艾曉晴，賈喜花

（1.承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000；2.保定市第一中心醫(yī)院）

結(jié)腸癌組織DPD和Ki-67蛋白的表達(dá)和臨床意義

艾曉晴1，賈喜花2△

（1.承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000；2.保定市第一中心醫(yī)院）

目的：探討結(jié)腸癌組織二氫嘧啶脫氫酶（DPD）、細(xì)胞增殖核抗原Ki-67的表達(dá)及臨床意義。方法：采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)70例結(jié)腸癌組織和30例癌旁正常組織DPD、Ki-67蛋白的表達(dá)情況，并分析二者與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果：結(jié)腸癌組織DPD、Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于癌旁正常組織（P＜0.05）。結(jié)腸癌組織DPD、Ki-67表達(dá)與性別、年齡、腫瘤大小、分化程度無(wú)關(guān)（P＞0.05），與pTNM分期和浸潤(rùn)深度有關(guān)（P＜0.05）。結(jié)腸癌組織DPD、Ki-67的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.283，P＜0.05）。結(jié)論：DPD、Ki-67可能共同參與了結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，二者表達(dá)升高可能與結(jié)腸癌的不良預(yù)后有關(guān)。

二氫嘧啶脫氫酶；Ki-67；結(jié)腸癌

結(jié)腸癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，發(fā)病率呈逐年升高的趨勢(shì)。結(jié)腸癌患者早期常無(wú)特異性表現(xiàn)，確診時(shí)往往已屬中晚期，因此，積極尋找預(yù)測(cè)結(jié)腸癌生物學(xué)行為的標(biāo)志物對(duì)結(jié)腸癌的治療和評(píng)價(jià)預(yù)后具有重要意義。二氫嘧啶脫氫酶（DPD）是5-FU分解代謝的限速酶，與核酸的合成和分解代謝相關(guān)，多項(xiàng)研究表明，腫瘤組織中DPD水平與5-FU的抗癌效應(yīng)有密切關(guān)系，近年來(lái)成為消化道惡性腫瘤的研究熱點(diǎn)［1］。Ki-67是目前應(yīng)用最廣泛的增殖細(xì)胞標(biāo)志物之一，是檢測(cè)腫瘤增殖活性最可靠的指標(biāo)。本研究旨在檢測(cè)DPD、Ki-67在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)情況及二者的相關(guān)性，并探討二者在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的意義。

1　材料與方法

1.1一般資料 2011年1月-2012年12月保定市第一中心醫(yī)院經(jīng)外科手術(shù)切除并經(jīng)病理診斷的原發(fā)性結(jié)腸癌患者70例，均為腺癌。男38例、女32例，年齡28-83歲、中位年齡60歲；術(shù)前均未行放、化療及生物靶向治療等；按2010年美國(guó)聯(lián)合癌癥分類委員會(huì)（AJCC）制定的標(biāo)準(zhǔn)，患者TNM病理分期，Ⅰ-Ⅱ期49例，Ⅲ-Ⅳ期21例；高分化29例，中分化31例，低分化10例。取癌旁正常組織標(biāo)本30例（距腫瘤邊緣＞5cm的正常組織）作為對(duì)照。

1.2試劑 鼠抗人DPD單克隆抗體（1：150稀釋）、兔抗人Ki-67單克隆抗體（1：50稀釋），美國(guó)Abcam公司；通用免疫組織化學(xué)SP試劑盒和DAB顯色試劑，福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

1.3免疫組化染色 應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色SP二步法。DPD陽(yáng)性染色呈棕黃色顆粒，主要位于細(xì)胞質(zhì)；Ki-67陽(yáng)性染色呈棕黃色顆粒，主要位于細(xì)胞核。

1.4結(jié)果判定 染色切片在雙盲情況下由兩名病理科資深醫(yī)師觀察并評(píng)價(jià)結(jié)果。①每例每個(gè)指標(biāo)隨機(jī)觀察5個(gè)400倍高倍視野，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分率＜5%、5%-25%、26%-50%、51%-75%、＞75%分別計(jì)0、1、2、3、4分。②根據(jù)顯色強(qiáng)度，未著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別計(jì)0、1、2、3分。根據(jù)①×②判定最終結(jié)果：0-1分為（-）、2-4分為（+）、5-8分為（++）、9分以上為（+++），以（-）為陰性表達(dá)，（+）、（++）、（+++）為陽(yáng)性表達(dá)。

1.5統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，相關(guān)性行Spearman等級(jí)相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1結(jié)腸癌和癌旁組織DPD、Ki-67的表達(dá)情況 結(jié)腸癌組織DPD、Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于癌旁正常組織（P＜0.05）。見(jiàn)表1：

表1　結(jié)腸癌和癌旁組織DPD、Ki-67的表達(dá)

2.2DPD、Ki-67表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系 結(jié)腸癌組織DPD、Ki-67表達(dá)與性別、年齡、腫瘤大小、分化程度無(wú)關(guān)（P＞0.05）；與pTNM分期和浸潤(rùn)深度有關(guān)（P＜0.05）：Ⅲ-Ⅳ期明顯高于Ⅰ-Ⅱ期，T3、T4明顯高于T1、T2。見(jiàn)表2：

表2　DPD、Ki-67表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3結(jié)腸癌組織DPD、Ki-67表達(dá)的相關(guān)性 結(jié)腸癌組織DPD、Ki-67的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.283，P＜0.05）。見(jiàn)

表3：

表3　結(jié)腸癌組織DPD、Ki-67表達(dá)的相關(guān)性

3　討論

二氫嘧啶脫氫酶（DPD）是5-FU分解代謝起始階段的降解酶，在輔基NADPH的參與下，將5-FU還原為二氫氟尿嘧啶（FUH2），再經(jīng)二氫嘧啶酶打開(kāi)環(huán)狀結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生5-氟-β-酰脲丙酸（FUPA），最后在β-丙氨酸合成酶催化下，形成5-氟-β-丙氨酸（FBAL）經(jīng)腎臟排出體外［2］。5-FU進(jìn)入體內(nèi)后，80%以上在肝臟和其他組織中分解，而決定5-FU細(xì)胞毒性的合成代謝只占極少比例，作為5-FU分解過(guò)程的關(guān)鍵酶，DPD活性高低直接決定了5-FU進(jìn)入合成代謝和產(chǎn)生核苷酸類似物的量［3-5］。Ki-67是目前應(yīng)用最廣泛的增殖細(xì)胞標(biāo)志物之一，大量實(shí)驗(yàn)研究表明，Ki-67的表達(dá)主要定位于增殖期細(xì)胞核，可見(jiàn)于細(xì)胞周期的所有活動(dòng)階段（G1期、S期、G2期），它的表達(dá)與細(xì)胞周期及細(xì)胞生長(zhǎng)分?jǐn)?shù)密切相關(guān)，是檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖活性最可靠的指標(biāo)［6］。本研究采用免疫組化法檢測(cè)了結(jié)腸癌組織DPD、Ki-67的表達(dá)情況，結(jié)果顯示結(jié)腸癌組織DPD、Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于癌旁正常組織，TNM分期越晚、浸潤(rùn)深度越深，DPD、Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率越高；并且，結(jié)腸癌組織DPD、Ki-67的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，表明二者的陽(yáng)性表達(dá)與結(jié)腸癌的惡性程度和疾病進(jìn)展有著密切關(guān)系。

綜上所述，本研究提示，DPD、Ki-67可能與結(jié)腸癌組織核酸代謝亢進(jìn)以及結(jié)腸癌的不良預(yù)后有密切關(guān)系，聯(lián)合檢測(cè)結(jié)腸癌DPD、Ki-67蛋白的表達(dá)水平可能會(huì)有助于結(jié)腸癌的臨床診斷和預(yù)后判斷。

［1］Zhu AX， Puchalski TA， Stanton VP Jr， et al. Dihydropyrimidine dehydrogenase and thymidylate synthase polymorphisms and their association with 5-fl uorouracil/leucovorin chemotherapy in colorectal cancer［J］.Clin Colorectal Cancer，2004，3（4）:225-234.

［2］Mattison LK，Soong R，Diasio RB.Implications of dihydropyrimidine dehydrogenase on 5-fluorouracil pharmacogenetics and pharmacogenomics［J］.Pharmacogenomics，2002，3（4）:485- 492.

［3］Maring JG，van Kuilenburg AB，Haasjes J，et al.Reduced 5-FU clearance in a patient with low DPD activity due to heterozygosity for a mutant allele of the DPYD gene［J］.Br J Cancer， 2002，86（7）: 1028-1033.

［4］Etienne MC，Chatelut E，Pivot X，et al.Co-variables influencing 5-fluorouracil clearance during continuous venous infusion.A NONMEM analysis［J］.Eur J Cancer，1998，34（1）:92-97.

［5］Diasio RB， Beavers TL， Carpenter JT. Familial deficiency of dihydropyrimidine dehydrogenase. Biochemical basis for familial pyrimidinemia and severe 5-fluorour acil-induced toxicity［J］. J Clin Invest，1988，81（1）:47-51.

［6］Bruno S，Darzynkiewicz Z.Cell cycle dependent expression and stability of the nuclear protein detected by Ki-67 antibody in HL-60ceHs［J］.Cell Prolif，1992，25（1）:31-40.

EXPRESSIONS AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF DPD AND KI-67 IN COLON CANCER

AI Xiao-qing， JIA Xi-hua
(Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective: To investigate the expression and clinical signifi cance of dihydropyrimidine dehydrogenase（DPD） and Ki-67 in colon cancer. Methods: Immunohistochemical stain was used to detect the expression of DPD and Ki-67 in 70 cases colon cancer and 30 cases adjacent normal tissues， and the relationship between DPD， Ki-67 and clinicopathologic features of colon cancer was also analyzed. Results: The positive expression rate of DPD and Ki-67 in colon cancer were obviously higher than adjacent normal tissues （P＜0.05）. In colon cancer， the expression of DPD and Ki-67 was irrelevant to sex， age， size of tumour and differentiation degree （P＞0.05）； but related to pTNM stage and infi ltration depth（P＜0.05）. In colon cancer， the Ki-67 expression was positively related to DPD expression （r=0.283， P＜0.05）. Conclusions: DPD and Ki-67 maybe involve the development of colon cancer together， and their higher expression maybe concerned with poor prognosis of colon cancer.

DPD； Ki-67； Colon cancer

R735.3

A

1004-6879（2016）01-010-03

2015-07-28）