史春艷 王 舒 李福秋

(長(zhǎng)春市中心醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130051)

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CXCR4在皮膚基底細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義

史春艷 王 舒1李福秋1

(長(zhǎng)春市中心醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130051)

目的 研究CXCR4在皮膚基底細(xì)胞癌中的表達(dá)及其在皮膚基底細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 收集168例皮膚基底細(xì)胞癌組織、癌旁組織及癌旁正常組織標(biāo)本，應(yīng)用組織/細(xì)胞RNA快速提取試劑盒和RIPA裂解液分別提取組織RNA，制備組織蛋白。采用RT-PCR和Western印跡方法檢測(cè)CXCR4 mRNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)果 與癌旁正常組織對(duì)比，基底細(xì)胞癌和癌旁組織CXCR4 mRNA表達(dá)均顯著增加(P=0.003，0.027)，基底細(xì)胞癌組織CXCR4 mRNA的表達(dá)高于癌旁組織(P=0.037)；基底細(xì)胞癌和癌旁組織CXCR4蛋白的表達(dá)均顯著增加(P=0.005，0.025)，基底細(xì)胞癌組織CXCR4蛋白的表達(dá)高于癌旁組織(P=0.039)。結(jié)論 CXCR4在皮膚基底細(xì)胞癌組織中高表達(dá)，參與基底細(xì)胞癌的增殖、存活。

皮膚基底細(xì)胞癌；CXCR4

細(xì)胞趨化因子CXCL12通過(guò)其受體CXCR4誘導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)途徑，調(diào)控細(xì)胞的動(dòng)員、遷移、增殖及存活，從而參與胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化和器官重建。CXCR4不僅廣泛存在于正常組織細(xì)胞，在許多腫瘤組織也有表達(dá)，并且是過(guò)表達(dá)〔1〕。研究表明CXCR4與其特異性配體CXCL12結(jié)合形成CXCL12/CXCR4軸啟動(dòng)腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲、血管形成及誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移〔2〕。但是CXCR4在基底細(xì)胞癌的表達(dá)少有報(bào)道。本文通過(guò)檢測(cè)皮膚基底細(xì)胞癌BCC及其癌旁組織中CXCR4的表達(dá)，探討B(tài)CC發(fā)病的分子機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本收集 收集吉林大學(xué)第二醫(yī)院2012年12月至2015年6月168例皮膚BCC患者癌組織、癌旁組織及癌旁正常組織標(biāo)本，男98例，女70例，年齡35～80歲，平均63.1歲，所選樣本均經(jīng)過(guò)病理明確診斷。

1.2 試劑 組織/細(xì)胞RNA快速提取試劑盒(廣州美基生物技術(shù)有限公司)、反轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京鼎國(guó)生物技術(shù)有限公司)、TaqDNA聚合酶、M-MLV、Olig(dT)、RNA酶抑制劑、dNTP、DM2000(寶生物工程(大連)有限公司)、兔抗人CXCR4多克隆抗體(武漢三鷹生物技術(shù)有限公司)、抗兔的二抗HRP-IgG、ECL化學(xué)發(fā)光顯色液(上海七海復(fù)泰生物技術(shù)有限公司)。CXCR4引物：上游：5′-AGCTGTTGGTGAAAAGGTGGTCTATG-3′，下游：5′-GCGCTTCTGGTGGCCCTTGGAG-3'，擴(kuò)增片段260 bp。β-actin引物：上游：5′-CGGGAAATCGTGCGTGAC-3′，下游：5′-TGGAAGGTGGACAGCGAGG-3′，擴(kuò)增片段434 bp。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

1.3 方法

1.3.1 RT-PCR檢測(cè)CXCR4 mRNA的表達(dá) 稱取20 mg組織充分研磨后，用試劑盒提取組織總RNA，紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度。取1 μg RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)體系：M-MLV 1 μl，Olig(dT)1 μl，RNA酶抑制劑 0.5 μl，dNTP 1 μl，RNAse free water補(bǔ)足至20 μl。37℃孵育60 min。取1 μl cDNA，配制PCR反應(yīng)體系：10×PCR緩沖液2.5 μl，dNTP 1 μl，上、下游引物各1 μl，Taq DNA Polymerase 0.25 μl，ddH2O補(bǔ)足至25 μl。按94℃ 1 min；94℃ 30 s，56℃ 30 s，72℃ 30 s，30個(gè)循環(huán)；72℃ 5 min的條件進(jìn)行PCR。1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物，凝膠成像系統(tǒng)下觀察并照相。應(yīng)用Quantity one軟件分析CXCR4和β-actin基因PCR產(chǎn)物，計(jì)算mRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.3.2 Western印跡檢測(cè)CXCR4的表達(dá) 用RIPA裂解液裂解組織制備蛋白，12%SDS-PAGE電泳后轉(zhuǎn)膜1.5 h，4℃封閉過(guò)夜。加1∶500稀釋的兔抗人CXCR4多克隆抗體37℃孵育1 h，TBST洗3次，再加抗兔的二抗HRP-IgG(1∶1 000)37℃孵育1 h，PBS洗三次，ECL顯色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0軟件行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 皮膚基底細(xì)胞癌組織CXCR4 mRNA的表達(dá) 與癌旁正常組織對(duì)比，基底細(xì)胞癌和癌旁組織CXCR4 mRNA的表達(dá)均顯著增加(P=0.003，0.027)，基底細(xì)胞癌組織CXCR4 mRNA的表達(dá)高于癌旁組織(P=0.037)，見圖1。

2.2 皮膚基底細(xì)胞癌組織CXCR4蛋白的表達(dá) 與癌旁正常組織對(duì)比，基底細(xì)胞癌和癌旁組織CXCR4蛋白的表達(dá)均顯著增加(P=0.005，0.025)，基底細(xì)胞癌組織CXCR4蛋白的表達(dá)高于癌旁組織(P=0.039)，見圖2。

1.DNA marker(DM2000);2.癌旁正常組織;3.癌旁組織;4.癌組織圖1 CXCR4 mRNA在皮膚基底細(xì)胞癌組織的表達(dá)

圖2 CXCR4蛋白在皮膚基底細(xì)胞癌組織的表達(dá)

3 討 論

紫外線照射包括太陽(yáng)輻射、電離輻射(包括放射治療、原子彈爆炸)及免疫抑制劑的應(yīng)用等是皮膚BCC發(fā)生的高危因素，因此，其發(fā)病率具有年齡特點(diǎn)，發(fā)病部位多位于皮膚暴露處。絕大多數(shù)患者的早期治療是有效的，局部療法如手術(shù)切除、放療、局部用藥或光動(dòng)力療法可以防止BCC進(jìn)展〔3〕。但是，手術(shù)和放療又成了復(fù)發(fā)的高危因素〔4〕。Epstein〔5〕研究發(fā)現(xiàn)BCC的Hedgehog(Hh)信號(hào)傳導(dǎo)途徑異常活躍，其中PTCH1和SMO蛋白的突變最常見。SMO的抑制劑vismodegib于2012年和2013年分別獲得FDA和EMA的批準(zhǔn)，已進(jìn)入Ⅱ期臨床試驗(yàn)〔6，7〕。

越來(lái)越多的證據(jù)表明，趨化因子不只通過(guò)刺激免疫系統(tǒng)誘導(dǎo)抗腫瘤，還通過(guò)直接影響腫瘤轉(zhuǎn)化、存活、增殖及遷移、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移而激活腫瘤細(xì)胞〔8〕。因此，CXCR4/CXCL12相互作用指導(dǎo)

CXCR4+的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移至特定的位點(diǎn)，如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、腎癌、前列腺癌和神經(jīng)母細(xì)胞瘤〔9〕。腫瘤內(nèi)部處于低氧，低氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1α上調(diào)，可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞上的CXCR4高表達(dá)，使表達(dá)CXCR4的腫瘤細(xì)胞可優(yōu)先擴(kuò)散至CXCL12高表達(dá)的組織，如肺、肝臟、淋巴結(jié)和骨髓〔10〕。除了趨化性，CXCL12結(jié)合于CXCR4誘導(dǎo)特異的信號(hào)通路并啟動(dòng)與增殖和存活相關(guān)的細(xì)胞級(jí)聯(lián)反應(yīng)，增加細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平，參與基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控〔11〕。

本研究證實(shí)了BCC癌組織高表達(dá)CXCR4，提示CXCR4參與了BCC癌的增殖、存活。

1 Liekens S，Schols D，Hatse S，etal.CXCL12-CXCR4 axis in angiogenesis，metastasis and stem cell mobilization〔J〕.Curr Pharm Des，2010；16(35)：3903-20.

2 Teicher BA，F(xiàn)ricker SP.CXCL12(SDF-1)/CXCR4 pathway in cancer〔J〕.Clin Cancer Res,2010；16(11)：2927-31.

3 Rubin AI，Chen EH，Ratner D.Basal-cell carcinoma〔J〕.N Engl J Med,2005；353(21)：2262-9.

4 Telfer NR，Colver GB，Morton CA.British association of dermatologists.Guidelines for the management of basal cell carcinoma〔J〕.Br J Dermatol,2008；159(1)：35-48.

5 Epstein EH.Basal cell carcinomas：attack of the hedgehog〔J〕.Nat Rev Cancer,2008；8：743-54.

6 Dreno B，Kunstfeld R，Grob JJ，etal.Vismodegib，a Hedgehog pathway inhibitor，in advanced basal cell carcinoma：an interim analysis of the STEVIE study in 500 patients〔C〕.11th International Congress of the Society for Melanoma Research,2014.

7 Sekulic A，Migden MR，Oro AE，etal.Efficacy and safety of vismodegib in advanced basal-cell carcinoma〔J〕.N Engl J Med,2012；366(23)：2171-9.

8 Lombardi L，Tavano F，Morelli F，etal.Chemokine receptor CXCR4：role in gastrointestinal cancer〔J〕.Crit Rev Oncol Hematol,2013；88(3)：696-705.

9 Meads MB，Hazlehurst LA，Dalton WS.The bone marrow microenvironment as a tumor sanctuary and contributor to drug resistance〔J〕.Clin Cancer Res,2008；14(9)：2519-26.

10 Schioppa T，Uranchimeg B，Saccani A，etal.Regulation of the chemokine receptor CXCR4 by hypoxia〔J〕.J Exp Med,2003；198(9)：1391-402.

11 Roland J，Murphy BJ，Ahr B，etal.Role of the intracellular domains of cxcr4 in sdf-1-mediated signaling〔J〕.Blood,2003；101(2)：399-406.

〔2015-11-19修回〕

(編輯 李相軍)

李福秋(1963-)，女，主任醫(yī)師，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事真菌性皮膚病臨床研究。

史春艷(1963-)，女，主任醫(yī)師，主要從事抗皮膚老化研究。

R73

A

1005-9202(2016)20-4980-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.20.017

1 吉林大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科