王光慧++陳書英++肖衛(wèi)芬++韓秋峪

DOI：10.16658/j.cnki.1672-4062.2016.16.121

[摘要] 目的 探討腫瘤壞死因子α啟動因子基因多態(tài)性與妊娠期糖尿病間的關系。方法 選取孕婦150例，包括50例糖耐量異常孕婦、50例糖耐量正常孕婦，50例GDM孕婦；將這三組孕婦分別記為IGT組、NGT組、GDM組；通過采血提取DNA，應用聚合酶鏈反應----限制性片段長度多態(tài)性法，對其進行TNF-α基因啟動子-308位點的基因型分布頻率分析，從而對其多態(tài)性展開研究；結果 在NcoI酶切后，GA型出現(xiàn)，具體由3個片斷構成，分別為107bp、87bp、20bp；AA型出現(xiàn)，則表現(xiàn)為1個片斷，即107bp。GDM組A等位基因頻率（62%）顯著高于NGT組（28%），GA+AA型基因頻率高于NGT組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；在GA+AA基因型、A等位基因頻率表現(xiàn)方面，IGT組明顯高于NGT組，兩組數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。GDM 組與NGT組的血清TNF-α水平分別為（10.29±2.48）ug/L、（5.21±1.03）ug/L，比較兩組數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。GDM組與NGT組IR分別為（2.74±1.06）、（1.35±0.69），比較兩組數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。結論 GDM的發(fā)病后，TNF-α-308G/A基因多態(tài)性會發(fā)生相應的變化，從機制方面看，A等位基因在孕婦中會導致其體質(zhì)偏向肥胖，且提升其指數(shù)，該次研究發(fā)現(xiàn)，在這各情況下會發(fā)生胰島素抵抗現(xiàn)象，并且因其中的糖耐量遭到損害而引發(fā)GDM。

[關鍵詞] 腫瘤；妊娠；糖尿??；基因

[中圖分類號] R587.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-4062（2016）08（b）-0121-02

妊娠期是婦女的關鍵時期，從臨床經(jīng)驗來看，由于在妊娠前由于糖代謝穩(wěn)定或正常的情況下，會發(fā)生糖耐量異常情況；醫(yī)學將其命名為妊娠期糖尿病，這種疾病因其中的腫瘤壞死因子-α存在表達異?，F(xiàn)象，因此，往往會由此造成孕婦流產(chǎn)、早產(chǎn)等癥狀，是危害妊娠期婦女健康的重大隱患。因此，需要對其加強研究，從而找到解決對策[2]，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該次研究所選取徐州醫(yī)學院附屬醫(yī)院在2015年1月—2016年1月間收治的孕婦150例，其中，年齡從23～32歲，平均年齡（28.5±4.1）歲；孕周（31.2 ±4.60）周，平均年齡（28.2±1.2）歲；包括50例糖耐量異常孕婦、50例糖耐量正常孕婦，50例GDM孕婦；將這三組孕婦分別記為IGT組、NGT組、GDM組；三組患者均可排除感染因素、血液病因素，以及腫瘤或器官性的腎病因素等；對三組患者的基本資料進行統(tǒng)計學分析，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 標本采集 三組均禁食12 h，次日晨抽取肘靜脈血4 mL，加入0.5 mL乙二胺四乙酸抗凝劑抗凝，放置-80℃冰箱中儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 實驗方法 三組采集靜脈血4 mL，其中全血2 mL用TKM提取DNA，采用聚合酶鏈反應----限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）的方法，確定各組TNF-α基因啟動子-308位點的基因型分布頻率，確定其多態(tài)性。另2 mL血采用雙抗體夾心酶聯(lián)吸附試驗（ELISA）測定血清TNF-α水平，具體方法按說明書操作。以穩(wěn)態(tài)模型Homa-model公式評估IR。

1.2.3 診斷標準 GDM診斷標準按照2013年的美國糖尿病學會（American Diabetes Association， ADA）指南[3]。

1.3 統(tǒng)計方法

應用SPSS 19.0軟件操作系統(tǒng)進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，計量資料用（x±s）表示，計數(shù)資料用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，P<0.05差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 TNF-α啟動子PCR產(chǎn)物酶切后電泳結果

在NcoI酶切后，GA型出現(xiàn)，具體由3個片斷構成，分別為107bp、87bp、20bp；AA型出現(xiàn)，則表現(xiàn)為1個片斷，即107bp。

2.2 基因多態(tài)性的分布情況

150例孕婦子基因型、等位基因頻率GDM組A等位基因頻率（62%）顯著高于NGT組（28%），GA+AA型基因頻率（72%）也顯著高于NGT組（36%），差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；在GA+AA基因型、A等位基因頻率表現(xiàn)方面，IGT組明顯高于NGT組，兩組數(shù)據(jù)比較差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。具體如下表1所示。

2.3 GDM 組與NGT組的血清TNF-α水平

GDM 組與NGT組的血清TNF-α水平分別為（10.29±2.48）ug/L、（5.21±1.03）ug/L，比較兩組數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。（3）GDM組與NGT組IR分別為（2.74±1.06）、（1.35±0.69），兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。具體如下表2所示。

3 討論

3.1 TNF-α與GDM的相關性分析

目前認為GDM發(fā)病原因與胰島素抵抗、氧化應激、炎性反應等有關，更多學者認為GDM發(fā)病機制與 2 型糖尿病類似[4]，在GDM發(fā)病中，居于中心環(huán)節(jié)的是胰島素抵抗和胰島β細胞功能方面的障礙問題；以GDM孕婦為例，當其處于高糖刺激情況之下，會出現(xiàn)一定程度的應激反應，從而釋放出的TNF-α會在量上出現(xiàn)提升，這種不斷增加的TNF-α是造成胰島素抵抗不斷出現(xiàn)劇烈化的原因所在，而且，隨著這種抵抗的不斷加劇，也會參與到GDM病變之中，從發(fā)病之始到整個病程的不斷進展，皆會有其影響。在“炎癥-胰島素抵抗-GDM”這一病理生理過程中，脂肪細胞的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)功能障礙也起了重要作[5]。

TNF-α可作為GDM的預測因子，從廖丹的相關研究來看，已經(jīng)通過實際臨床實例研究印證了TNF-α在GDM中升高現(xiàn)象，也有效的說明了TNF-α可作為GDM的預測因子，因此，應該將其應用于復查相關疾病的一個條件或依據(jù)[6]。TNF-α導致IR的機制目前尚未明確，已有的研究認為可能與TNF-α影響胰島素受體后信號的傳導、降低胰島素敏感細胞水平、促進其他炎性細胞因子分泌增加，進而介導IR有關[7]。

該次研究結果表明，GDM的發(fā)病后，TNF-α-308G/A基因多態(tài)性會發(fā)生相應的變化，從機制方面看，A等位基因在孕婦中會導致其體質(zhì)偏向肥胖，且提升其指數(shù)，該次研究發(fā)現(xiàn)，在這各情況下會發(fā)生胰島素抵抗現(xiàn)象，并且因其中的糖耐量遭到損害而引發(fā)GDM[8-10]。

3.2 TNF-α啟動子-308G/A 基因的多態(tài)性與GDM的相關性分析

TNF-α存在多個多態(tài)位點，不同的基因型可以產(chǎn)生不同的蛋白，基因多態(tài)性影響TNF-α基因產(chǎn)物的表達，進而影響正常孕婦對于糖尿病的易感性及患糖尿病的嚴重程度[11]。

從臨床研究分析，高度的個體差異是TNF-α分泌的顯著表現(xiàn)，這有力的體現(xiàn)出基因多態(tài)性與其存在關聯(lián)性；以目前的研究結果為例遺傳對IR的作用影響已經(jīng)成為了IR的候選因素，并且可以明確的得到TNF基因在其中存在影響這一事實；通過對大量研究熱點的統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，TNF-α基因啟動子/增強子上游308處是重點，尤其是在其影響多態(tài)性得等位基因方面，很有說服力；另一方面，當定義TNF1的常見基因型為G和定義為TNF2 的少見基因型為A時，這種定義也對其熱點研究方面的影響因素進行了有效說明[12]。

另外，老年人的糖尿病與TNF-α啟動子-308G/A基因多態(tài)性相關，多顯現(xiàn)為2型糖尿病[13]。根據(jù)常穎等人的研究結果，可以認識到在TNF-α水平、胰島素抵抗指數(shù)方面，GDM組高于對照組，在GA+AA基因型出現(xiàn)頻率方面、與A等位基因出現(xiàn)頻率方面，也是如此；而且，GA+AA基因型出現(xiàn)頻率的對比研究，也證實了A等位基因出現(xiàn)頻率高于對照組[14]。

根據(jù)該次研究的結果來看，當TNF-α啟動子-308G/A基因多態(tài)性后，也是造成GDM發(fā)生的重要因素，另一方面，當孕婦攜帶A等位基因時，也表明其發(fā)生了糖耐量受損，甚至嚴重時可能發(fā)生糖尿病癥狀；在最為理想的情況下，即使妊娠期不發(fā)病，患2型糖尿病的機會也比攜帶GG基因型的人高。

綜上所述，GDM的發(fā)病后，TNF-α-308G/A基因多態(tài)性會發(fā)生相應的變化，從機制方面看，A等位基因在孕婦中會導致其體質(zhì)偏向肥胖，且提升其指數(shù)，該次研究發(fā)現(xiàn)，在這各情況下會發(fā)生胰島素抵抗現(xiàn)象，并且因其中的糖耐量遭到損害而引發(fā)GDM。因此，進一步研究GDM孕婦TNF-α過度表達的分子機制，以TNF-α為靶點，通過藥物治療抑制其過度表達能夠為該方面的預防機制研究提供新的方向與途徑。

[參考文獻]

[1] 廖丹.妊娠期糖尿病合并妊高征患者hs-CRP、IL-6、TNF-α 檢測的臨床意義[J].海南醫(yī)學院學報， 2013， 19（12）： 1726-1729.

[2] Ulla Kampmann， Lene Ring Madsen， Gitte Oeskov Skajaa：Gestational diabetes： A clinical update[J]. World J Diabetes，2015，6（8）： S1065-1072.

[3] 閆洪超. 妊娠期糖尿病患者血清TNF-a濃度與空腹血糖水平的相關性研究. 中國醫(yī)師進修雜志，2006（29）：6-7.

[4] 閆洪超. 妊娠期糖尿病患者TNF-a變化的意義. 婦女保健，2006（21）：1475.

[5] 閆洪超. TNF-a在妊娠期糖尿病患者胎盤組織中表達的免疫組化研究臨床醫(yī)學，2006（26）：76.

[6] 常穎，牛秀敏.腫瘤壞死因子a啟動子基因多態(tài)性與妊娠期糖尿病的相關性研究[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2005，10（40）：676-678.

（收稿日期：2016-05-17）