鄭菲，陳培瓊，王玉環(huán)

廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，福建廈門　361003

HE染色在臨床病理診斷中的應(yīng)用研究

鄭菲，陳培瓊，王玉環(huán)

廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，福建廈門361003

目的 探討臨床病理診斷中HE染色的應(yīng)用價值。方法 選取750張石蠟切片進(jìn)行研究，所有石蠟切片均源于該院病理科，時間在2013年2月—2016年2月，方便選擇其中的200個蠟塊制片給予重點觀察，比較病理技術(shù)改進(jìn)前后的HE染色結(jié)果。結(jié)果 胃鏡活檢、脂肪組織、骨組織改進(jìn)后HE染色結(jié)果分別為98.36%、97.67%、96.67%，明顯高于改進(jìn)前81.97%、79.07%、80.00%，病理技術(shù)改進(jìn)前后的HE染色結(jié)果對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論在病理診斷工作中，合格的HE切片是診斷的基石，病理科需要采取措施，促使HE染色技術(shù)得以提升，從而提高切片質(zhì)量，確保病理診斷的準(zhǔn)確性。

病理診斷；HE染色；應(yīng)用

病理診斷被臨床視為疾病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，其診斷準(zhǔn)確性會受到多種因素的影響，例如切片染色效果、處理質(zhì)量、操作人員的技巧等[1-2]。從實際的病理技術(shù)應(yīng)用情況上看，在操作過程中還存在很多問題，因受到標(biāo)本固定時間不合理因素的影響，導(dǎo)致組織脫水不徹底，對制片質(zhì)量產(chǎn)生了很大影響[3]。為了提高臨床病理診斷效果，醫(yī)院必須調(diào)整HE染色操作流程，對其進(jìn)行改進(jìn)，該文主要分析臨床病理診斷中HE染色的應(yīng)用價值，選取750張石蠟切片進(jìn)行研究 （2013年2月—2016年2月），現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取該院病理科的750張石蠟切片 （2013年2月—2016年2月）進(jìn)行研究，方便選擇其中的200個蠟塊制片，并給予重點觀察，其中肝膽4例、子宮6例、胃腸4例、子宮內(nèi)膜52例、胃鏡活檢61例、脂肪組織43例、骨組織30例。

1.2方法

HE染色：該次研究所選取的標(biāo)本均源于病理科，為了確保制片質(zhì)量，在取材時，操作人員必須參照取材操作規(guī)范操作，嚴(yán)禁取材又大又厚，影響組織脫水及制片。組織脫水、包埋、制片。HE染色具體操作方法：①切片在烤箱65℃烘烤15～30 min后入二甲苯脫蠟（3次），時間5 min/次。②梯度乙醇依次脫去二甲苯，乙醇濃度從無水乙醇-95%乙醇-85%乙醇-75%乙醇，約30 s/次,然后入自來水沖洗。③蘇木精染液染色，時間在5～10 min。④經(jīng)1%鹽酸酒精分化，給予水洗。⑤充分流水沖洗，時間在15 min以上，在這過程中，細(xì)胞核顏色會發(fā)生改變，直到變?yōu)樗{(lán)色則可停止。若核染色過深或過淺，則需給予再分化，或可選擇重新染色。⑥1%伊紅液染色，時間在30～60 s，然后，自來水略洗。使用85%乙醇、95%乙醇、95%乙醇、無水乙醇脫水，每次時間控制在30 s。⑦二甲苯透明，時間為1 min/次，共3次。⑧蓋片封片，將標(biāo)簽貼于相應(yīng)位置。改進(jìn)：病理科技術(shù)人員在實施HE染色操作流程中，關(guān)注可能出現(xiàn)的問題并找到根源，解決問題，制作合格的HE切片。

1.3觀察指標(biāo)

觀察病理技術(shù)改進(jìn)前后的HE染色結(jié)果，所有數(shù)據(jù)均由病理科工作人員提供，并給予比較。

1.4統(tǒng)計方法

采用SPSS 15.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)資料，計量資料采用t檢驗，用表示，計數(shù)資料采用χ2檢驗，用[n（%）]表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

在病理技術(shù)改進(jìn)前，HE染色結(jié)果還不夠理想，通過對病理技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)后，HE染色結(jié)果顯著改善。病理技術(shù)改進(jìn)前后的HE染色結(jié)果經(jīng)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

3　討論

在病理科中，常規(guī)組織染色質(zhì)量會對病理診斷結(jié)果產(chǎn)生很大影響，影響患者病情的判讀，可能導(dǎo)致病情被延誤，耽誤最佳的治療時機，不利于改善病患的病情。在HE染色過程中，細(xì)胞核染色質(zhì)量決定了HE染色質(zhì)量，所以配制合格、有效的染液對于病理科技術(shù)人員至關(guān)重要[4]。病理技術(shù)人員必須掌握各式常規(guī)切片所需染液的染色原理和配制。HE染色結(jié)果會受到很多因素的影響，其影響因素包括固定時間、取材、脫水、包埋，切片質(zhì)量，染色質(zhì)量。組織在送檢前，要先進(jìn)行固定，目的在于確?；铙w、組織兩者的形態(tài)、成分基本相似，并防止組織自溶現(xiàn)象的發(fā)生[5]。一旦組織原有結(jié)構(gòu)消失，或者受到損壞，則會導(dǎo)致制片質(zhì)量不佳，不利于患者病情的診斷。完成組織固定工作后，工作人員需于規(guī)定時間內(nèi)，將組織送至病理室受檢，一旦固定時間太長，便會致使組織變脆（或變硬），無法獲取理想的切片效果，從而導(dǎo)致診斷結(jié)果受到影響。

有研究表明[6]，在固定時，室溫需控制在25℃左右為宜，若處于低溫狀態(tài)下進(jìn)行固定，則需適度延長固定時間，浸泡固定法屬于比較常用的一種方法，醫(yī)院病理科可選用這種固定方式。所有的外檢組織，在沒有特殊情況的條件下，離體后立即固定10%中性福爾馬林固定液中。在送檢組織固定過程中，必須使用充足的固定液，一般情況下固定液量為組織的10倍以上，大標(biāo)本不少于總體積8倍[7]。大多數(shù)組織應(yīng)固定24 h以內(nèi)，最長不超過48 h。操作人員在取材時，必須制定明確的取材范圍，按照不同標(biāo)本類型進(jìn)行取材，同時選擇相應(yīng)的取材工具與方法，防止出現(xiàn)組織結(jié)構(gòu)擠壓的現(xiàn)象，否則會導(dǎo)致組織結(jié)構(gòu)發(fā)生變化?？刂迫〔拇笮『腿〔暮穸取Ｔ诠墙M織取材時，要及時給予脫鈣，降低制片難度。值得注意的是，脂肪組織比較特殊，取材不能過大、過厚，在制片時，需將脫水固定時間適度延長，否則會導(dǎo)致HE染色效果受到影響[8]。在該次研究中，所有操作均規(guī)范進(jìn)行。

病理科工作人員要制作出良好的切片，組織脫水是重要的環(huán)節(jié)。根據(jù)本科室工作特點設(shè)計一套脫水程序并且熟練自如的掌握是制片好壞的關(guān)鍵。組織的脫水不佳或者過度脫水會導(dǎo)致制片困難，影響HE染色結(jié)果。工作人員要定期更換脫水試劑，維護(hù)脫水機，以免影響組織脫水。良好的石蠟切片的制作也是影響HE染色的關(guān)鍵因素，一般石蠟切片的厚度3.5～4 μm，有特殊要求的組織可切2～3 μm。切片過厚或者過薄可導(dǎo)致HE染色細(xì)胞核不清晰，核漿對比不佳，從而影響診斷。

為了保證HE染色質(zhì)量，除了上述固定、脫水、包埋

表1　HE染色結(jié)果分析[n（%）]

和切片外，染色也是非常重要的。染色的重要性在于試劑，要做好試劑的質(zhì)量控制。工作人員要建立檔案，詳細(xì)記錄每天的染色數(shù)量，達(dá)到規(guī)定的染色片數(shù)時，更換液體。蘇木精染色液每天要過濾后使用，根據(jù)工作量，經(jīng)常添加或更換脫蠟用的二甲苯。保持液體的純凈度，定期更換分化液，脫水試劑。每日填寫染色質(zhì)控登記表，在HE染色中，工作人員還需合理選取試劑濃度，對濕度、溫度進(jìn)行有效控制，提高HE染色操作的有效性、合理性、科學(xué)性，遵循各項操作流程與規(guī)范，確保各項操作的準(zhǔn)確性，為患者病情的診斷提供更多信息。

董星杏[9]分析研究病理技術(shù)HE染色在病理診斷中的應(yīng)用，抽取病理科的800石蠟切片納入研究,觀察其中200例染色標(biāo)本的組織學(xué)質(zhì)譜，結(jié)果顯示，病理技術(shù)改進(jìn)前，骨組織、脂肪組織、胃鏡活體檢查、胃腸肝膽、子宮內(nèi)膜HE染色結(jié)果分別為80.0%、82.4%、88.9%、90.0%、85.7%，病理技術(shù)改進(jìn)后，骨組織、脂肪組織、胃鏡活體檢查、胃腸肝膽、子宮內(nèi)膜HE染色結(jié)果分別為90.0%、94.1%、97.2%、96.7%、100.0%，病理技術(shù)改進(jìn)以后的染色結(jié)果顯著優(yōu)于之前，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。通過該次研究發(fā)現(xiàn)，改進(jìn)病理技術(shù)后，切片質(zhì)量取得了明顯改善，胃鏡活檢、脂肪組織、骨組織改進(jìn)后HE染色結(jié)果分別為98.36%、97.67%、96.67%，明顯高于改進(jìn)前。與上述研究結(jié)論吻合，這表明在HE染色過程中，病理技術(shù)的應(yīng)用非常重要，醫(yī)院病理科需采取措施，促使HE染色技術(shù)提升，按照不同組織類型進(jìn)行針對性的固定、脫水等操作，有利于改善切片質(zhì)量，取得更好的病理診斷效果，從而提高患者病情診斷的準(zhǔn)確性，為其疾病治療提供依據(jù)。

[1]趙潔,任煒,于普燕，等.特殊染色及組織化學(xué)技術(shù)在病理診斷及科研中的應(yīng)用[J].齊魯醫(yī)學(xué)雜志,2013,28（5）:468-470.

[2]武巧伶,魏春娥,苗金紅.淺談HE染色方法在臨床病理診斷中的作用[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2013,11（29）:147-148.

[3]楊文英.病理技術(shù)HE染色在病理診斷中的應(yīng)用研究[J].大家健康：學(xué)術(shù)版,2014,9（10）:50-51.

[4]李玉蓮,袁宏偉,徐曉艷.剛果紅染色在臨床病理診斷中的應(yīng)用價值[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2014,45（7）:661-662.

[5]王巧.HE染色方法在臨床病理診斷中的應(yīng)用[J].臨床合理用藥雜志，2014,7（32）:118-119.

[6]王玉芳,徐曉艷,武彥.常用特殊染色在病理診斷中的應(yīng)用[J].實用醫(yī)技雜志,2013,20（12）:1357-1358.

[7]董星杏.病理技術(shù)HE染色在病理診斷中的應(yīng)用探討[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘,2016,16（34）:43-44.

[8]王俊生.探討HE染色方法在臨床病理診斷中的應(yīng)用價值[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘,2016,16（68）:144,149.

[9]董星杏.病理技術(shù)日E染色在病理診斷中的應(yīng)用探討[J].世界臨床醫(yī)學(xué),2016,16(34):43,45.

Study on the Application of HE Staining in the Diagnosis of Clinical Pathology

ZHENG Fei,CHEN Pei-qiong,WANG Yu-huan
Department of Pathology,the First Affiliated Hospital,Xiamen University,Xiamen,Fujian Province,361003 China

Objective To explore the application value of clinical and pathological diagnosis of HE staining.Methods Convenient selection a total of 750 pieces paraffin sections were studied.All paraffin sections were source in the Department of pathology of our hospital,during February 2013 to February 2016,select one of the 200 block of wax production given key observation,comparing the improved pathology technique before and after he staining results.Results Endoscopic biopsy, adipose tissue and bone tissue of the improved HE staining results were 98.36%,97.67%,96.67%,81.97%,79.07%was significantly higher than that before the improvement,80%,there was statistical significance comparing the pathological technique before and after the improvement of the results of HE staining(P<0.05).Conclusion In the pathological diagnosis,qualified tissue sections with hematoxylin and eosin(HE)is the cornerstone of diagnosis,pathology need to take measures to urge the hematoxylin and eosin(HE)staining technique can be improved,so as to improve the quality of sections, to ensure the accuracy of pathological diagnosis.

Pathological diagnosis;HE staining;Application

R446

A

1674-0742（2016）10（c）－0017-03

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.30.017

鄭菲（1975.5-），女，福建廈門人，大專，主管技師,主要從事病理技術(shù)等工作。

（2016-07-26）