孫芳，李文雙，滕艦，林淑華，于鵬飛

1.煙臺市煙臺山醫(yī)院腎內(nèi)科，山東煙臺　264000；2.山東省萊陽市結核病防治所內(nèi)科，山東萊陽　265200；3.煙臺毓璜頂醫(yī)院呼吸內(nèi)科，山東煙臺　264000

狼瘡腎炎患者循環(huán)miRNA表達譜研究及循環(huán)miR-130b-3p的臨床意義

孫芳1，李文雙2，滕艦1，林淑華1，于鵬飛3

1.煙臺市煙臺山醫(yī)院腎內(nèi)科，山東煙臺264000；2.山東省萊陽市結核病防治所內(nèi)科，山東萊陽265200；3.煙臺毓璜頂醫(yī)院呼吸內(nèi)科，山東煙臺264000

目的 研究探討狼瘡腎炎患者外周循環(huán)miRNA表達變化及其可能存在的臨床意義，為狼瘡腎炎的臨床治療提供更多的客觀依據(jù)。方法 方便選取2013年9月—2015年9月于該院診治的50例狼瘡腎炎患者，同時另選同期于該院體檢的50名健康者作為對照組。在100例研究對象中隨機選取15例患者做循環(huán)miRNA的表達譜檢測篩選（檢測組），85例患者做循環(huán)miRNA的表達譜驗證篩選（驗證組），同時應用循環(huán)miR-130b-3p為驗證對象，觀察與比較狼瘡腎炎患者與對照組患者的血清總RNA水平及檢測組中兩組患者的血清miRNA水平、驗證組中miR-130b-3p的水平，并進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析及相關性分析。結果 在驗證組中，與對照組相比較（3.7±1.6）ng/μL，狼瘡腎炎組患者的循環(huán)血清中miR-130b-3p的表達水平（9.8±1.4）ng/μL顯著上升，其差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；在檢測組中，與對照組相比較（28.6±2.4）ng/μL，狼瘡腎炎組患者循環(huán)表達的miRNA水平（46.8±5.6）ng/μL明顯上升，其差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論 狼瘡腎炎患者循環(huán)miRNA表達水平可能隨著腎功能的進一步下降而出現(xiàn)表達下調，其循環(huán)miR-130b-3p的表達與腎臟功能、血脂水平呈現(xiàn)明顯的相關性，這在狼瘡腎炎的疾病發(fā)生發(fā)展中可能起著重要的作用。

狼瘡腎炎；miRNA；miR-130b-3p；表觀遺傳調節(jié)

狼瘡腎炎（Lupus Nephritis,LN）是一種繼發(fā)于系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的自身免疫性疾病，是SLE臨床上常見的、多發(fā)的并發(fā)癥，其在SLE患者中發(fā)病率高達80%左右?；荚摬『笠蚱渚哂卸嗥鞴偈芾鄣奶攸c，故嚴重影響患者的日常生活質量，給患者帶來極大的負擔[1]。目前，該病的治療主要以免疫抑制劑及糖皮質激素為主，雖然能在一定程度上改善患者的癥狀及其預后，但仍有不少患者的治療效果不甚滿意，進而并發(fā)慢性腎衰竭[2-3]。因此，早期診斷、早期治療、積極改善預后是治療本病的關鍵。該研究方便選取該院2013年9月—2015年9月于該院診治的50例狼瘡腎炎患者，同時另選同期于該院體檢的50名健康者作為對照組，此100例患者為該研究入選研究對象。通過對LN患者及部分健康者的血清標本應用PCR技術檢測miRNA并進行比較分析，以研究探討循環(huán)中miRNA作為狼瘡腎炎的新型生物標志物的可行性，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

方便選取2013年9月—2015年9月于該院診治的50例狼瘡腎炎患者，均符合狼瘡腎炎的診斷標準[4]及該研究的納入標準及排除標準；同時另選同期于該院體檢的50名健康者作為對照組。在100例研究對象中隨機選取15例患者做循環(huán)miRNA的表達譜檢測篩選（檢測組），85例患者做循環(huán)miRNA的表達譜驗證篩選（驗證組），同時應用循環(huán)miR-130b-3p為驗證對象。對照組組中男性25例，女性25例，年齡為（40.6±9.3）歲；狼瘡腎炎組患者男性30例，女性20例，年齡為（41.9± 9.4）歲。兩組研究對象在性別、年齡等一般性資料上比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），組間具有可比性。該研究已通過該院臨床研究倫理委員會批準。

1.2方法

1.2.1血清標本采集所有研究對象均抽取空腹靜脈血3～5 mL，離心機離心15 min（3 000 r/min），于-20℃環(huán)境下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2血清總RNA提取應用miRNA試劑盒并依據(jù)其說明書操作步驟對研究對象的血清標本進行檢測，并記錄數(shù)據(jù)。

1.3觀察指標

觀察與比較狼瘡腎炎患者與對照組患者的血清總RNA水平及檢測組中兩組患者的血清miRNA水平、驗證組中兩組患者的血清miR-130b-3p的水平。

1.4統(tǒng)計方法

研究中各項數(shù)據(jù)均應用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學處理。計量資料以均數(shù)±標準差表示，符合正態(tài)分布及方差齊性，則組間比較采用單因素方差分析，否則采用非參數(shù)檢驗。對miRNA表達量及相關臨床指標等相關數(shù)據(jù)采用Spearman相關分析。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1血清總RNA表達水平比較

與對照組相比較，狼瘡腎炎組患者循環(huán)表達的miRNA水平明顯下降，其差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1　兩組患者血清總RNA表達水平比較[，ng/μL]

表1　兩組患者血清總RNA表達水平比較[，ng/μL]

注：與對照組比較，*P＜0.05。

組別血清總RNA表達水平對照組（n=50）狼瘡腎炎組（n=50）t P 30.6±2.5（19.4±2.6）*1.135＜0.05

2.2檢測組中兩組患者的血清miRNA表達譜分析比較

在檢測組中，與對照組相比較，狼瘡腎炎組患者循環(huán)表達的miRNA水平明顯上升，其差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2　檢測組中miRNA表達水平比較[，ng/μL]

表2　檢測組中miRNA表達水平比較[，ng/μL]

注：與對照組比較，*P＜0.05。

組別血清miRNA表達水平對照組（n=7）狼瘡腎炎組（n=8）t P 28.6±2.4（46.8±5.6）* 1.027＜0.05

2.3驗證組中兩組患者的血清循環(huán)miR-130b-3p分析比較

在驗證組中，與對照組相比較，狼瘡腎炎組患者的循環(huán)血清中miR-130b-3p的表達水平顯著上升，其差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表3。

表3　驗證組中miR-130b-3p表達水平比較，ng/μL]

表3　驗證組中miR-130b-3p表達水平比較，ng/μL]

注：與對照組比較，*P＜0.05。

組別　血清miR-130b-3p表達水平對照組（n=43）狼瘡腎炎組（n=42）t P 3.7±1.6（9.8±1.4）*0.156＜0.05

2.4患者的循環(huán)miR-130b-3p的表達與相應指標間的相關性分析

狼瘡腎炎患者的循環(huán)miR-130b-3p的表達與腎臟慢性活動指數(shù)、24 h尿蛋白含量及血清甘油三酯水平均呈現(xiàn)明顯的正相關（r＝0.201，0.319，0.346，P＜0.05）。

3　討論

該研究基于表觀遺傳學，對狼瘡腎炎患者血清中異常表達的miRNA進行PCR分析，研究結果顯示狼瘡腎炎患者的血清總RNA水平和含量較正常健康人是明顯下降的，其差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），表明狼瘡腎炎患者廣泛存在循環(huán)miRNA的表達下調。這一結果與王萬鵬等[5]研究結果基本一致，其中可能的原因與狼瘡腎炎患者的慢性腎功能受損存在一定的關系。因在臨床實際中，狼瘡腎炎患者的腎功能是逐漸惡化進展的，在此過程中出現(xiàn)的循環(huán)miRNA水平表達下降或與腎功能密切相關，但具體病理機制尚不十分明確。miR-130b-3p最初多見于腫瘤類相關研究報道中，如張科等[6]研究指出miR-130b-3p能抑制某些基因的表達，參與腫瘤的早期轉移過程，很大程度上影響了腫瘤的進展及治療預后。因此，在miR-130b-3p的后續(xù)多項相關研究報道中，將其作為疾病診療過程中的生物學標志，指導疾病的診治。而在該研究中，研究結果顯示狼瘡腎炎患者的循環(huán)miR-130b-3p較正常健康人是顯著升高的（P＜0.05），且與患者的腎臟慢性活動指數(shù)、24 h尿蛋白含量及血清甘油三酯水平均呈現(xiàn)明顯的正相關，表明循環(huán)miR-130b-3p的高表達可能參與了狼瘡腎炎的疾病進程，同時對狼瘡腎炎的早期診斷具有一定的參考價值，并能預測預后，這一結果與相關文獻報道基本一致[7-8]。

綜上所述，狼瘡腎炎患者循環(huán)miRNA表達水平可能隨著腎功能的進一步下降而出現(xiàn)表達下調，其循環(huán)miR-130b-3p的表達與腎臟功能、血脂水平呈現(xiàn)明顯的相關性，這在狼瘡腎炎的疾病發(fā)生發(fā)展中可能起著重要的作用。

[1]任義樂，馮學兵，鄒耀紅，等.狼瘡腎炎患者的臨床特點及預后分析[J].中華醫(yī)學雜志，2014，94（13）：973-976.

[2]王萬鵬，王玲，車霞靜，等.微小RNA-130b-3p通過抑制ERBB2IP和PPARγ表達促進腎小管上皮細胞轉分化[J].中華腎臟病雜志，2015，31（12）：932-935.

[3]王彬，楊敏，李旻，等.他克莫司和環(huán)磷酰胺治療狼瘡腎炎的Meta分析[J].中華腎臟病雜志，2013，11（3）：210-213.

[4]魏玉翠，列才華，黃海，等.狼瘡腎炎的病理和免疫學指標及臨床相關性分析[J].臨床腎臟病雜志，2014，11（10）：98-100.

[5]王萬鵬，張敏芳，王玲，等．狼瘡腎炎患者循環(huán)miRNA表達譜研究及循環(huán)miRNA-130b-3p的臨床意義[J].中華腎臟病雜志，2015，4（6）：302-308.

[6]張科,邱茜,廖兢業(yè)，等.甲氨蝶呤聯(lián)合環(huán)孢素A治療難治性狼瘡腎炎的臨床療效[J].實用醫(yī)學雜志,2013,29(13): 2192-2194.

[7]許嶸,鐘一紅,丁小強，等.外周血Th17/Treg和白細胞介素17與狼瘡腎炎臨床病理的相關性研究[J].中華腎臟病雜志,2014,30(4):247-253.

[8]溫曉宏,鄭毅,陳珊珊，等.中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白單核細胞趨化蛋白-1及腫瘤壞死因子樣凋亡的微弱誘導劑在狼瘡腎炎中的臨床意義[J].中華風濕病學雜志, 2013,17(9):611-615.

Research on the Expression Profiling of Circulating miRNA and Clinical Significance of Circulating miR-130b-3p for LN Patients

SUN Fang1,LI Wen-shuang2,TENG Jian1,LIN Shu-hua1,YU Peng-fei3
1.Nephrology Department,Yantai Mountain Hospital of Yantai City,Yantai,Shandong Province,264000 China;2.Tuberculosis Control and Prevention of Laiyang City,Shandong Province,Internal Medicine,Laiyang，Shandong Province,265200 China;3.Yuhuangding Hospital of Yantai City,Respiratory Medicine,Yantai，Shandong Province,264000 China

Objective To study the clinical expression and significance of circulating miRNA and provide more objective basis in the treatment of LN(Lupus Nephritis).Methods Convenient selection 50 LN patients treated from September 2013 to September 2015 in our hospital were selected.50 healthy check-ups were selected as control group.15 subjects were randomly selected to receive the detection of circulating miRNA expression profiling(detection group);85 subjects 3p was the verification object;Observation and comparison of lupus nephritis patients and the control group of patients and the serum levels of total RNA and detecting group in two groups of patients with serum miRNA levels,the validation group miR-130b-3p level,and data statistical analysis and correlation analysis Results In the validation group,and control group comparison(3.7±1.6)ng/μL,significantly increased the expression levels of miR-130b-3p of circulating serum in patients with lupus nephritis(9.8±1.4)ng/μL,the difference has statistical significance(P＜0.05).In the test group,compared with the control group(28.6±2.4)ng/μL,miRNA levels(46.8±5.6)μg/uL were significantly increased in patients with lupus nephritis, and the difference was statistically significant(P＜0.05).Conclusion For LN patients,the expression of circulating miRNA may be degraded with the lower renal function.The expression of circulating miR-130b-3p has an obvious correlation with renal function and blood lipid level,which it plays an important role in the genesis of LN.

the verification of circulating miRNA expression profiling(verification group);at the same time,the circulating miR-130b-

LN;miRNA;miR-130b-3p;Epigenetic regulation

R5

A

1674-0742（2016）10（c）－0001-03

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.30.001

煙臺市科技計劃發(fā)展項目（2013WS237）。

孫芳（1983.1-），女，山東煙臺人，碩士，主治醫(yī)師，主要從事腎臟病的研究工作。

于鵬飛（1981.2-），男，山東青島人，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：呼吸系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)疾病，E-mail:42246967 @qq.com。

（2016-07-28）