岳思君，范紅麗，鄭 蕊，周 娟，蘇建宇

(寧夏大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，西部特色生物資源保護(hù)與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 銀川 750021)

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發(fā)狀念珠藻干旱脅迫響應(yīng)基因NfGR的克隆與鑒定

岳思君，范紅麗，鄭 蕊，周 娟，蘇建宇*

(寧夏大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，西部特色生物資源保護(hù)與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 銀川 750021)

該研究采用PCR技術(shù)，從發(fā)狀念珠藻細(xì)胞中克隆了谷胱甘肽還原酶(glutathione reductase，GR)基因，命名為NfGR，其開放閱讀框長1 374 bp，編碼458個(gè)氨基酸，蛋白相對分子量為49.42 kD，理論等電點(diǎn)為5.49。氨基酸序列分析表明，NfGR蛋白具有NADPH結(jié)合位點(diǎn)超家族(NADB-Rossmann superfamily )和吡啶氧化還原酶二聚體超家族(Pyr_redox_dim superfamily) 2個(gè)結(jié)構(gòu)域，與點(diǎn)形念珠藻(Nostocpunctiforme)的相似性達(dá)93%。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明，NfGR與點(diǎn)形念珠藻處在同一進(jìn)化枝上，親緣關(guān)系較近。qRT-PCR表達(dá)分析表明，在不同濃度PEG-6000處理下，NfGR基因均保持上調(diào)表達(dá)，其中，PEG-6000濃度為8%時(shí)，NfGR基因的相對表達(dá)量達(dá)到峰值(32.69)。研究推測，谷胱甘肽還原酶可能參與了發(fā)狀念珠藻對干旱脅迫過程的響應(yīng)。

發(fā)狀念珠藻，谷胱甘肽還原酶，基因克隆，熒光定量PCR

發(fā)狀念珠藻(Nostocflagelliforme),又稱發(fā)菜，是生長在中國西北干旱和半干旱荒漠地區(qū)的陸生藍(lán)藻，是一種旱生藍(lán)藻類(blue-green algae)低等植物，有很強(qiáng)的耐干旱、耐低溫和耐輻射能力[1-2]。其固氮能力很強(qiáng)，是干旱荒漠區(qū)主要生物固氮資源。同時(shí)，發(fā)狀念珠藻還具有極高的食用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，其藻體內(nèi)含有豐富的膠質(zhì)和多種營養(yǎng)物質(zhì)，對改良荒漠化土壤結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)有一定作用，可為其他有益土壤微生物提供可利用的碳源和氮源。因此，發(fā)狀念珠藻在干旱荒漠區(qū)具有十分重要的生態(tài)學(xué)意義。目前研究最多的是發(fā)狀念珠藻的生理生化、分布、生態(tài)、顯微結(jié)構(gòu)、生長發(fā)育、營養(yǎng)成分和人工栽培等方面[3-7]，對發(fā)菜的生物學(xué)特性有了一定的認(rèn)識(shí)，但分子方面的研究尚屬起步階段，從分子水平研究其耐逆及適應(yīng)機(jī)制、尋找其生長發(fā)育規(guī)律以及實(shí)現(xiàn)發(fā)狀念珠藻人工培養(yǎng)，多年來一直是研究者關(guān)注的熱點(diǎn)[8-9]。

還原型谷胱甘肽(GSH)作為一種水溶性、小分子量的抗氧化劑，它是細(xì)胞中主要的非蛋白巰基庫，是細(xì)胞中維持正常氧化還原狀態(tài)的重要組成部分，參與許多重要的生理生化過程。植物細(xì)胞的葉綠體、細(xì)胞質(zhì)、線粒體等細(xì)胞區(qū)域都含有較高濃度的谷胱甘肽[10]。植物體內(nèi)細(xì)胞的多種生理生化反應(yīng)都可產(chǎn)生活性氧(reactive oxygen species，ROS)。正常生長條件下，植物細(xì)胞中 ROS 維持在較低的水平，然而，極端溫度、高鹽、強(qiáng)光照、重金屬、紫外光輻射、O3和SO2、機(jī)械損傷等環(huán)境脅迫可引起ROS的大量增加，若不及時(shí)清除，會(huì)對植物細(xì)胞產(chǎn)生嚴(yán)重傷害。植物體內(nèi)存在清除ROS的抗氧化系統(tǒng)，其中谷胱甘肽還原酶(glutathione reductase，GR)是谷胱甘肽抗氧化系統(tǒng)的主要酶之一。它在NADPH存在的情況下，催化氧化型谷胱甘肽(GSSG) 還原成還原型谷胱甘肽(GSH)，以對抗氧化脅迫。防止GSSG和其它二硫化合物的積累，對細(xì)胞膜、核酸、脂類、血紅蛋白和酶的穩(wěn)定是必需的[11-12]。因此GR對GSH的再生以保持正常的 GSH/GSSG 比例，維持植物細(xì)胞的氧化還原平衡有重要意義，在植物抗氧化系統(tǒng)乃至整個(gè)生長發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用[13]。此外，GR對抗壞血酸的循環(huán)再生也是不可缺少的，GR通過參與植物抗壞血酸谷胱甘肽循環(huán)(AsA-GSH cycle)，并與超氧化物歧化酶(SOD)等酶系統(tǒng)相互作用，共同清除植物體內(nèi)多余的 ROS，能夠增強(qiáng)植物對干旱、鹽、低溫和病害等脅迫的抵御能力。大量研究已經(jīng)表明，在植物的細(xì)胞質(zhì)、葉綠體、線粒體以及溶酶體中均有GR的活性[14-17]，而且GR活性會(huì)在非生物逆境環(huán)境下提高。岳川等[18]成功克隆了茶樹的谷胱甘肽還原酶的基因，推測其在茶樹抵抗逆境脅迫中起作用。朱守晶等[19]克隆了苧麻谷胱甘肽還原酶基因BnGR1，根據(jù)組織表達(dá)分析結(jié)果，推測其在減輕鎘脅迫對苧麻的毒害方面發(fā)揮作用。

研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)狀念珠藻中存在一個(gè)穩(wěn)定的保護(hù)系統(tǒng)，在抵抗極端的脅迫環(huán)境中協(xié)助SOD和過氧化氫酶(CAT)共同發(fā)揮重要作用，有關(guān) GR 基因的研究少見報(bào)道。本研究克隆發(fā)狀念珠藻NfGR基因的ORF序列，并對其編碼氨基酸的結(jié)構(gòu)進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測。同時(shí)，分析了PEG-6000脅迫下基因的逆境表達(dá)特性。以期為進(jìn)一步研究該基因在發(fā)狀念珠藻抗逆中的功能提供科學(xué)依據(jù)，對構(gòu)建抗旱轉(zhuǎn)基因工程菌的研究提供候選基因，有效地保護(hù)荒漠微生物基因資源。

1 材料和方法

1.1 材 料

實(shí)驗(yàn)材料為液體懸浮培養(yǎng)發(fā)狀念珠藻細(xì)胞，保存于寧夏大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院應(yīng)用微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，培養(yǎng)條件為25 ℃、80 r/min光照培養(yǎng)，生長培養(yǎng)基為BG11培養(yǎng)基。8 000 r/min離心收集藻細(xì)胞，保存于-80 ℃冰箱備用。

大腸桿菌(Escherichiacoli)DH5a感受態(tài)細(xì)胞、DNA Marker、TaqDNA 聚合酶、Protein MarkerⅢ、質(zhì)粒小提試劑盒、瓊脂糖凝膠回收試劑盒購自北京天根公司。pGEM?-T Easy 載體、T4 DNA 連接酶購自美國Promaga 公司。限制性內(nèi)切酶BamH I、HindⅢ購自美國Fermentas公司。引物合成及基因測序由上海生工生物工程公司完成。

1.2 方 法

1.2.1NfGR基因開放閱讀框的擴(kuò)增 取50 mg發(fā)狀念珠藻藻細(xì)胞，-80 ℃速凍，液氮研磨成粉末，采用CTAB法提取發(fā)狀念珠藻基因組DNA，電泳檢測DNA質(zhì)量。

根據(jù)發(fā)狀念珠藻基因組精細(xì)測序圖中GR基因的ORF序列設(shè)計(jì)引物GR-F(5′-CGCGGATCCATGACTTTTGATTACGACCT-3′，劃線部分為BamHⅠ酶切位點(diǎn))和GR-R(5′-CCCAAGCTTTTACCGCATTGTGACAAATT-3′，劃線部分為HindⅢ酶切位點(diǎn))。以發(fā)狀念珠藻總DNA 為模板，進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。擴(kuò)增條件為：94 ℃ 預(yù)變性5 min，94 ℃變性1 min，65 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，35個(gè)循環(huán)，72 ℃延伸10 min。目的片段經(jīng)回收、檢測并測序。

1.2.2NfGR基因的生物信息學(xué)分析 運(yùn)用生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫 NCBI、ExPASy、MEGA5.1 等軟件對發(fā)狀念珠藻NfGR基因編碼蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析。

1.2.3NfGR基因qRT-PCR分析 以發(fā)狀念珠藻RPL13基因?yàn)閮?nèi)參，進(jìn)行qRT-PCR檢測，分析NfGR基因的表達(dá)特性。NfGR基因上下游引物分別為GR-qF(5′-CCTTGAGCGTGAGTGG-3′)和GR-qR(5′-TCGGCATTGATGACGATTAC-3′)。RPL13基因上下游引物分別為RPL13-F(5′-TAGAGTTTGCCTGTATCAT-3′)和RPL13-R(5′-TCCGTGGTTTGTCATC-3′)。qRT-PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4 ℃預(yù)變性30 s；94 ℃變性5 s；50 ℃退火30 s；72 ℃延伸20 s，共45個(gè)循環(huán)。實(shí)驗(yàn)共設(shè)3個(gè)重復(fù)，利用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因相對表達(dá)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 NfGR基因的開放閱讀框(ORF)克隆

以發(fā)狀念珠藻基因組DNA為模板，GR-F 和GR-R 為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得1條1 350 bp左右的特異條帶(圖1)。將回收片段連接至pMD18-T載體, 轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞后進(jìn)行菌落PCR鑒定。

BamHI/HindⅢ雙酶切質(zhì)粒，得到2條帶，其中1條為1 350 bp左右的目的條帶(圖2)，與預(yù)期的擴(kuò)增片段大小一致 。將陽性克隆送至上海生工生物技術(shù)有限公司測序，由測序結(jié)果可知，NfGR基因的ORF長1 374 bp。

2.2 NfGR基因編碼蛋白的結(jié)構(gòu)分析

氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，NfGR基因ORF可編碼458個(gè)氨基酸殘基，預(yù)測分子量為49.42 kD。NfGR蛋白有2個(gè)結(jié)構(gòu)域(圖3)，分別是NADPH結(jié)合位點(diǎn)超家族(NADB-Rossmann superfamily)和吡啶氧化還原酶二聚體超家族(Pyr_redox_dim)，其中165～245氨基酸序列是吡啶二硫酸氧化還原酶的組分，345～458氨基酸序列是吡啶二硫酸核酸氧化還原酶二聚體結(jié)構(gòu)域，這些功能保守區(qū)的存在與谷胱甘肽還原酶的還原作用密切相關(guān)。

M. DL2000；N.陰性對照；1～2. PCR產(chǎn)物圖1 NfGR基因編碼序列的克隆M. DL2000；N. Negative control；1～2. PCR productFig.1 Cloning of the coding sequence of NfGR

M. Marker；1.HindⅢ 單酶切；2.未酶切質(zhì)粒；3～4.BamH I/ HindⅢ雙酶切圖2 NfGR基因陽性克隆質(zhì)粒酶切結(jié)果M. Marker；1. HindⅢ digested plasmid；2. Non-digested plasmid；3～4. BamHⅠ/ Hind Ⅲdigested plasmidFig.2 Enzyme digestion of NfGR gene cloned plasmid

圖3 NfGR蛋白保守結(jié)構(gòu)域Fig.3 Prediction of the conserved domains of NfGR

黑色表示序列完全相同，灰色表示部分相同，下劃線區(qū)為谷胱甘肽還原酶結(jié)構(gòu)域序列；NpGR、NspGR、HbGR、AvGR、ShGR、TcGR、StGR、DcGR、TbGR、AfGR、HspGR和NfGR分別為點(diǎn)形念珠藻、念珠藻、綿絲哈沙藻、多變魚腥藻、霍夫曼偽枝藻、彎曲單歧藻、單歧偽枝藻、彎曲長孢藻、鮑氏單歧藻、水華束絲藻、軟管藻和發(fā)狀念珠藻GR氨基酸序列圖4 谷胱甘肽還原酶氨基酸序列的多重比對Black area donates the same sequence，gray area donates partial matching，the underline marks domain sequences in GR proteins; NpGR, NspGR, HbGR, AvGR, ShGR, TcGR, StGR, DcGR, TbGR, AfGR, HspGR and NfGR represents amino acid sequence of GR from Nostoc punctiforme PCC 73102, Nostoc sp. PCC 7120, Hassallia byssoidea VB512170, Anabaena variabilis ATCC 29413, Scytonema hofmanni UTEXB 1581, Tolypothrix campylonemoides VB511288, Scytonema tolypothrichoides VB-61278, Dolichospermum circinale, Tolypothrix bouteillei VB521301, Aphanizomenonflos-aquae, Hapalosiphon sp. MRB220 and Nostoc flagelliforme，respectivelyFig.4 Multiple alignment of the deduced amino acids sequences of GR proteins

以NfGR基因編碼氨基酸序列為信息探針，用Blast程序檢索GeneBank的NR數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)，NfGR蛋白的氨基酸序列與已報(bào)道的其他物種GR蛋白氨基酸序列具有較高的相似性。與點(diǎn)形念珠藻(Nostocpunctiforme)的相似性最高，達(dá)到93%，與多變魚腥藻(Anabaenavariabilis)的相似性為86%，與綿絲哈沙藻(Hassalliabyssoidea)、霍夫曼偽枝藻(Scytonemahofmanni)、彎曲單岐藻(Tolypothrixcampylonemoides)相似性為85%，與水華束絲藻(Aphanizomenonflos-aquae)和軟管藻(Hapalosipnonsp.)相似性為80%，與卷曲長孢藻(Dolichospermumcircinale)相似性為79%。用ClustalX2.1軟件進(jìn)行多序列比對發(fā)現(xiàn)NfGR編碼氨基酸序列與其他物種有差異，但具有催化氧化還原反應(yīng)和結(jié)合GSSG、NAD的高度保守的區(qū)域(圖4)。

GOR4在線軟件預(yù)測發(fā)現(xiàn)，α-螺旋、β-片層和無規(guī)卷曲是 NfGR蛋白二級結(jié)構(gòu)的主要結(jié)構(gòu)元件(圖 5，A)。進(jìn)一步通過SWISS-MODEL 在線工具(http://swissmodel.expasy.org/)進(jìn)行建模分析，結(jié)果顯示這些α-螺旋、β-片層和無規(guī)卷曲通過延伸鏈連接折疊成對稱的三維空間結(jié)構(gòu)(圖 5，B)。

2.3 NfGR基因的系統(tǒng)進(jìn)化分析

采用MEGA 5.1軟件構(gòu)建發(fā)狀念珠藻GR蛋白系統(tǒng)進(jìn)化樹(圖6)。結(jié)果顯示，發(fā)狀念珠藻與點(diǎn)形念珠藻(Nostocpunctiforme)聚為一支，在進(jìn)化上親緣關(guān)系最近。彎曲單岐藻(Tolypothrixcampylonemoides)、軟管藻(Hapalosiphonsp.)、鮑氏單歧藻(Tolypothrixbouteillei)、單歧偽枝藻(Scytonematolypothrichoides)、綿絲哈沙藻(Hassalliabyssoidea)和霍夫曼偽枝藻(Scytonemahofmanni)為另一支，卷曲長孢藻(Dolichospermumcircinale)和水華束絲藻(Aphanizomenonflos-aquae)則聚為一支；念珠藻(Nostocsp.) 和多變魚腥藻(Anabaenavariabilis)聚為另外一支。

A. 二級結(jié)構(gòu)預(yù)測； B. 利用SWISS-MODEL建立的三維結(jié)構(gòu)圖5 NfGR蛋白的結(jié)構(gòu)分析和建模A. Secondary structure prediction;B. Three-dimensional structure based on SWISS-MODELFig.5 Structure analysis and modeling of NfGR

系統(tǒng)樹各分支上數(shù)字是Bootstrap 1 000次循環(huán)檢驗(yàn)的置信度；標(biāo)尺代表遺傳距離圖6 NfGR蛋白進(jìn)化樹分析The numbers on the tree branches represent Bootstrap confidence values as bootstrap is 1 000；The scale bar represents genetic distanceFig.6 Phylogenetic analysis of NfGR protein sequences

圖7 PEG-6000脅迫下NfGR基因的表達(dá)分析Fig.7 Expression analysis of NfGR gene under drought-stress of PEG-6000

2.4 干旱脅迫下NfGR基因表達(dá)分析

用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)，分析不同濃度PEG-6000模擬干旱處理下NfGR表達(dá)情況(圖7)。結(jié)果表明，相對于對照，NfGR基因在不同濃度PEG-6000處理下均保持上調(diào)表達(dá)。PEG-6000 濃度為2%時(shí)，NfGR基因受到誘導(dǎo)，表達(dá)量開始上升，當(dāng)PEG-6000 濃度為8%時(shí)，相對表達(dá)量為32.69，達(dá)到峰值。當(dāng)PEG-6000濃度為10%時(shí)，NfGR表達(dá)量下降，說明在高濃度PEG-6000脅迫下，細(xì)胞受到損傷嚴(yán)重，NfGR基因的表達(dá)受到抑制。

3 討 論

植物耐旱能力的形成是由多個(gè)基因協(xié)同參與形成的，耐逆性調(diào)節(jié)基因的上調(diào)表達(dá)在一定程度上提高了植物的耐逆能力。生物在生長過程中經(jīng)常會(huì)遭受到干旱脅迫，過度干旱脅迫會(huì)導(dǎo)致生物體內(nèi)ROS的代謝失衡，進(jìn)而對機(jī)體造成氧化損傷，如可引起蛋白質(zhì)、膜脂和其它細(xì)胞組分的損傷，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞及組織死亡。但在長期的進(jìn)化過程中，生物本身會(huì)產(chǎn)生一些保護(hù)機(jī)制來清除過多的ROS，一些抗氧化酶系統(tǒng)，包括GR、APX、CAT、SOD和PRX等在內(nèi)的完整的抗氧化防御體系，積極參與這一過程。

GR是植物細(xì)胞抗氧化酶系統(tǒng)中的一個(gè)重要蛋白，催化氧化型谷胱甘肽還原成還原型谷胱甘肽(GSH)，維持細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)的平衡，在植物抵抗非生物脅迫的環(huán)境中起到重要作用。GSH在減緩和清除由ROS、生物異源物質(zhì)及重金屬造成的環(huán)境氧化脅迫中起重要作用，GSH可有效還原-S-S-鍵，穩(wěn)定-SH族蛋白，使膜蛋白結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，保護(hù)酶結(jié)構(gòu)蛋白上的-SH，抵抗過氧化作用，充當(dāng)自由基的清除劑。植物GR同工酶存在于不同的亞細(xì)胞器中，如葉綠體、細(xì)胞質(zhì)、線粒體和過氧化物酶體等[20-24]。GR是受逆境脅迫表達(dá)的酶之一，在水分脅迫下，細(xì)胞器的抗氧化酶活性均表現(xiàn)為先升高后穩(wěn)定到一定水平，這表明植物細(xì)胞中各細(xì)胞器能夠協(xié)調(diào)抗氧化防護(hù)的能力。在氧化脅迫反應(yīng)中，GR通過活性的升高對清除活性氧起積極作用。Tanaka 等[25]證明干旱等逆境脅迫會(huì)引起菠菜 GR活性的提高。

發(fā)狀念珠藻是具有較強(qiáng)的耐旱能力的藍(lán)藻類低等植物，在水分脅迫下會(huì)引起一系列干旱誘導(dǎo)基因的表達(dá)，例如編碼一些功能蛋白和調(diào)節(jié)蛋白的基因，以保護(hù)細(xì)胞不受水分脅迫的傷害，來抵御環(huán)境脅迫。因此，選擇抗旱優(yōu)良基因，對基因功能進(jìn)行研究，從分子水平認(rèn)識(shí)發(fā)狀念珠藻對干旱環(huán)境脅迫的抗性機(jī)理顯得尤為重要。

發(fā)狀念珠藻NfGR基因的表達(dá)因受干旱脅迫發(fā)生了變化，即在脅迫初期活性氧濃度增加，抗氧化酶系統(tǒng)積極參與，NfGR 表達(dá)量開始增加；隨脅迫濃度增加，表達(dá)量達(dá)到峰值；但隨脅迫濃度繼續(xù)增加，細(xì)胞相關(guān)組分受到干旱傷害，以致NfGR基因表達(dá)量在高濃度PEG-6000模擬干旱脅迫時(shí)降低，這可能因?yàn)楦邼舛萈EG-6000模擬干旱增加了細(xì)胞生長環(huán)境的干旱程度，細(xì)胞內(nèi)成分因嚴(yán)重缺水而損傷，基因的表達(dá)呈下降趨勢。發(fā)狀念珠藻NfGR基因的表達(dá)量增加是對干旱脅迫的積極響應(yīng)，表明其在抵御外界干旱環(huán)境過程中發(fā)揮一定作用。有關(guān)受逆境脅迫時(shí)，NfGR 清除活性氧、參與跨膜運(yùn)輸和信號傳導(dǎo)的具體分子機(jī)理還需要深入的研究。

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(編輯:宋亞珍)

Cloning and Identification of Drought-stress Responsive Gene NfGR in Nostoc flagelliforme

YUE Sijun, FAN Hongli, ZHENG Rui, ZHOU Juan, SU Jianyu*

(College of Life Sciences, Ningxia University, Key Lab of Ministry of Education for Protection and Utilization of Special Biological Resources in Western China, Yinchuan 750021, China)

Glutathione reductase is one of enzymes participating in the oxidation reduction reaction in organisms, which plays an important role in the process of stress tolerance. As a kind of cyanobacteria,Nostocflagelliformepossesses strongly resistance to environment stresses，so it is meaningful to study the role of glutathione reductase in the resistant mechanism. In order to explore the biological functions of glutathione reductase in process of stress tolerance inN.flagelliforme, we cloned the complete open reading frame of the geneNfGR, and took a bioinformatics analysis of gene sequence. The ORF ofNfGRcontains 1 374 bp, encoding 458 amino acids, and its relative molecular weight and theoretical isoelectric point is 49.42 kD and 5.49, respectively. Amino acid sequence analysis showed that the protein NfGR has two domains of NADB-Rossmann superfamily and Pyr redox dim superfamily, and amino acid sequence of NfGR protein is similar to that ofNostocpunctiformewith similarity up to 93%. Phylogenetic tree reconstructed by neighbor joining method clearly showed that NfGR protein was classified into a subgroup withN.punctiforme, which suggested their close relationship. qRT-PCR result showed that the expressions ofNfGRgene were up-regulated under different concentrations of PEG-6000, and reached peak at 8% PEG-6000 concentration, with the relative expression level of 32.69. It is hypothesized that glutathione reductase may be involved in the response to stress resistance ofN.flagelliformeaccording to its expression characteristics.

Nostocflagelliforme; glutathione reductase; gene cloning; quantitative real-time PCR

1000-4025(2016)10-1955-07

10.7606/j.issn.1000-4025.2016.10.1955

2016-06-18;修改稿收到日期:2016-09-07

國家自然科學(xué)基金(31360025，31260023，31560418)；寧夏大學(xué)研究生創(chuàng)新項(xiàng)目(GIP201611)

岳思君(1972-)，男，博士，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事微生物學(xué)研究。E-mail: sijunyue@126.com

*通信作者:蘇建宇，博士，教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事微生物學(xué)研究。E-mail: su_jy@nxu.edu.cn

Q785; Q786

A