孫 雯，李美華，羅 勇，盛立彥，潘 潔

(上?；ぱ芯吭杭夹g開發(fā)中心，上海 200062)

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液相色譜法測定車用尿素中縮二脲含量*

孫 雯，李美華，羅 勇，盛立彥，潘 潔

(上?；ぱ芯吭杭夹g開發(fā)中心，上海 200062)

建立一種車用尿素中縮二脲含量的反相高效液相色譜方法。采用Venusil HILIC色譜柱，檢測波長為195 nm，乙腈-10 mmol/L醋酸銨水溶液為流動相。方法的線性相關系數(shù)R=0.9998，檢出限為0.05 μg/mL，定量限為0.17 μg/mL，加標回收率為98.53%～100.88%，相對標準偏差RSD值為0.42%～0.58%。結果表明，該方法具有較高的靈敏度與準確度，且操作簡單、快速、重現(xiàn)性好，準確度高，是尿素中縮二脲檢測的一種理想分析方法。

尿素；縮二脲；高效液相色譜

目前，縮二脲常用的檢測方法是分光光度法[7-8]及液相色譜法[9-11]，如：GB/T 22924-2008中分別介紹了分光光度法及液相色譜法測定復混肥料中縮二脲含量的方法，其中液相色譜法采用甲醇-10 g/L磷酸二氫鉀水溶液(pH=6.0)做流動相[12]，該方法的回收率98.8%～106.8%，相對標準偏差0.5%～0.8%[13]；文獻報道，以水-氨水-高氯酸為流動相，采用L-column ODS柱，在190 nm下測定尿素中縮二脲含量，該方法回收率99.0%～102.5%，相對標準偏差0.18%～1.08%[14]；近期有文獻采用Venusil HILIC柱，以乙腈-水為流動相，在200 nm下測定乳制品中縮二脲含量，該方法回收率95.0%～101.0%，相對標準偏差2.2%～6.4%，方法的檢出限為0.2 mg/kg[15]。由此可見，目前國內(nèi)對縮二脲的檢測，大多使用高濃度緩沖鹽體系的流動相或在流動相中使用強酸性試劑，這對儀器及色譜柱的影響較大；而采用乙腈-水做流動相方法的精密度則不及前者。

本文采用HILIC色譜柱，以乙腈-10 mmol/L醋酸銨水溶液為流動相，對縮二脲、尿素分離方法進行了探索研究。該法不但避免了離子對試劑的使用，而且可獲得更低的檢測限，具有簡便、快速、準確性好的特點，可滿足車用尿素中微量縮二脲雜質(zhì)的控制分析。

1 實 驗

1.1 儀器與試劑

島津LC-20AT液相色譜儀，N2000工作站；Sartorius CP225D十萬分之一電子天平；KQ-300VDE超聲波清洗器，昆山超聲儀器有限公司。

醋酸銨，HPLC，上海安譜科學儀器有限公司；醋酸，HPLC，美國Tedia公司；乙腈，HPLC，上海強順化學試劑有限公司；縮二脲標樣，純度>99.0%，日本TCI公司；尿素標樣，純度>99.0%，北京百靈威科技有限公司；實驗用水為超純水。

1.2 色譜條件

色譜柱：Venusil HILIC(4.6 × 150 mm，5 μm)，艾杰爾科技有限公司；檢測波長：195 nm；流動相：乙腈：10 mmol/L醋酸銨水溶液(pH=5)=95：5(V/V)，流速1.0 mL/min，進樣量：20 μL；柱溫：30 ℃。

“用曲的話來說，這難道不是老公的義務嗎？但這打死也不能說。Y反復強調(diào)，S跟她說過的，跟曲的婚姻沒有愛情，也幾乎沒有性生活，曲對S沒有熱情，而S也不渴念她的身體——就是因為這句話，Y才決定跟他好的，否則，她還搞什么呢，絕不會讓S碰她。”

1.3 溶液的配制

1.3.1 標準溶液的配制

稱取縮二脲標樣0.05 g(準確至0.0002 g)于100 mL容量瓶中，加入適量流動相，超聲振蕩10 min，使標樣完全溶解后冷卻至室溫，定容，搖勻備用。分別移取上述溶液0.5 mL、0.8 mL、1.3 mL、1.8 mL、2.5 mL于10 mL容量瓶中，以流動相稀釋定容，搖勻，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

移取100 μL樣品溶液，于10 mL容量瓶中，加入適量流動相定容，搖勻，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后備用。

1.4 測定

1.4.1 標準曲線的繪制

在1.2所述色譜條件下，每個濃度的標樣重復進樣3次，以縮二脲含量為橫坐標，三次平行測定的峰面積平均值為縱坐標，繪制標準曲線，得到線性回歸方程。

1.4.2 試樣的測定

將1.3.2中配制的樣品溶液，在與標準曲線相同的條件下進行試樣測定。

2 結果與討論

2.1 色譜柱的篩選

分別選用Venusil HILIC(E)(2.1 m × 150 mm，5 μm)及Venusil HILIC (4.6 m ×150 mm，5 μm)進行檢測，結果發(fā)現(xiàn)：前者不能實現(xiàn)基線分離；后者分離效果較好，實現(xiàn)了縮二脲及尿素的有效分離，且色譜峰尖銳。其色譜圖如圖1所示。

圖1 使用不同色譜柱縮二脲、尿素液相色譜圖

2.2 檢測波長的確定

對同一樣品，在190～210 nm波長范圍內(nèi)選取5個點分別進行實驗，結果如圖2所示。從圖2中可看出，檢測波長為195 nm時，縮二脲及尿素峰面積最大，因此，選擇195 nm為檢測波長。

圖2 檢測波長和峰面積的關系

2.3 流動相的選擇

為達到較好的分離度，從而滿足定量分析的要求，本文分別考察了乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水溶液、乙腈-10 mmol/L醋酸銨水溶液(醋酸調(diào)pH=6.5～4.0)等不同流動相體系對分離效果的影響。結果表明，采用乙腈:10 mmol/L醋酸銨水溶液(pH=5)=95：5(V/V)的流動相體系時，尿素、縮二脲的分離效果較好。

2.4 線性關系與檢出限

配制5個不同濃度的縮二脲標準溶液，按1.2所述色譜操作條件，測定相應的峰面積，以縮二脲含量為橫坐標，峰面積為縱坐標做圖，其線性方程為y=25909x+56065，相關系數(shù)R=0.9998。取適量縮二脲標準溶液，采用逐級稀釋法，按進樣后所得譜圖中縮二脲色譜峰信噪比S/N=3計算方法的檢出限，S/N=10計算方法的定量限，得出檢出限為0.05 μg/mL，定量限為0.17 μg/mL。

2.5 回收率及精密度的測定

在已知縮二脲含量的車用尿素樣品溶液中，分別加入8.18 μg/mL、24.53 μg/mL和39.88 μg/mL的縮二脲標準溶液，每個濃度樣品重復測定5次，結果如表1所示。由實驗結果可見，樣品的回收率為98.53%～100.88%，相對標準偏差為0.42%～0.58%。

表1 回收率與精密度(n=5)

3 結 論

隨著相關機動車排放法規(guī)的進一步實施，車用尿素作為柴油車SCR系統(tǒng)的尾氣凈化液的應用日益廣泛。本文采用對強極性、強親水性化合物具有良好保留效果的HILIC柱，建立了車用尿素產(chǎn)品中微量縮二脲的液相色譜定量方法。通過對流動相條件進行優(yōu)化，使尿素與縮二脲達到良好的分離效果。該方法避免了高濃度緩沖鹽的使用對儀器所造成的影響，且操作簡單、快速、重現(xiàn)性好，準確度高，是車用尿素產(chǎn)品質(zhì)量檢測的一種理想分析方法。

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Determination of Biuret in Automobile Urea by High Performance Liquid Chromatography*

SUNWen,LIMei-hua,LUOYong,SHENGLi-yan,PANJie

(Shanghai Research Institute of Chemical Industry, Shanghai 200062, China)

A reversed-phase HPLC method was established to determine the biuret content in automobile urea. The Venusil HILIC column was used and the wavelength was 195 nm, using methyl cyanide-10 mmol/L ammonium acetate solution as mobile phase. This method had high sensitivity and precision with a linear correlation of 0.9998, the minimum determination concentration of 0.05 μg/mL, the minimum quantitation concentration of 0.17 μg/mL, the recovery of standard addition of 98.53%～100.88%, and the RSD values of 0.42%～0.58%. The results showed that it was characterized by good precision and accuracy, simple operation, fast, good reproducibility and higher accuracy. So it was a better method in determination of biuret in urea.

urea; biuret; high performance liquid chromatography

上海市科委優(yōu)秀技術帶頭人計劃(12XD1421700)。

孫雯(1983-)，女，工程師，主要從事儀器分析與研發(fā)工作。

李美華(1968-)，女，高級工程師，主要從事儀器分析與研發(fā)工作。

O657.7+2

A

1001-9677(2016)020-082-03