程濤，沈紅，邱學芳

昭通市第一人民醫(yī)院病理科，云南昭通　657000

P16表達在宮頸上皮內(nèi)病變中的診斷價值

程濤，沈紅，邱學芳

昭通市第一人民醫(yī)院病理科，云南昭通657000

目的 探討p16蛋白表達在宮頸上皮內(nèi)病變中的診斷價值。方法 方便選取云南省昭通市第一人民醫(yī)院2004—2015年間的宮頸標本180例作為研究對象，采用免疫組化SP法檢測180例宮頸良性病變及宮頸上皮內(nèi)病變中p16蛋白的表達，并對其表達和意義進行分析。結(jié)果 宮頸良性病變中p16表達率為0%，LSIL中p16表達率為45%且多為點灶狀表達并主要局限于中間及表層，HSIL中p16表達率100%且多為帶狀強陽性表達，各組之間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)論p16可以作為宮頸良性病變、LSIL及HSIL之間鑒別診斷的一個有用的標記物。

宮頸上皮內(nèi)病變；p16；診斷

在女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之中，宮頸癌居首位，發(fā)病率9.98/10萬，30～50歲是發(fā)病高峰年齡，死亡的高峰為50～70歲，在中國地區(qū)農(nóng)村高發(fā)病率高于城市，山區(qū)地區(qū)高于平原地區(qū)。在以前使用的是宮頸上皮內(nèi)腫瘤（CIN）的診斷術(shù)語來診斷宮頸鱗狀細胞癌的癌前病變，分為三級，分別簡稱為CIN1、CIN2和CIN3，這種診斷方式在第3版WHO分類（2003年）提出后，已經(jīng)使用了10多年。第4版WHO（2014年）的女性生殖系統(tǒng)腫瘤分類中，宮頸鱗狀細胞癌前病變使用鱗狀上皮內(nèi)病變（SIL）來命名，只分為低級別鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)及高級別鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)兩類[1]。近些年以來國際和國內(nèi)使用了一種新的分子標記物，就是使用免疫組織化學染色的方法在宮頸組織中檢測p16有無過度表達，來作為HPV感染引起的細胞周期失調(diào)的整合標記物。該研究選取2004—2015年該院宮頸標本180例為研究對象，旨在研究P16在宮頸上皮內(nèi)病變中的輔助診斷價值，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

方便選取云南省昭通市第一人民醫(yī)院2004—2015年間的宮頸標本180例，包括良性病變50例，LSIL 60例，HSIL 70例，所有病例均經(jīng)病理檢驗證實。

1.2方法

采用10%中性甲醛進行組織脫水固定，常規(guī)石蠟包埋，切片厚度在3～4 μm之間，免疫組化染色采用SP法，DAB顯色，陰性對照采用 PBS液 （0.01 mol/L，pH7.4）代替第一抗體作為對照，陽性對照用已知陽性組織切片對照。選用的P16單克隆抗體、SP試劑盒等相關(guān)試劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。所有實驗操作均嚴格按照說明書進行。

1.3結(jié)果判定

結(jié)果評價參照說明書，棕黃色顆粒視為P16陽性染色，隨機選取10個高倍視野，人工計數(shù)陽性細胞數(shù)量，＜30%為（+），30%～50%為（++），＞50%為（+++）。

1.4統(tǒng)計方法

使用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)，設定P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

從表1中可以看出p16在宮頸良性病變中均不表達，LSIL中p16陽性率達45%，主要為點灶狀表達并主要集中在中間及表層，HSIL中p16表達率達100%，且絕大部分為帶狀表達，各組之間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表1　p16在180例宮頸病變中的表達情況

3　討論

隨著社會的發(fā)展，在女性群體當中，宮頸癌已經(jīng)逐漸成為女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之中發(fā)病率最高的腫瘤，而且患者多為老年婦女，致死率較高，嚴重危害婦女的生命健康。為了更好地防范和治療宮頸癌，臨床上常常使用p16基因作為病情診斷的標記物，具有一定應用意義。在醫(yī)學上p16基因又稱p161NK4a、CDKN2及MTS1基因，是美國冷泉實驗室Kamb等于1994年發(fā)現(xiàn)的新的一種抗癌基因，它是一種重要的抑癌基因，是一種細胞周期中的基本基因，負調(diào)節(jié)細胞增殖及分裂，抑制CDK4的活性，從而抑制細胞由G1進入S期，對Rb基因控制的細胞增殖有負性調(diào)節(jié)。p16染色體定位在9p21上，是由2個內(nèi)含子及2個外顯子組成，它是細胞周期依賴激酶抑制子。正常情況下，p16通過對抑癌基因視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白（pRb）磷酸化過程的阻止，起到抑制細胞周期的進展的作用。當高危型HPV病毒蛋白與pRb結(jié)合，從而導致轉(zhuǎn)錄因子E2F的釋放，引起pRb依賴的p16表達上調(diào)。所以p16陽性被認為是存在高危HPV感染的替代性標志物，而應用于高級別上皮內(nèi)病變的輔助診斷中。相關(guān)報道已經(jīng)證實p16的異常甲基化能夠參與多種腫瘤細胞的增殖和發(fā)展[2]。Sano等[3]的研究顯示，p16能夠作為宮頸上皮內(nèi)瘤變的一個病理診斷標志物被應用于臨床。

由于宮頸良性病變和惡性變的處理方案完全不同，因此做好鑒別診斷，區(qū)分良性病變、LSIL及HSIL是個比較困難的問題。在第四版WHO分類（2014年）方案中也沒有簡單地將CIN2病變歸入到HSIL中，許多之前診斷的CIN2病變包含了部分的LSIL及部分的HSIL。近些年來的研究顯示：利用免疫組織化學染色檢測P16的表達情況，可以幫助區(qū)別兩者。按照美國陰道鏡與宮頸病理學會和美國病理學會的LAST項目研究，加做p16標記有助于對CIN進行更為準確的分級。對臨床較難處理的CIN1-CIN2宮頸標本，p16陽性時，可診斷為HSIL，判定為CIN2；p16陰性則可診斷為LSIL，判定為CIN1。LAST研究結(jié)果表明，p16的標記對提高診斷重復性具很好的作用，推薦以下幾種情況中使用p16標記：HSIL和容易混淆的非腫瘤性病變的鑒別，譬如不成熟性鱗狀上皮化生、萎縮、上皮修復性增生及人為假象；有爭議的CIN2；病理醫(yī)師之間診斷意見不同；組織學診斷為陰性，但細胞學陰道鏡提示有高級別病變可能，HPV檢測高危型病毒感染。通過該研究提示按照宮頸良性病變→LSIL→HSIL的順序，p16的表達也逐漸增高，組間對比差異有統(tǒng)計學意義，且表達方式逐漸由弱陽性轉(zhuǎn)為強陽性，說明p16的表達會隨著宮頸病變的惡性程度而升高，可以作為鑒別宮頸上皮內(nèi)瘤變的一個有效標志物。

綜上所述，當患者的病情加重的時候，p16的表達也逐漸增高，充分表現(xiàn)出宮頸病變的惡性程度的變化規(guī)律，因此p16可以作為宮頸良性病變、LSIL及HSIL之間鑒別診斷的一個有用的標記物，值得臨床上加以使用。

[1]沈丹華.解讀第4版WHO（2014）女性生殖系統(tǒng)腫瘤分類中宮頸癌前期病變的命名及分級變化[J].診斷病理學雜志,2015,22(3):129-132.

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[3]Sano T,Oyama T,Kashiwabara K,et al.Immunohistochemical overexpression of p16 protein associated with intact retinoblastoma protein expression in cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia[J].Pathol lnt,1998,48(8):580-585.

[4]劉彤,崔莉,許麗娟,等.p16、Ki-67蛋白表達及HPV檢測在宮頸上皮內(nèi)瘤變中的診斷意義[J].診斷病理學雜志,2009，16(5):343-345.

[5]張王亮.P16、Ki-67聯(lián)合半定量評分在宮頸上皮內(nèi)瘤變分級診斷中的應用及其HPV感染的關(guān)系[D].太原：山西醫(yī)科大學：2015.

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[7]張紅凱,杜強,嚴美申,等.Ki-67和p16在子宮宮頸病變中的表達及其協(xié)助診斷的意義[J].首都醫(yī)科大學學報,2008, 29(3):344-349.

[8]劉濤,何麗超,李竹琴.p16蛋白和Ki67抗原標記指數(shù)表達在宮頸上皮內(nèi)瘤變中的診斷價值[J].中國腫瘤臨床與康復,2013,2(2）：119-121.

Diagnostic Value of P16 Expression in Cervical Intraepithelial Lesions

CHENG Tao，SHENG Hong，QIU Xue-fang
Zhaotong City People's Hospital Department of Pathology,Zhaotong,Yunnan Province,657000 China

Objective To investigate the expression of p16 protein in cervical intraepithelial lesions diagnostic value. Methods Convenient from Zhaotong City of Yunnan Province in 2004 to 2015 the first people's Hospital cervical specimens of 180 cases as the research object,using immunohistochemistry SP method to detect the expression of 180 cases of benign cervical lesions and cervical intraepithelial lesion in p16 protein,and the expression and significance of analysis. Results Cervical benign lesions of p16 expression rate was 0%,the rate of p16 expression in LSIL is 45%and is focal point to express and largely confined to the middle and the surface,p16 expression in HSIL rate more than 100%and for ribbon strong positive expression,the significant difference between groups(P＜0.05).Conclusion P16 can be used as a differential diagnosis between cervical benign lesions,LSIL and HSIL a useful marker.

Cervical intraepithelial lesions;P16;Diagnosis

R737.33

A

1674-0742（2016）10（c）－0019-03

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.30.019

程濤（1974.12-），男，云南鎮(zhèn)雄人，本科，副主任醫(yī)師，研究方向：病理學。

（2016-07-26）