王濤 史鐵鈞 林偉 賈云鳳 劉文鵬 王培新 崔紹杰

(1解放軍第306醫(yī)院神經(jīng)外科，北京 100101; 2第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院神經(jīng)外科，陜西 西安 710032)

·論著·

金剛烷胺對(duì)雙側(cè)輕型腦損傷大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用研究

王濤1史鐵鈞1林偉2賈云鳳1劉文鵬1王培新1崔紹杰1*

(1解放軍第306醫(yī)院神經(jīng)外科，北京 100101;2第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院神經(jīng)外科，陜西 西安 710032)

目的探討金剛烷胺對(duì)雙側(cè)輕型顱腦損傷后神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用，并對(duì)不同劑量金剛烷胺進(jìn)行藥效學(xué)分析。方法建立大鼠液壓腦損傷模型，56只大鼠隨機(jī)分為4組，分別于傷后每8 h一次，連續(xù)16 d給予三組劑量(15 mg/kg、45 mg/kg或135 mg/kg)金剛烷胺或等滲鹽水，首次給藥于傷后1 h完成。腦組織于傷后第48小時(shí)或16天提取行Fluoro Jade-B組織熒光染色或甲酚紫染色比較雙側(cè)海馬CA3區(qū)神經(jīng)細(xì)胞存活情況，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜(LS-MS/MS)方法測(cè)定大鼠體內(nèi)不同劑量金剛烷胺血藥濃度，研究金剛烷胺經(jīng)腹腔單次給藥后在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過程。結(jié)果45 mg/kg或135 mg/kg兩組治療劑量在大鼠體內(nèi)血藥濃度與臨床治療監(jiān)測(cè)濃度(717 ng/ml)相似。與安慰劑組相比，45或135 mg/kg兩組劑量金剛烷胺可明顯減少傷后48 h腦組織急性變性神經(jīng)元數(shù)量(Plt;0.05)，高劑量組(135 mg/kg)CA3區(qū)長(zhǎng)期存活神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量顯著增加(P=0.032)。結(jié)論治療劑量金剛烷胺可顯著減輕腦損傷后海馬結(jié)構(gòu)CA3區(qū)神經(jīng)細(xì)胞損傷程度，為臨床治療輕型顱腦損傷提供新的治療手段。

創(chuàng)傷性顱腦損傷; SD大鼠; 海馬; 神經(jīng)細(xì)胞; 藥代動(dòng)力學(xué)

近年來，反復(fù)性輕型顱腦損傷(repeated mild traumatic brain injurys, rmTBI)已越來越引起研究人員的關(guān)注，特別是對(duì)于運(yùn)動(dòng)員和軍人等一些反復(fù)輕型腦外傷發(fā)生的高比例人群。目前的臨床及實(shí)驗(yàn)室證據(jù)表明，rmTBI可導(dǎo)致不可逆腦損傷。金剛烷胺(amantadine, AMT)臨床上主要用于抗病毒及帕金森癥治療，前期研究已證實(shí)其可參與多種神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)機(jī)制，有效促進(jìn)腦損傷后長(zhǎng)期意識(shí)障礙患者的康復(fù)[1,2]。作者選擇不同劑量AMT，通過神經(jīng)組織學(xué)染色和藥代動(dòng)力學(xué)方法觀察不同劑量金剛烷胺對(duì)rmTBI大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用。

材料與方法

一、實(shí)驗(yàn)對(duì)象及藥物準(zhǔn)備

56只成年SD大鼠，體重約(300±15)g，按隨機(jī)數(shù)字法分為四組，A組：損傷+等滲鹽水，12只；B組：損傷+金剛烷胺 15 mg/kg，12只；C組：損傷+金剛烷胺 45 mg/kg，13只；D組：損傷+金剛烷胺135 mg/kg，13只。損傷前后詳細(xì)記錄大鼠的生命指標(biāo)。金剛烷胺(美國(guó)Sigma-Aldrich公司, #A1260) 溶解于等滲鹽水中，按1 ml/kg換算公式通過腹腔注射給予大鼠體內(nèi)，首次給藥于傷后1 h完成。

二、液壓打擊損傷動(dòng)物模型制備

大鼠麻醉后置于手術(shù)臺(tái)，于中線旁3 mm ，前囪后4.5 mm行雙側(cè)開顱鉆孔術(shù)，連接側(cè)方液壓打擊裝置。本實(shí)驗(yàn)中打擊強(qiáng)度約為1.35 kPa，打擊間隔1 min。記錄損傷前后體溫及腦溫變化。同時(shí)記錄大鼠術(shù)后復(fù)蘇時(shí)間，作為推測(cè)損傷強(qiáng)度的另一指標(biāo)。

三、腦組織標(biāo)本提取、固定及切片制備

大鼠分別于傷后48 h或16 d深度麻醉，經(jīng)40 g/L多聚甲醛溶液固定腦組織。將選定范圍內(nèi)(前囪后2.4～5.2 mm)腦組織冰凍后連續(xù)冠狀切片(厚度45 μm)。每隔5張共選取10張貼于已處理的載玻片上，行后續(xù)組織學(xué)染色。

四、神經(jīng)組織學(xué)染色

組織切片分別用于Fluoro Jade-B組織熒光染色(急性變性神經(jīng)元)和甲酚紫染色(長(zhǎng)期存活神經(jīng)細(xì)胞)。觀察區(qū)域限定于雙側(cè)海馬結(jié)構(gòu)CA3區(qū)，其一端以上下末端顆粒細(xì)胞進(jìn)入齒狀突為界，另一端以錐體細(xì)胞層變窄交界區(qū)域?yàn)榻纭?/p>

1.Fluoro Jade-B組織熒光染色：組織切片經(jīng)梯度水化和漂洗處理后，浸泡于6 g/L高錳酸鉀溶液15 min。至此后所有操作均在昏暗光線下進(jìn)行， FJ-B染色劑(FJ溶液20 ml，雙蒸水180 ml，醋酸18 μl)室溫染色30 min，雙蒸水漂洗后37℃恒溫箱過夜。中性樹膠封片處理。熒光顯微鏡(Nikon B-2A, 日本, 尼康公司)于40倍物鏡下計(jì)數(shù)熒光標(biāo)記變性神經(jīng)元。鑒定標(biāo)準(zhǔn)為綠色熒光、形態(tài)學(xué)清晰可見的胞體及最少可見1個(gè)樹突。

2.甲酚紫組織染色：經(jīng)處理后的組織切片浸泡于甲酚紫染色劑內(nèi)染色6 min，鹽酸酒精乙醇處理約40 s，雙蒸水沖洗30 s×2次，二甲苯浸泡5 min×2次。中性樹膠封片處理。100倍油鏡(Nikon E600, 日本, 尼康公司)下觀察神經(jīng)細(xì)胞存活狀態(tài)。通過細(xì)胞立體測(cè)量計(jì)數(shù)系統(tǒng)(Stereo InvestigatorTM8.0, 美國(guó), MBF Bioscience公司)記錄細(xì)胞數(shù)量。

五、藥代動(dòng)力學(xué)研究

大鼠(共6只)通過腹腔注射給予15 mg/kg AMT，分別于給藥后0.25 h, 0.5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 8 h自尾靜脈緩慢采集血樣約3 ml，靜置20 min后2 800 r/min離心15 min，取上清液(約0.15 ml)保存于-80℃冰柜。借助液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)模擬本實(shí)驗(yàn)三組劑量AMT間隔8 h給藥后藥效學(xué)。同時(shí)，將不同劑量AMT治療組大鼠于處死前采集血樣，測(cè)定血藥濃度，根據(jù)Win Nolin軟件進(jìn)行曲線擬合并計(jì)算代謝動(dòng)力參數(shù)，采血步驟同上所述。

六、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié) 果

共52只實(shí)驗(yàn)大鼠完成本次實(shí)驗(yàn)：A組，9只；B組，12只；C組，13只；D組，12只。多樣本均數(shù)t檢驗(yàn)結(jié)果顯示，四組大鼠在打擊強(qiáng)度、傷后復(fù)蘇時(shí)間及損傷前后溫度值方面無差異。4只大鼠(A組，3只；D組，1只)因打擊強(qiáng)度過低或傷后出現(xiàn)瀕死狀態(tài)退出實(shí)驗(yàn)。

一、體重變化

四組大鼠于傷后前3天體重均顯著下降，傷后4～5 d后體重逐漸增加，并于傷后第11～13天內(nèi)基本恢復(fù)至傷前基礎(chǔ)體重水平。各組間傷后體重變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[F(3,21)= 1.791,P=0.166]。傷后第16天體重分別為：A組(328±24)g；B組(321±20)g；C組(324±18)g；D組(331±22)g。

二、藥代動(dòng)力學(xué)

AMT單劑量(15 mg/kg)，單次經(jīng)腹腔注射于大鼠體內(nèi)，藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表1。通過計(jì)算血藥濃度峰值(peak concentration, Cmax)，血藥濃度谷值(minimum concentration, Cmin)，穩(wěn)態(tài)濃度(average concentration, Cavg)和濃度-時(shí)間曲線下面積(area under concentration-time curve, AUC)等代謝參數(shù)模擬三組劑量AMT每8 h給藥后大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)改變。結(jié)果提示15 mg/kg，45 mg/kg和135 mg/kg 三組劑量AMT大鼠體內(nèi)穩(wěn)態(tài)濃度分別為109 ng/ml，527 ng/ml和981 ng/ml， 45 mg/kg或135 mg/kg AMT治療組穩(wěn)態(tài)濃度與臨床治療中(100 mg, 1/12 h)人體穩(wěn)態(tài)濃度(717 ng/ml)相似 (圖1A)。大鼠于最后一次給藥后不同時(shí)間點(diǎn)采集血樣，結(jié)果顯示AMT于大鼠體內(nèi)半衰期為1.2 h，15 mg/kg，45 mg/kg和135 mg/kg三組劑量血藥濃度峰值分別為1 032 ng/ml，3 981 ng/ml和11 875 ng/ml，與標(biāo)準(zhǔn)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)一致(圖1B)。

三、組織學(xué)評(píng)估

1.急性變性神經(jīng)元：共20只大鼠(每組5只)于傷后48 h用于急性變性凋亡神經(jīng)元觀察與計(jì)數(shù)。低倍鏡下可見經(jīng)FJ-B熒光標(biāo)記的變性神經(jīng)元主要限定于損傷區(qū)域皮層及海馬錐體細(xì)胞層CA3區(qū)。高倍鏡下可見雙側(cè)損傷皮層及海馬區(qū)域相對(duì)分布稀疏、數(shù)量較少的亮綠色熒光染色的變性神經(jīng)元。細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果提示AMT治療組較等滲鹽水組表現(xiàn)出減少傷后48 h腦組織變性神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量的趨勢(shì)，其中45 mg/kg和135 mg/kg兩組劑量神經(jīng)保護(hù)效果最為顯著[45 mg/kg,P=0.042 ；135 mg/kg,P=0.038] (圖2)。

2.長(zhǎng)期存活神經(jīng)細(xì)胞：共26只大鼠(A組, 4只; B組, 7只; C組, 8只; D組, 7只)于傷后16 d行甲酚紫染色用于長(zhǎng)期存活神經(jīng)細(xì)胞研究。所有損傷組大鼠腦組織皮層完整，無明顯瘢痕組織。光鏡下大體病理可見打擊區(qū)域附近皮層連續(xù)性瘢痕組織和棕褐色含鐵血黃素沉積軟化灶形成，雙側(cè)海馬錐體細(xì)胞層皺縮變窄。100倍油鏡下海馬CA3區(qū)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，傷后連續(xù)給予高劑量(135 mg/kg)金剛烷胺治療組較等滲鹽水組，長(zhǎng)期存活神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量明顯增加[t(9)=3.28,P=0.032] (圖3)。

圖1 金剛烷胺經(jīng)腹腔注射入大鼠體內(nèi)后藥代動(dòng)力學(xué)測(cè)試結(jié)果
Fig 1 Pharmacokinetics analysis for the amantadine after i.p. administration
A: Solid lines represented the simulated plasma concentration profiles at each dose, and the dashed lines represented the average plasma concentrations at steady state (Css). The solid black line represented steady level from the human clinical dose (100 mg twice daily); B: Blood was obtained at different time points post last dose. Terminal blood levels (points) were superimposed on the simulated blood levels (lines) for each dose.

圖2 雙側(cè)輕型創(chuàng)傷性腦損傷后48 h變性神經(jīng)元Fluoro-Jade B 組織熒光染色結(jié)果
Fig 2 Fluoro-Jade B histofluorescent detection of degenerating neurons at 48 h post TBI in different treatment groups Quantification result revealed administration of MS-275 at both 45 and 135 mg/kg significantly reduced the number of degenerating neurons in the hippocampus CA3 at 48 h after TBI.

aPlt;0.05,vssaline control.

圖3 不同治療組大鼠傷后16 d甲酚紫組織染色結(jié)果
Fig 3 Cresyl violet staining neurons in different treatment groups at 16 d post TBI Stereological quantification of cresyl violet stained neurons showed more pyramidal neurons survived in the AMT-135mg/kg group compared to the saline group.

aPlt; 0.05,vssaline control.

討 論

TBI根據(jù)傷后病程發(fā)展及生化病理改變可分為原發(fā)性和繼發(fā)性損傷兩個(gè)階段。原發(fā)性損傷階段主要指外部因素直接作用引起的神經(jīng)組織損傷，其病理特征表現(xiàn)為發(fā)生在傷后短時(shí)間內(nèi)的急性神經(jīng)元變性凋亡[3]，繼發(fā)性損傷階段主要發(fā)生在傷后幾天至幾周時(shí)間內(nèi)，主要表現(xiàn)為進(jìn)展性神經(jīng)細(xì)胞死亡及神經(jīng)功能失調(diào)。傷后多巴胺能神經(jīng)元失活，興奮性神經(jīng)毒性氨基酸釋放，級(jí)聯(lián)神經(jīng)炎性反應(yīng)，鈣離子超載及細(xì)胞膜去極化等多種生化改變均可參與到這一復(fù)雜的病理過程中去，可進(jìn)一步加重顱腦損傷程度，嚴(yán)重者可造成永久性的神經(jīng)功能缺失[4]。盡管關(guān)于顱腦損傷的基礎(chǔ)研究已越來越引起人們的廣泛關(guān)注，然而目前仍缺乏有效的藥物干預(yù)治療手段應(yīng)用于臨床顱腦創(chuàng)傷的救治。

最近一項(xiàng)關(guān)于184例臨床重型顱腦損傷患者的隨機(jī)雙盲對(duì)照實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，參照傷后功能障礙等級(jí)量表(disability rating scale)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，腦損傷后4～16 w給予金剛烷胺治療患者較安慰劑治療組傷后癥狀改善及神經(jīng)功能恢復(fù)明顯加快(0.24分/w，P=0.007)[5]。Hammond等[6]同樣評(píng)估了76例腦外傷后6個(gè)月患者經(jīng)金剛烷胺治療后易怒，暴躁等精神癥狀改善情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)金剛烷胺治療組較安慰劑治療組神經(jīng)精神癥狀量表(neuropsychiatric inventory, NPI)評(píng)分明顯改善(P=0.0085)，81%個(gè)體癥狀發(fā)作頻率及程度改善至少3分以上。盡管大量臨床數(shù)據(jù)證實(shí)了金剛烷胺對(duì)于TBI的神經(jīng)保護(hù)潛能，但關(guān)于其動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的文獻(xiàn)報(bào)道較少，先前一項(xiàng)垂直打擊顱腦損傷模型研究顯示，低劑量(10 mg/kg，腹腔注射)金剛烷胺沒有明顯改善大鼠傷后神經(jīng)功能[7]。

金剛烷胺神經(jīng)保護(hù)機(jī)制主要包括通過增加突觸前多巴胺的釋放及突觸后多巴胺受體數(shù)量激活多巴胺能神經(jīng)元活性[1,8]；通過非選擇性抑制N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid, NMDA)型谷氨酸受體調(diào)節(jié)興奮性氨基酸介導(dǎo)的神經(jīng)毒性反應(yīng)[9]，抑制上游促炎性因子的釋放和刺激產(chǎn)生膠質(zhì)細(xì)胞炎性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(glial derived neurotrophic factor, GDNF)[2]等。筆者根據(jù)前期研究結(jié)果及藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，選擇了15 mg/kg，45 mg/kg，135 mg/kg三組治療劑量，每8 h一次，連續(xù)16 d通過腹腔注射方式給予大鼠體內(nèi)。結(jié)果顯示本次實(shí)驗(yàn)金剛烷胺注入大鼠體內(nèi)后其血藥濃度峰值、代謝半衰期及平均穩(wěn)態(tài)血藥濃度與藥代動(dòng)力學(xué)研究所得標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)指標(biāo)一致，同時(shí)45 mg/kg和135 mg/kg兩組劑量金剛烷胺在大鼠體內(nèi)代謝周期和平均穩(wěn)態(tài)血藥濃度與臨床治療人體內(nèi)濃度相似。所有損傷組大鼠在傷后致死率，全身營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)及每日體重變化百分比等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可認(rèn)為本研究中金剛烷胺三組給藥劑量及治療時(shí)間窗無明顯全身毒副作用。

Fluoro-Jade B作為一種陰離子熒光標(biāo)記物，對(duì)于各種原因?qū)е碌淖冃陨窠?jīng)細(xì)胞，包括胞體、樹突及軸突等細(xì)胞結(jié)構(gòu)具有特異選擇性和高度親和力，常用以鑒別觀察神經(jīng)系統(tǒng)損傷所致的急性神經(jīng)元變性[10]。趙學(xué)仁等[11]通過觀察腦外傷后30 min到7 d不同時(shí)間點(diǎn)急性神經(jīng)細(xì)胞變性結(jié)果發(fā)現(xiàn)，傷后48 h可觀察到最大程度的神經(jīng)元變性死亡，本實(shí)驗(yàn)即選擇腦損傷后48 h作為觀察節(jié)點(diǎn)，探討了金剛烷胺對(duì)腦損傷后急性期腦組織海馬CA3區(qū)急性神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。與預(yù)期相符，所有損傷組雙側(cè)腦組織皮層及海馬錐體細(xì)胞區(qū)均可見亮綠色熒光標(biāo)記的變性神經(jīng)細(xì)胞分布。定量分析結(jié)果提示45 mg/kg和135 mg/kg兩組劑量治療組傷后48 h雙側(cè)海馬CA3區(qū)變性神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量較安慰劑治療組明顯減少，表現(xiàn)出改善顱腦損傷后腦組織急性病理進(jìn)程的保護(hù)作用。

海馬CA3區(qū)神經(jīng)細(xì)胞生存狀態(tài)作為進(jìn)展期顱腦外傷后的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)已被得到廣泛認(rèn)可[12]。本實(shí)驗(yàn)中所應(yīng)用的顱腦打擊模型腦組織損傷范圍主要集中于大腦邊緣系統(tǒng)(如海馬組織)及頂葉相關(guān)皮層功能區(qū)域。因此筆者選擇雙側(cè)腦組織海馬CA3區(qū)，通過廣泛應(yīng)用于神經(jīng)組織的甲酚紫染色方法分別從大體組織學(xué)和神經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)兩方面探討了金剛烷胺對(duì)于傷后腦組織長(zhǎng)期生存神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用，結(jié)果顯示所有損傷組腦組織海馬錐體細(xì)胞層可見皺縮變窄， 135 mg/kg治療組傷后16 d腦組織海馬CA3區(qū)存活神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量較安慰劑治療組明顯增加。結(jié)合金剛烷胺對(duì)于腦損傷后急性腦組織損傷程度的改善作用，可認(rèn)為臨床治療劑量的金剛烷胺具有有效的神經(jīng)保護(hù)作用并可參與顱腦損傷后某些病理過程中而發(fā)揮其治療潛能。

本研究主要為金剛烷胺治療rmTBI的藥效性研究。筆者成功構(gòu)建了與臨床相關(guān)的rmTBI大鼠模型，并在此基礎(chǔ)上通過神經(jīng)組織學(xué)染色方法探討了顱腦損傷后給予不同劑量金剛烷胺對(duì)于減輕傷后急性期及進(jìn)展期腦組織損傷程度的保護(hù)潛能，同時(shí)通過記錄傷后大鼠全身狀況及體重變化等觀察指標(biāo)和藥代動(dòng)力學(xué)研究方法，進(jìn)一步對(duì)本實(shí)驗(yàn)中金剛烷胺用藥劑量及給藥周期進(jìn)行了安全性和有效性評(píng)估。研究證實(shí)rmTBI可造成損傷腦組織急性期神經(jīng)元變性和長(zhǎng)期存活神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量的顯著下降，傷后給予有效治療劑量的金剛烷胺可明顯減輕雙側(cè)海馬CA3區(qū)神經(jīng)細(xì)胞變性凋亡程度，表現(xiàn)出對(duì)輕型顱腦損傷后海馬CA3區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用。后期實(shí)驗(yàn)工作將繼續(xù)評(píng)估金剛烷胺對(duì)于腦損傷后大鼠長(zhǎng)期神經(jīng)行為認(rèn)知功能的改善作用，并深入探討其潛在神經(jīng)保護(hù)機(jī)制，最終為有效治療臨床腦損傷患者提供實(shí)驗(yàn)室理論參考。

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NeuroprotectiveeffectsofamantadineonratmodelsofbilateralmildTBI

WANGTao1,SHITiejun1,LINWei2,JIAYunfeng1,LIUWenpeng1,WANGPeixin1,CUIShaojie1

1DepartmentofNeurosurgery, 306thHospitalofPLA,Beijing100101;2DepartmentofNeurosurgery,XijingHospital,FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi'an710032, China

ObjectiveThe potential effects of clinically relevant dose of amantadine on hippocampal cell survival in adult rats following bilateral mild traumatic brain injuries are evaluated.MethodsExperimental TBIs were induced by fluid percussion device. Fifty-six rats were random subjected to four groups. Amantadine (15 mg/kg, 45 mg/kg, and 135 mg/kg) or saline control were administered intraperitoneal at 1 h after TBI followed by dosing three times daily for 16 consecutive days. Brains were removed at 48 h or 16 d after TBI for measurement of acute degenerating neurons and long-term neuronal survival. Amantadine plasma concentrations were determined by liquid chromatograph/mass spectrometer-mass spectrometer (LC/MS-MS) for pharmacokinetic analysis.ResultsStereological quantification revealed that 45 mg/kg or 135 mg/kg dose of amantadine significantly reduced the numbers of degenerating neurons compared to saline treated group (Plt;0.05), with the highest dose (135 mg/kg) producing the largest increase in surviving CA3 pyramidal neurons at 16 d post TBI (P=0.032). Pharmacokinetic analysis confirmed that the employed doses and dosing intervals (every 8 hours) produced plasma exposures of amantadine similar to those in humans (717 ng/ml).ConclusionOur data shows clinically relevant dosing schedules of amantadine would be a potential novel treatment to reduce brain tissue damage after traumatic brain injury.

Traumatic brain injury; Sprague-Dawley rats; Hippocampus; Neuron; Pharmacokinetics

1671-2897(2016)15-037-05

R 651.1+5

A

王濤，主治醫(yī)師，E-mail: wangtao0111@gmail.com

*通訊作者：崔紹杰，主任醫(yī)師，E-mail: csjbj@126.com

2014-08-13；

2014-11-22)