張　騰，佟繼銘，梁　策，萬(wàn)慧杰，張樹(shù)峰△

（1.河北省中藥研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000；2.華北理工大學(xué)中醫(yī)學(xué)院）

大黃對(duì)大鼠腎臟的毒性及可逆性研究*

張騰1、2，佟繼銘1，梁策2，萬(wàn)慧杰1，張樹(shù)峰1△

（1.河北省中藥研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000；2.華北理工大學(xué)中醫(yī)學(xué)院）

目的：觀察長(zhǎng)期應(yīng)用大黃對(duì)大鼠腎臟的毒性及其可逆性。方法：40只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（n=10）和大黃用藥組（n=30），大黃用藥組大鼠給予2g/kg的大黃水煎液連續(xù)灌胃60d，分別于末次給藥后24h、停藥30d、停藥60d處死10只大鼠。分別檢測(cè)各組大鼠血肌酐和尿素氮的含量， HE染色觀察腎臟的形態(tài)結(jié)構(gòu)。結(jié)果：大黃給藥期間大鼠精神萎靡、尿液呈深紅色改變、排稀便，停藥后10d恢復(fù)正常。給藥60d組大鼠血尿素氮的含量明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），血肌酐含量未見(jiàn)明顯異常改變；停藥30d、60d組大鼠血尿素氮和肌酐的含量與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。光鏡下觀察可見(jiàn)，給藥60d組大鼠腎臟近曲小管上皮細(xì)胞腫脹變性，腎小管管腔變窄，偶見(jiàn)部分上皮細(xì)胞脫落出現(xiàn)細(xì)胞空洞，腎小球未見(jiàn)萎縮、纖維化、肥大等異常病理變化；停藥30d、60d組大鼠腎臟形態(tài)結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯病理改變。結(jié)論：給予大鼠2g/kg的大黃灌胃給藥60d對(duì)腎臟有一定的毒性作用，但這種損害是可逆的，且恢復(fù)較快。

大黃；腎臟；毒性；可逆性

大黃在我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中應(yīng)用已久，始載于我國(guó)現(xiàn)存最早的藥學(xué)專(zhuān)著《神農(nóng)本草經(jīng)》，且歷代本草均有收載。我國(guó)8000多種中藥制劑中約有800多種含有大黃，大黃被廣泛用于治療多種疾?。?］。現(xiàn)代研究證明，大黃具有降脂、減肥、美容等作用。由于減肥美容用品多含有大黃，使大黃非中醫(yī)藥理論指導(dǎo)、非治療目的超長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用幾率大幅度增加，以至大黃引起各種不良反應(yīng)的報(bào)道逐年增多。文獻(xiàn)報(bào)道，大黃具有潛在的肝腎毒性［2-3］。但目前尚未見(jiàn)大黃致腎毒性是否可逆，恢復(fù)期需要多長(zhǎng)時(shí)間等報(bào)道。本研究旨在觀察大黃對(duì)大鼠腎臟損傷的程度、以及大黃所致腎臟損傷是否可逆，為大黃的臨床安全用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1藥物制備 大黃飲片，購(gòu)自安國(guó)市長(zhǎng)安中藥材有限公司，批號(hào)20130902。大黃水提物的制備：大黃藥材粉碎為粗粉，10倍水浸泡2h，煎煮10min，藥渣加8倍水，煎煮10min，過(guò)濾，合并濾液。40℃減壓濃縮至含大黃0.4g/ml（按生藥計(jì)算）的藥液。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理 8周齡SPF級(jí)SD大鼠40只，雌雄各半，體重180-200g，購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司，合格證號(hào)：SCXK（京）2009-0004。大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（n=10）和大黃水煎液2g/kg組（n=30），大黃用藥組大鼠按2g/kg灌胃給予大黃水煎液60d，分別于末次給藥后24h、停藥30d、停藥60d處死大鼠，每次隨機(jī)處死10只大鼠。

1.3檢測(cè)血清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）的含量 4%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，3000r/min離心10min，取血清，全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清肌酐和尿素氮的含量。

1.4觀察腎臟的形態(tài)結(jié)構(gòu) 大鼠取血后處死，取雙側(cè)腎臟，4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，5μm厚連續(xù)切片，常規(guī)HE染色，光鏡下觀察。

2　結(jié)果

2.1大鼠一般狀況 給藥第5d大鼠尿液呈深紅色，排稀便、軟便，糞便顏色呈深褐色；給藥第30d，大鼠皮毛的清潔度較差，大鼠活動(dòng)減少，精神不佳；停藥第10d大鼠上述癥狀消失，恢復(fù)正常。

2.2血液生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果 大黃給藥60d組大鼠血清尿素氮的含量明顯高于對(duì)照組，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；大黃給藥60d組大鼠血清肌酐的含量與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。大黃停藥30d、停藥60d組大鼠血清尿素氮和肌酐的含量與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)附表：

附表 各組大鼠血清尿素氮和肌酐的含量（）

附表 各組大鼠血清尿素氮和肌酐的含量（）

與對(duì)照組比較：*P＜0.05

組別　n　尿素氮（mmol/L）　肌酐（μmol/L）對(duì)照組　10　6.40±1.19　23.37±3.30大黃用藥組給藥60d　10　9.22±2.09*　24.00±4.98停藥30d　10　6.18±.77　22.55±3.77停藥60d　10　7.10±1.43　24.75±3.30

2.3大鼠腎臟的形態(tài)結(jié)構(gòu) ⑴對(duì)照組：大鼠腎臟形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，皮質(zhì)、髓質(zhì)分界清楚，腎小球未見(jiàn)萎縮、纖維化和肥大，腎小管管腔內(nèi)未見(jiàn)細(xì)胞管型及蛋白管型。⑵給藥60d組：與對(duì)照組大鼠比較，給藥60d組大鼠腎臟近曲小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)腫脹變性，腎小管管腔變窄，偶見(jiàn)部分上皮細(xì)胞脫落出現(xiàn)細(xì)胞空洞，但腎小球的形態(tài)結(jié)構(gòu)未見(jiàn)異常。⑶停藥30d組、停藥60d組：大鼠腎臟形態(tài)結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯病理改變。

3　討論

血肌酐和尿素氮的含量是臨床常用評(píng)價(jià)腎功能的重要指標(biāo)。肌酐由肌肉代謝產(chǎn)生釋放到血液中，經(jīng)腎小球?yàn)V過(guò)，隨尿液排出體外；尿素氮是蛋白質(zhì)代謝的主要終末產(chǎn)物，主要經(jīng)腎小球?yàn)V過(guò)，各段腎小管均可重吸收。血肌酐和尿素氮含量的升高，提示腎小球?yàn)V過(guò)功能受損［4］。在腎功能損害的早期，尿素氮的含量可在正常范圍，當(dāng)腎小球?yàn)V過(guò)率下降到50%以下時(shí)，尿素氮的含量才迅速升高。肌酐含量是反應(yīng)腎實(shí)質(zhì)損傷的指標(biāo)，腎小球?yàn)V過(guò)率下降到正常的1/3時(shí)，肌酐含量才會(huì)明顯升高［5］。

本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組大鼠比較，給予大鼠大黃水煎液連續(xù)灌胃60d，大鼠血尿素氮的含量明顯升高，而肌酐的含量無(wú)明顯變化；腎臟病理學(xué)檢查顯示，近曲小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)腫脹變性，腎小管管腔變窄，偶見(jiàn)部分上皮細(xì)胞脫落出現(xiàn)細(xì)胞空洞，但腎小球的形態(tài)結(jié)構(gòu)未見(jiàn)異常，與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相似［6］。本研究提示，給予大鼠2g/kg的大黃水煎液灌胃給藥60d，所導(dǎo)致的腎臟損傷處于早期階段；停用大黃30d，大鼠血肌酐、尿素氮的含量以及腎臟的形態(tài)結(jié)構(gòu)均已恢復(fù)正常。因此本研究表明，長(zhǎng)期應(yīng)用大黃對(duì)腎臟有一定的毒性作用，但這種損害是可逆的，且恢復(fù)較 快。

［1］曹俊嶺，孫玉琦，肖小河，等.對(duì)大黃“毒性”的認(rèn)識(shí)與思考［J］.世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，200 7，2（2）：112-114.

［2］張陸勇，江振洲，濮存海，等.大黃總蒽醌對(duì)SD大鼠灌胃給藥的長(zhǎng)期毒性研究［J］.中國(guó)生化藥物雜 志，2004，25（4）：206-209.

［3］王清秀，吳純啟，廖明陽(yáng).大黃及其主要成分的毒性毒理研究［J］.毒理學(xué)雜志，2007，21（4）：301-302.

［4］朱旭明，郁昊達(dá)，張健，等.血肌酐、尿素氮及白細(xì)胞計(jì)數(shù)在原發(fā)性高血壓中的意義［ J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，32（15）：1749-1750.

［5］李波，李峰.血清胱抑素C、β2-微球蛋白及傳統(tǒng)標(biāo)志物檢測(cè)在腎功能不同損害期的臨床研究［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2014，24（9）：1287-1289.

［6］王青秀.大黃及其主要成份的毒性毒理研究［D］.北京：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，2007.

STUDY ON TOXICITY AND REVERSIBILITY OF RHUBARB ON RATS’ KIDNEY

ZHANG Teng， TONG Ji-ming， LIANG Ce， et al
(Hebei Key Laboratory of Research and Exploitation of Traditional Chinese Medicine/Institute of Chinese Materia Media, Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective: To observe the toxicity and reversibility of long-term application of rhubarb on rats' kidney. Methods: 40 SD rats were randomly divided into control group （n=10） and rhubarb group （n=30）. The rats in rhubarb group were lavaged with rhubarb （2g/kg） for 60 days and then the rats were killed respectively 24h after drug administration， 30d after drug withdrawal and 60d after drug withdrawal. The urea nitrogen and creatinine content in serum of rats were respectively detected； HE stain was used to observe the morphology of kidney. Results: During rhubarb administration， the rats were dispirited， the urine was dark red and defecated looser stools. The urea nitrogen content of rats in drug administration 60d group was obviously higher than that of rats in control group （P＜0.05）； but the creatinine content showed no obvious abnormal changes. The urea nitrogen and creatinine content of rats in drug withdrawal 30d group and 60d group had no statistically significant differences compared with rats in control group（P＞0.05）. The morphological changes of rats' kidney in drug administration 60d group: proximal tubule epithelial cells swelled， the renal tubular lumen became narrow， part of the epithelial cells shed； The glomerulus appeared no obvious pathological changes，such as atrophy， fibrosis and hypertrophy. The kidney of rats in drug withdrawal 30d group and 60d group showed no obvious pathological changes. Conclusions: Lavaging rhubarb （2g/kg） for 60 days has certain toxic effects on rats' kidney， but the injury is reversible and recove r more fast.

Rhubarb； Kidney； Toxicity； Reversibility

R285.5

A

1004-6879（2016）01-005-03

2015-05-29）

* 河北省教育廳重大項(xiàng)目（2009301）