王 碩，劉萬鑫，杜榮斌，由翠榮，付學軍，梁麗琨

( 1.煙臺大學 生命科學學院，山東 煙臺 264005； 2.煙臺大學 海洋學院，山東 煙臺 264005 )

循環(huán)海水養(yǎng)殖系統(tǒng)中生物膜快速形成的模擬試驗

王 碩1，劉萬鑫1，杜榮斌2，由翠榮1，付學軍1，梁麗琨1

( 1.煙臺大學 生命科學學院，山東 煙臺 264005； 2.煙臺大學 海洋學院，山東 煙臺 264005 )

生物膜；快速形成；循環(huán)海水養(yǎng)殖

隨著科學技術(shù)的發(fā)展及人類生活水平的提升，僅從海洋捕撈獲得海產(chǎn)食品已遠不能滿足市場的需求，大規(guī)模工廠化海水養(yǎng)殖業(yè)，具有較高的經(jīng)濟利益和潛在價值。但是，大規(guī)模養(yǎng)殖業(yè)需消耗大量海水，污水中的有機物、氨氮和硝態(tài)氮，對養(yǎng)殖生物有害，直接排放使自然水體富營養(yǎng)化，嚴重破壞環(huán)境，浪費巨大的水資源[1]。

目前，工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)多采用生物法去除養(yǎng)殖污水中的氨氮、硝態(tài)氮及其他脅迫因子。一般是在養(yǎng)殖池外另安置生物濾池，生物濾池主要是應(yīng)用優(yōu)勢微生物附著在特定的載體上生長，通過自身的營養(yǎng)代謝來處理污水[2-5]。但生物除污法目前尚不成熟，存在一些瓶頸問題，如微生物在載體上的附著生長周期較長、處理效率不穩(wěn)定等[6]，亟需發(fā)展高效的工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖污水處理技術(shù)。

本試驗通過優(yōu)勢菌種掛膜法模擬工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖中污水處理過程，以確定加快生物膜形成的試驗室工作條件。

1 材料與方法

1.1 生物膜優(yōu)勢菌種

試驗所用菌種均為本實驗室保存，包括硝化細菌、反硝化細菌、芽孢菌屬(Bacillus)和動膠菌(Zoogloeaitzigsohn)。

1.2 生物膜載體

市售塑料彈性濾材、生化環(huán)。

1.3 人工污水配方

1.4 水質(zhì)指標測定

1.5 試驗裝置和基本條件

用市售20 L淘寶箱作為水箱模擬工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)的生物濾池，在其中安置循環(huán)泵和曝氣泵模擬工廠中的循環(huán)和充氧條件。向1個水箱中加入15 L人工污水，裝入體積約4.8 L的濾材作為生物膜載體[10]，置于平均溫度為21 ℃的室溫下運行，水力停留時間為1 h，曝氣量為3.0 L/min，每5 d檢測水質(zhì)pH，用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH保持在7.0以上[11]。循環(huán)培養(yǎng)21 d，以自然掛膜試驗為對照。

1.6 生物膜優(yōu)勢菌接種

分別培養(yǎng)生物膜優(yōu)勢菌株，向試驗水箱中接種0.45%生物膜優(yōu)勢菌株的混合菌液?；旌暇河上趸毦?、反硝化細菌、芽孢菌和動膠菌的菌液按照一定比例組成，稀釋10倍后，在600 nm波長下其平均吸光度值為0.6。每次接種后靜置24 h，然后啟動循環(huán)泵和曝氣泵[12]。

1.7 生物膜載體的選擇

向試驗水箱中分別加入生化環(huán)或塑料彈性濾材，每 5 d接種1次生物膜優(yōu)勢菌種的混合菌液，添加比例為硝化細菌∶反硝化細菌∶芽孢菌∶動膠菌1∶1∶1∶1，每3 d測定水箱中人工污水的水質(zhì)指標。

1.8 菌液混合比例對生物膜形成的影響

以塑料彈性濾材為生物膜載體，分別以硝化細菌:反硝化細菌∶芽孢菌∶動膠菌1∶1∶1∶1,2∶1∶1∶1,3∶1∶1∶1及4∶1∶1∶1的混合比例接種，每5 d接種1次，每3 d測定人工污水的水質(zhì)指標。

1.9 接種頻率對生物膜形成的影響

以塑料彈性濾材為生物膜載體，每5、7、10 d和15 d接種1次，優(yōu)勢菌混合比例為硝化細菌∶反硝化細菌∶芽孢菌∶動膠菌2∶1∶1∶1，每3 d測定人工污水的水質(zhì)指標。

1.10 成熟生物膜污水處理性能的測定

2 結(jié)果與分析

2.1 最佳生物膜載體的選擇

圖2 采用不同生物膜載體水體的變化

圖3 采用不同生物膜載體水體的變化

2.2 接種比例對生物膜形成的影響

圖4 不同接種比例時水體的變化

圖5 不同接種比例時水體的變化

圖6 不同接種比例時水體的變化

2.3 接種頻率對生物膜形成的影響

圖7 不同接種頻率下水體的變化

圖8 不同接種頻率下水體的變化

圖9 不同接種頻率下水體的變化

2.4 優(yōu)勢菌種掛膜與自然掛膜掛膜速度對比

條件優(yōu)化后的優(yōu)勢菌掛膜在第7 d已經(jīng)開始形成生物膜，第14 d生物膜基本形成，第21 d形成均勻的成熟生物膜(圖13)；而同時期進行的自然掛膜生物膜生長緩慢，在21 d內(nèi)無法形成完整成熟的生物膜。

圖10 優(yōu)勢菌種掛膜與自然掛膜水體的變化

圖11 優(yōu)勢菌種掛膜與自然掛膜水體的變化

圖12 優(yōu)勢菌種掛膜與自然掛膜掛膜水體的變化

圖13 優(yōu)勢菌種掛膜與自然掛膜掛膜生物膜生長情況

2.5 成熟生物膜污水處理性能

圖14 成熟生物膜對不同初始水體的處理效果

圖15 成熟生物膜對水體的處理效果

圖16 成熟生物膜對水體的處理效果

3 討 論

3.1 接種量與接種比例的選擇

3.2 成熟生物膜的污水處理效果

本試驗顯示，用塑料彈性濾材為生物膜載體時，生物膜形成速度，污水處理效果優(yōu)于生化環(huán)的結(jié)論一致：在生物濾池濾料掛膜及水處理中，彈性濾材的掛膜效果好于非彈性濾材[7]。

每7 d接種1次優(yōu)勢菌液時，水處理效果最好，優(yōu)勢微生物的混合菌液硝化細菌∶反硝化細菌:芽孢菌∶動膠菌接種比例為2∶1∶1∶1時，第7 d開始形成生物膜，第14 d生物膜基本形成，第21 d形成均勻完整的生物膜，此結(jié)論與王威等[19]在生物濾料的微生物掛膜研究中的塑料彈性濾材可以在28 d內(nèi)完成人工干預(yù)掛膜相似。

3.3 展望

本試驗結(jié)果適用于試驗室條件下的模擬試驗，為生物膜快速形成提供了新的思路，在實際海水養(yǎng)殖污水處理中的應(yīng)用，還有待進一步研究。

[1] 李俊龍，鄭炳輝，劉永，等.中國河口富營養(yǎng)化對營養(yǎng)鹽負荷的敏感性分類[J].中國科學，2015，45(4):455-467.

[2] 曹競，王琨.海洋硝化菌特性及其在海參養(yǎng)殖循環(huán)水處理中應(yīng)用研究[D].哈爾濱：哈爾濱工業(yè)大學，2012.

[3] 樓洪森，楊云龍，方明亮.高效低溫硝化細菌培養(yǎng)方法的研究[J].工業(yè)水處理，2013，33(2):42-44.

[4] 曾地剛，雷愛瑩，彭敏，等.枯草芽孢桿菌的分離和凈化水質(zhì)的研究[J].水利漁業(yè)，2007，27(6):55-56.

[5] 潘曉宏.動膠菌與其他微生態(tài)制劑對水質(zhì)改善的研究[J].農(nóng)民致富之友，2014，6(2):135-137.

[6] 張海耿，馬紹賽.生物濾池及人工濕地凈化工廠化海水養(yǎng)殖廢水效果研究[D].上海：上海海洋大學，2011.

[7] 曹涵，宋協(xié)法.循環(huán)水養(yǎng)殖生物濾池濾料掛膜及其水處理效果的研究[D].青島：中國海洋大學，2008.

[8] 許穎，高從堦.膜生物反應(yīng)器工藝中膜污染因素及控制研究[D].青島：中國海洋大學，2013.

[9] 國家海洋局.GB 12763.4-2007海洋調(diào)查規(guī)范第4部分：海水化學要素調(diào)查[S].北京：中國標準出版社，2007.

[10] 馬紹賽，曲克明，朱建新，等.海水工廠化循環(huán)水工程化技術(shù)與高效養(yǎng)殖[M].北京:海洋出版社，2014：65-99.

[11] 王峰.半滑舌鰨循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)優(yōu)化與養(yǎng)殖效果研究[D].青島：中國海洋大學，2013.

[12] 傅雪軍，馬紹賽，曲克明，等.循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中自然微生物生物膜形成過程試驗[J].海洋環(huán)境科學，2011，29(5):713-717.

[13] 余敦耀，邱雁臨，朱影.高效硝化細菌的分離與鑒定[J].化學與生物工程，2008，25(4):60-63.

[14] 岑世宏.影響硝化細菌養(yǎng)殖水污染處理的因素分析研究[J].環(huán)境科學與管理，2015，40(3):82-85.

[15] Shan H，Obbard J P.Ammonia removal from prawn aquaculture water using immobilized nitrifying bacteria [J].Appl Microbiol Biotechnol，2001，57(5):791-798.

[16] 蔡昌鳳，梁磊.高效好氧反硝化細菌的篩選及脫氮特性的研究[J].環(huán)境科學與技術(shù)，2011，34(1):41-44.

[17] 王曉翠.乳酸芽孢桿菌的分離、鑒定及菌制劑制備的研究[D].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學，2012.

[18] 劉天華，李樂樂，喬夢，等.一株海洋動膠菌D21的分離與鑒定[J].湖北農(nóng)業(yè)科學，2011，50(16):3276-3278.

[19] 王威，王海增，曲克明.海水循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中生物濾料的微生物掛膜與水處理效果研究[D].青島：中國海洋大學，2012.

[20] 張正，王印庚，曹磊.海水循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)生物膜快速掛膜試驗[J].農(nóng)業(yè)工程學報，2012，28 (15):157-162.

SimulationTestofRapidBiofilmFormationinaRecyclingAquacultureSysteminaLab

WANG Shuo1，LIU Wanxin1，DU Rongbin2，YOU Cuirong1， FU Xuejun1， LIANG Likun1

( 1.College of Life Science，Yantai University，Yantai 264005，China; 2.School of Ocean，Yantai University，Yantai 264005，China )

biofilm;rapid formation;recirculating aquaculture

10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.03.009

S969.38

A

1003-1111(2016)03-0244-06

2015-08-06；

2015-09-21.

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團隊項目(SDAIT-14-011-02)；山東省科技發(fā)展計劃項目(2013GNC11037，2013YD15011).

王碩(1989-)，女，碩士研究生；研究方向：微生物學.E-mail：1191820151@qq.com.通訊作者：梁麗琨(1966-)，女，副教授；研究方向：微生物資源和應(yīng)用.E-mail：liang6903103@sina.com.