較中晚期顯著增高(P<0.05)，而在深層毛囊周圍早、中及晚期斑禿患者T細胞的浸潤差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1a.橫切面早期活動期斑禿淺層毛囊周圍及內(nèi)部，淺層血管CD4+T細胞;1b. CD8+T細胞浸潤；1c.縱切面早期活動期斑禿淺層皮脂腺層面毛囊周圍CD4+T細胞；1d.CD8+T細胞浸潤

圖1早期斑禿患者淺層永久毛囊周圍T細胞浸潤(藍色為CD4，CD8陽性細胞，AP染色，×100；棕紅色為Annexin V陽性細胞，HRP染色，×100)

2a：CD3+T細胞;2b:CD4+T細胞；2c:CD8+T細胞

2.2早期和中晚期斑禿皮損Annexin V陽性細胞的分布在早期斑禿淺層毛囊可見上皮部分細胞表達Annexin V陽性，但毛囊內(nèi)部鮮見陽性細胞(圖3a)。中晚期斑禿淺層毛囊鮮見Annexin V陽性細胞(圖3b)。早期斑禿生長期毛囊深層可見毛囊周圍結(jié)締組織散在少量Annexin V陽性細胞。而早期退行期毛囊深層可見毛乳頭周圍的毛基質(zhì)細胞Annexin V表達陽性，隨著毛囊的退行，Annexin V陽性細胞逐漸增多，內(nèi)毛根鞘和外毛根鞘先后可見Annexin V表達，且陽性細胞逐漸向上蔓延至毛囊遠端的峽部和膨大部，至退行期中晚期的毛囊索條Annexin V陽性細胞較為密集。

3a:早期斑禿淺層毛囊上皮Annexin V表達較為密集；3b:中晚期斑禿淺層毛囊上皮鮮見Annexin V陽性細胞

圖3斑禿淺層毛囊Annexin V表達(棕紅色為陽性細胞，HRP,×100)

早期斑禿Annexin V陽性細胞在淺層血管和毛囊周圍顯著高于中晚期斑禿，而在深層毛囊周圍顯著低于中晚期斑禿(P<0.05)。早期和中晚期斑禿Annexin V陽性細胞數(shù)量在淺層血管、淺層毛囊和深層毛囊周圍皆顯著高于正常對照組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(圖4)。

圖4　早期、中晚期斑禿和正常對照

2.3早期和中晚期斑禿毛囊周圍T細胞和Annexin V陽性細胞的分布相關(guān)關(guān)系早期斑禿深層毛囊周圍CD4、CD8陽性T細胞浸潤與Annexin V陽性細胞數(shù)量呈顯著正相關(guān)性，而淺層毛囊周圍兩者無明顯相關(guān)性。中晚期斑禿而淺層毛囊與深層毛囊周圍CD4、CD8陽性T細胞浸潤程度和Annexin V陽性細胞數(shù)量無明顯正相關(guān)(表1)。

表1　T細胞浸潤和Annexin V陽性細胞在淺、深層毛囊的相關(guān)性

注：*P<0.05

3　討論

斑禿毛發(fā)脫落主要分為兩個階段：免疫細胞浸潤和毛囊異常的快速退行性變[7]。早期斑禿，即在斑禿的急性期，組織病理主要表現(xiàn)為炎癥細胞浸潤[8]；而在中晚期斑禿，皮損炎癥浸潤可不明顯，病理改變主要集中在毛囊周期的改變，退行期及休止期毛囊明顯增多，以及毛囊微小化[5,9]。

本研究以皮脂腺為水平，將頭皮分為兩層，淺層包括表皮及真皮淺層的永久毛囊，深層包括真皮深層及脂肪層的周期性毛囊[10]。Whiting[11]指出斑禿患者皮損處受累毛囊深部毛球周圍的纖維化不顯著，而其在淺部毛囊區(qū)域的纖維化比較明顯。該種纖維化可能與局部的炎癥細胞活性關(guān)系密切，但既往病理研究對淺層毛囊和血管炎癥在斑禿發(fā)病中的作用尚未深入探索。本研究發(fā)現(xiàn)，早期斑禿患者淺層血管和毛囊周圍可見中量到大量T細胞浸潤，顯著高于正常對照；淺層毛囊部分上皮細胞表達Annexin V，但毛囊內(nèi)部鮮見陽性細胞，推測在早期斑禿發(fā)病過程中淺層永久毛囊雖受炎癥破壞，但并不嚴重。隨著病程的發(fā)展，中晚期斑禿患者皮損處淺層血管和毛囊周圍淋巴細胞浸潤減少，與正常對照持平，毛囊Annexin V陽性細胞較少，表明在斑禿中晚期，炎癥細胞浸潤較少，淺層永久毛囊極少遭受破壞。

在早期斑禿深層毛囊周圍T細胞浸潤顯著高于正常對照，但低于中晚期斑禿，且與Annexin V陽性細胞數(shù)量呈顯著正相關(guān)性，而在淺層毛囊無明顯相關(guān)。說明早期斑禿在淺層毛囊雖明顯炎癥浸潤，但其凋亡和T細胞浸潤關(guān)系不大，而深層毛囊周圍炎癥細胞浸潤是導(dǎo)致其凋亡的主要原因。中晚期斑禿毛囊深層T細胞浸潤與Annexin V陽性細胞數(shù)量無明顯相關(guān)性，推測是由于中晚期毛囊已經(jīng)凋亡，而T細胞逐漸消散或凋亡所致。

上述發(fā)現(xiàn)表明，淺層血管和毛囊周圍T細胞浸潤同深層毛球部浸潤同樣參與早期斑禿病理進程和毛囊凋亡過程。早期斑禿的免疫進程包括毛囊免疫豁免的喪失以及對抗原的異常提呈[1]，盡管兩者機制有所不同，但正常人群的淺層和深層毛囊均被認為是毛囊免疫豁免部位[12]。之前我們研究曾發(fā)現(xiàn)，早期斑禿淺層Th1型細胞因子升高，生長期毛囊促凋亡基因caspase3、p53、Fas mRNA表達水平增高[4]，因此推測淺層毛囊和血管周圍T細胞浸潤，細胞因子的分泌可能對毛囊周期造成影響，免疫豁免喪失，引發(fā)生長期毛囊快速退行性變，周期性毛囊凋亡。

綜上所述，本研究推測早期斑禿疾病剛發(fā)生發(fā)展時淺層毛囊有輕度破壞凋亡，但并不嚴重，且其凋亡和T細胞浸潤關(guān)系不大。與之相比，早期斑禿深層毛囊周圍T細胞浸潤是導(dǎo)致其凋亡的主要原因。在斑禿中晚期，炎癥細胞浸潤較少，淺層永久毛囊極少遭受破壞。

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(收稿：2016-01-30修回：2016-03-29)

·論著·

基金項目：自治區(qū)衛(wèi)生廳青年科技人才專項科研項目(編號：2014Y07)

作者單位：新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院，烏魯木齊,830001

通信作者：吳秀娟，E-mail: wxj7795@163.com

反射式共聚焦掃描顯微鏡在日光性角化病診斷中的應(yīng)用

吳秀娟向芳趙宗峰鄒云敏普雄明

[摘要]目的：明確反射式共聚焦掃描顯微鏡(RCM)下日光性角化病的形態(tài)學(xué)特征及在診斷日光性角化病中的應(yīng)用價值。方法：對136例日光性角化病患者進行RCM技術(shù)掃描并與常規(guī)組織病理進行比較分析。結(jié)果：136例患者RCM成像特征為棘細胞層排列紊亂及角質(zhì)形成細胞異型性，與日光性角化病組織病理改變一致，符合率100%。結(jié)論：日光性角化病在RCM下具有典型特征，可作為無創(chuàng)診斷日光性角化病的重要依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]共聚焦掃描顯微鏡；日光性角化病

[Abstract]Objective: To determine the image features of actinic keratosis (AK) under reflectance confocal microscopy (RCM) and the application value in the diagnosis of AK. Methods: The lesions of 136 patients who were clinically suspected AK were examined with RCM and the results were compared with biopsy. Results: The characteristics of AK under RCM were disorganization of stratum spinosum and atypical keratinocytes, which were accordance with the feature of histopathology of AK. The agreement rate was 100%. Conclusion: The characteristics of AK under RCM is typical and can be used as a tool in the diagnosis of AK.

[Key words]reflectance confocal microscopy; actinic keratosis

日光性角化病是最常見的皮膚腫瘤，長期暴曬、I-III型皮膚、PUVA治療、砷暴露和慢性皮膚炎癥均為重要的易感因素。臨床表現(xiàn)為紅斑、角化性丘疹或斑塊，好發(fā)于日光暴露部位，如面部、前額、手、下肢等。幾十年來，日光性角化病一直被認為是一種癌前病變，與浸潤性鱗狀細胞癌有著相似的細胞、組織病理及分子機制，因此，目前把日光性角化病定位為皮膚原位癌[1,2]。日光性角化病,病變局限在表皮，一般不會發(fā)生轉(zhuǎn)移，但在10年內(nèi)仍有10%～20%的日光性角化病皮損進展為鱗狀細胞癌[3]。然而，在日光性角化病皮損周圍看似100%正常皮膚部位經(jīng)組織病理學(xué)證實也具有日光性角化病的病理改變[4]，因此提出區(qū)域癌化這一概念，表明在整個非典型角質(zhì)細胞區(qū)域均有腫瘤形成，而不僅是在皮損區(qū)域有瘤細胞形成[5]。通常日光性角化病的診斷需要依靠臨床和組織病理學(xué)，需要進行有創(chuàng)性的皮損活組織檢查，因此,對于日光性角化病的診斷和管理皮膚病理檢查不是一個可行性方法，而對于區(qū)域癌化這部分病變，皮損活組織檢查更加不現(xiàn)實，所以可行重復(fù)性無創(chuàng)診斷方法。

反射式共聚焦掃描顯微鏡(Reflectance confocal microscopy, RCM)已被用來評估非黑素瘤等皮膚腫瘤的組織病理學(xué)特征，日光性角化病是最有希望進行實時診斷的疾病[6]。RCM是近年來一種新興的飛速發(fā)展的非侵入性三維計算機斷層成像技術(shù)，具有原位、實時、動態(tài)等特點，可以保證在細胞生理狀態(tài)下進行無創(chuàng)診斷。RCM一直被用來實時診斷非黑素瘤皮膚癌，尤其是基底細胞癌的非侵入性診斷[7,8]。但是，日光性角化病的RCM評估還只是在初步研究階段[9]。本研究利用RCM技術(shù)對136例日光性角化病患者的圖像特征進行歸納總結(jié)并與常規(guī)組織病理進行比較分析，探討RCM在診斷日光性角化病中的應(yīng)用價值。

1　資料與方法

1.1臨床資料136例患者均為2012年1月至2015年1月在新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院皮膚性病科門診就診的患者，136例患者中男38例，女98例(男∶女=1∶2.58)，平均年齡(62.21±13.44)歲，病程4～35個月，平均(20.13±4.80)個月，皮損發(fā)生在面頰部75例，鼻背23例，額部8例，顳部25例，上肢2例，頭皮2例，眼瞼1例。所有患者單發(fā)者有83例，多發(fā)者有53例。表現(xiàn)為淡褐色或紅色圓形、不規(guī)則形角化性丘疹或斑片，直徑0.5～2 cm，境界比較清楚，表面附著黏著性鱗屑，伴有角化過度或呈疣狀增生，周圍有紅暈(圖1)。

圖1　右面頰淡紅色斑疹，表面少許結(jié)痂

1.2方法

1.2.1儀器反射式共聚焦激光掃描顯微鏡(Vivascope1500美國Lucid公司)，上?？祳W中國有限公司。

1.2.2研究方法對所有接受檢查的患者告知檢查方法及目的，選取患處皮損，用蒸餾水浸潤皮損處，以醫(yī)用超聲耦合劑為介質(zhì)，行RCM掃描。然后，該皮損行皮膚活檢進行常規(guī)組織病理檢查。

2　結(jié)果

2.1組織病理結(jié)果136例患者均經(jīng)組織病理學(xué)檢查明確診斷日光性角化病，日光性角化病組織病理特征：角化過度和角化不全交替，表皮呈芽蕾向下增生，棘細胞排列紊亂，表皮下部有不典型角質(zhì)形成細胞，細胞核大、多形性、深染，真皮淺層有明顯的日光彈性纖維變性，并可見程度不同的淋巴細胞浸潤(圖2)。

圖2　角化過度、角化不全，表皮細胞排列紊亂，表皮中下部細胞明顯異型性(HE，×100 )

2.2RCM圖像特點日光性角化病RCM圖像分析結(jié)果顯示：120例患者伴有角化過度，126例患者伴有灶狀角化不全，所有患者皮損部位均可見表皮角質(zhì)形成細胞排列紊亂，失去正常的蜂窩狀結(jié)構(gòu)，角質(zhì)形成細胞大小和形態(tài)呈非典型性，為異型的角質(zhì)形成細胞，異型的角質(zhì)形成細胞表現(xiàn)為邊緣較高折光的靶形細胞，呈非典型蜂窩狀模式(圖3a)，102例患者在真皮網(wǎng)狀層上部可見日光彈力組織變性，表現(xiàn)為明亮的束狀無定型物質(zhì)，128例在皮損區(qū)真皮淺層有單一核細胞及少許噬黑素細胞浸潤(圖3b)，103例在皮損區(qū)可觀察到血管明顯扭曲擴張(圖3c)。

3a：表皮細胞排列紊亂及異型角質(zhì)形成細胞，異型角質(zhì)形成細胞表現(xiàn)為邊緣較高折光的靶形細胞(0.5 mm×0.5 mm);3b：皮損區(qū)可見以單一核細胞為主的炎癥細胞浸潤(0.5 mm×0.5 mm);3c:皮損區(qū)可見血管明顯扭曲擴張(0.5 mm×0.5 mm)

圖3日光性角化病RCM圖像

2.3RCM診斷符合率依據(jù)Aghassi等[9]的診斷標準，本研究136例患者經(jīng)RCM檢查診斷日光性角化病136例，經(jīng)組織病理學(xué)證實均為日光性角化病，可見RCM診斷日光性角化病的符合率為100%。

3　討論

日光性角化病(Actinic Keratosis, AK)又稱為光線性角化病，是臨床上最常見的原位皮膚癌[10]，臨床表現(xiàn)為多發(fā)性紅色或黃棕色干燥、鱗屑性損害，發(fā)生于老年人，特別發(fā)生于易曬傷而不易曬黑者，面部、頸部、手背及前臂最常受累，有0.1%～10%的日光性角化病發(fā)展成侵襲性鱗狀細胞癌。白種人中，澳大利亞地區(qū)發(fā)病率最高，男約55%，女約37%，發(fā)病年齡30～70歲。美國發(fā)病率次之，約為11%～26%。歐洲最少，發(fā)病率約6%～15%[11-13]。診斷日光性角化病除外依靠典型的臨床表現(xiàn)之外，常規(guī)組織病理學(xué)評估仍是金標準。但對于每個皮損均采用活組織檢查費用昂貴、耗時，而且還有手術(shù)疤痕形成。

越來越高的非黑素瘤皮膚癌發(fā)病率促進了光學(xué)技術(shù)的革新，促進了這些皮損的非侵襲形態(tài)學(xué)特征。RCM已經(jīng)在體內(nèi)非侵襲的描述非黑素瘤皮膚癌。Aghassi等[9-14]于2000年已經(jīng)發(fā)表了日光性角化病的RCM評估標準，即71%的皮損有角化過度，100%表皮下部核增大和核異型性，57%的皮損表皮結(jié)構(gòu)紊亂。但是RCM的穿透深度在一定程度上限制了日光性角化病的診斷，尤其對于肥厚型和角化過度型皮損。對于活組織檢查來說，RCM逐漸變?yōu)榭蛇x擇的方式，由于將來光學(xué)穿透深度的技術(shù)發(fā)展或者簡單的去除角質(zhì)層，其限制性也會被克服。

本研究的目的是評估RCM在日光性角化病診斷中的應(yīng)用以及優(yōu)化RCM評判日光性角化病參數(shù)。共有136例患者均經(jīng)組織病理學(xué)檢查明確診斷日光性角化病，每個患者的皮損均行RCM檢查，總結(jié)上述患者RCM特點有：①角化過度或角化不全；②表皮角質(zhì)形成細胞排列紊亂，異型的角質(zhì)形成細胞表現(xiàn)為邊緣較高折光的靶形細胞，呈非典型蜂窩狀模式；③真皮網(wǎng)狀層上部可見明亮的束狀無定型物質(zhì)，為日光彈力組織變性；④真皮淺層有單一核細胞及少許噬黑素細胞浸潤，局部見血管明顯扭曲擴張。其中，棘細胞層排列紊亂及細胞異型性是RCM診斷日光性角化病最特異性指征，這與Ulrich等[15]的結(jié)論一致，并且炎癥細胞浸潤和外滲不是診斷日光性角化病的敏感參數(shù)，因為這些特征不能總是在RCM檢查時觀察到。另外，日光性角化病和早期鱗狀細胞癌、鮑溫病如何通過RCM圖像進行鑒別，尚需進一步研究。除了RCM能無創(chuàng)診斷日光性角化病外，還可以用來監(jiān)測外用5%氟尿嘧啶治療日光性角化病的效果[16]。

總之，本研究利用RCM技術(shù)對日光性角化病皮損進行掃描，觀察認為棘細胞層排列紊亂及細胞異型性是RCM診斷日光性角化病具有高度的敏感性和特異性，為日光性角化病的RCM診斷提供了經(jīng)驗。

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(收稿：2015-10-13修回：2015-12-08)

Correlation between the apoptotic factor Annexin V and T lymphocytes infiltration in alopecia areata

ZHAOYing1,ZHANGXiaoting2,CAIZeming3,YEYanting4,ZHANGBin4,ZHANGXingqi4.

1.DepartmentofDermatology,HezeMunicipalHospital,Heze270000,China; 2.DepartmentofDermatology,theSecondAffiliatedHospitalofWenzhouMedicalUniversity,Wenzhou325000,China; 3.DepartmentofDermatology,theThirdAffiliatedHospitalofNanchangUniversity,Nanchang330008,China; 4.DepartmentofDermatology,theFirstAffiliatedHospitalofSunYat-senUniversity,Guangzhou510000,China

Correspondingauthor:ZHANGXingqi,E-mail:xingqi.zhang@aliyun.com

Objective: To detect the expression of apoptotic factors Annexin V and to determine the relationship between the expression of apoptotic factors Annexin V and the T lymphocyte infiltration in alopecia areata (AA). Methods: Immunohistochemical double-staining of CD3/CD4/CD8 and Annexin V was used to detect the expression of apoptotic factors Annexin V in the lesions of 22 patients with AA (11 patients at early stage and 11 at advanced stage) and normal scalp of 10 controls. Results: The number of Annexin V-positive cells around vessels and follicular in the superficial layer of the lesions in early stage was significantly higher than that in advanced stage. However, the number in deep layer around follicular of the lesions was significantly lower than that in advanced stage (P<0.05). There was a positive correlation between the number of T lymphocyte and Annexin V positive cells in deep layer and there was no significant correlation in superficial layer. Conclusion: The apoptosis of permanent hair follicle cells in superficial layer was uncorrelated with T lymphocyte infiltration and the T cell infiltration was the main cause of the apoptosis of cyclical hair follicle cells in deep layer.

alopecia areata; apoptotic factors; T lymphocyte

Application of the reflectance confocal microscopy in the diagnose of actinic keratosis

WUXiujuan,XIANGFang,ZHAOZongfeng,ZOUYunmin,PUXiongming.

People'sHospitalofXinjiangUygurAutonomousRegion,Urumqi830001,China

Correspondingauthor:WUXiujuan,E-mail:wxj7795@163.com

山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計劃項目(編號：2013WS0100)

1菏澤市立醫(yī)院皮膚科，山東菏澤，270000

2溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院皮膚科,浙江溫州，325000

章星琪，E-mail: xingqi.zhang@aliyun.com

3南昌大學(xué)第三附屬醫(yī)院皮膚科，江西南昌，330008

4中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院 皮膚科，廣州，510000