耿玉聰，李紅壘，高學(xué)敏，李世峰，薛新新，楊奕，徐丁潔，徐洪，楊方

(1.華北理工大學(xué) 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究中心，河北 唐山 063000；2.華北理工大學(xué) 中醫(yī)學(xué)院，河北 唐山 063000)

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·論 著·

Ac-SDKP通過(guò)Gαs/Gαi-cAMP信號(hào)通路抑制矽肺大鼠肺纖維化

耿玉聰1，李紅壘1，高學(xué)敏1，李世峰1，薛新新1，楊奕1，徐丁潔2，徐洪1，楊方1

(1.華北理工大學(xué) 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究中心，河北 唐山 063000；2.華北理工大學(xué) 中醫(yī)學(xué)院，河北 唐山 063000)

目的：研究N-乙酰基-絲氨酰-天門冬氨酰-賴氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)與激動(dòng)型G蛋白(Gαs)/抑制型G蛋白(Gαi)-環(huán)磷酸腺苷(cAMP)信號(hào)通路的關(guān)系，探討Ac-SDKP抑制矽肺大鼠纖維化的作用及其機(jī)制。方法:采用一次性支氣管灌注SiO2構(gòu)建大鼠矽肺模型，并予以Ac-SDKP抗纖維化治療和預(yù)防治療。體外采用血管緊張素(Ang)Ⅱ誘導(dǎo)大鼠肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化，并予以Ac-SDKP、纈沙坦(valasrtan)和二丁酰環(huán)磷酸腺苷(db-cAMP)預(yù)處理。免疫熒光法檢測(cè)Gαs蛋白與波形蛋白(vimentin)在矽肺組織中的定位與表達(dá)，Western blot法檢測(cè)矽肺組織和Ang Ⅱ誘導(dǎo)的肌成纖維細(xì)胞中Gαs、Gαi、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(SMA)和Ⅰ型膠原表達(dá)，EIA試劑盒檢測(cè)cAMP活性。結(jié)果：與對(duì)照組相比，矽肺大鼠肺組織中Gαs和cAMP表達(dá)下調(diào)，而Gαi表達(dá)上調(diào)并伴隨α-SMA和Ⅰ型膠原表達(dá)升高(P<0.05)，Ac-SDKP抗纖維化治療和預(yù)防治療均可抑制該變化；同時(shí)體外研究發(fā)現(xiàn)Ac-SDKP、valsartan和db-cAMP預(yù)處理后可抑制Ang Ⅱ介導(dǎo)的Gαs和cAMP表達(dá)下調(diào)(P<0.05)，抑制肌成纖維細(xì)胞分化和細(xì)胞外基質(zhì)沉積。結(jié)論：Ac-SDKP通過(guò)調(diào)節(jié)Gαs/Gαi-cAMP信號(hào)抑制肌成纖維細(xì)胞分化，發(fā)揮抗矽肺大鼠肺纖維化的作用。

矽肺；肌成纖維細(xì)胞；N-乙?；?絲氨酰-天門冬氨酰-賴氨酰-脯氨酸；肺纖維化；環(huán)磷酸腺苷; 大鼠

矽肺病是我國(guó)最嚴(yán)重的職業(yè)病[1]，其以矽結(jié)節(jié)形成和間質(zhì)纖維化為主要病理特征。本課題組前期研究顯示，N-乙酰基-絲氨酰-天門冬氨酰-賴氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline，Ac-SDKP)具有拮抗矽肺大鼠肺纖維化的作用，蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)β2腎上腺素受體(ADRB2)-Gαs蛋白復(fù)合物(β2-adrenergic receptor-Gαsprotein complex，ADRB-Gαs)在矽肺模型組中表達(dá)下調(diào)，提示其可能與矽肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切[2]。研究表明，ADRB2能夠通過(guò)對(duì)激動(dòng)型Gα蛋白(stimulatory G protein α，Gαs)的調(diào)節(jié)，促進(jìn)腺苷酸環(huán)化酶(adenylyl cyclase，AC)表達(dá)上調(diào)，誘導(dǎo)cAMP的合成，進(jìn)而發(fā)揮拮抗器官纖維化的作用[3-4]。抑制型Gα蛋白(inhibitory G protein α，Gαi)偶聯(lián)信號(hào)的活化則抑制AC活性導(dǎo)致cAMP水平降低，產(chǎn)生與Gαs相反的生物學(xué)效應(yīng)[5]。已有研究顯示，cAMP能夠通過(guò)對(duì)血管緊張素(angiotensin，Ang)Ⅱ/轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor，TGF)-β1信號(hào)介導(dǎo)的促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)信號(hào)的調(diào)節(jié)，抑制成纖維細(xì)胞的增殖、肌成纖維細(xì)胞分化和膠原沉積，從而阻抑器官纖維化的進(jìn)展[6-7]。以往研究多關(guān)注于Ac-SDKP對(duì)促纖維化的阻斷作用，其能否通過(guò)對(duì)Gαs/Gαi-cAMP信號(hào)的調(diào)節(jié)，發(fā)揮抑制矽肺纖維化的作用，目前仍未所知。因此，本研究擬通過(guò)支氣管灌注SiO2構(gòu)建矽肺大鼠模型，結(jié)合體外Ang Ⅱ誘導(dǎo)的肌成纖維細(xì)胞分化模型，觀察Ac-SDKP對(duì)Gαs/Gαi-cAMP信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用，進(jìn)一步探討其抗纖維化作用的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 采用支氣管非暴露式一次性灌注SiO2構(gòu)建矽肺大鼠模型[1]

SPF級(jí)成年雄性Wistar大鼠60只(北京華阜康生物科技股份有限公司，SCXK京2009-0004)，體質(zhì)量(180±10) g，于華北理工大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心屏障實(shí)驗(yàn)室(SYXK冀2010-0038)飼養(yǎng)，自由食水，晝夜交替。對(duì)照組(4周及8周)：支氣管灌注生理鹽水1 ml+腹腔埋入2 ml生理鹽水微量緩釋泵，飼養(yǎng)4、8周后處理；矽肺組(4周及8周)：支氣管灌注含50 mg·ml-1SiO2的生理鹽水1 ml+腹腔埋入含2 ml生理鹽水的微量緩釋泵，飼養(yǎng)4、8周后處理。Ac-SDKP抗纖維化治療組：支氣管灌注含50 mg·ml-1SiO2的生理鹽水1 ml+腹腔埋入含2 ml生理鹽水的微量緩釋泵，4周后更換為含Ac-SDKP(800 μg·kg-1·d-1)的微量緩釋泵，繼續(xù)飼養(yǎng)至第8周處理。Ac-SDKP預(yù)防治療組：腹腔埋入含Ac-SDKP(800 μg·kg-1·d-1)的微量緩釋泵，48 h后支氣管灌注含50 mg·ml-1SiO2的生理鹽水1 ml，第8周處理。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

在體積分?jǐn)?shù)5%CO2、37 ℃條件下培養(yǎng)原代培養(yǎng)肺成纖維細(xì)胞[8]。取第2代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。對(duì)照組：無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基；Ang Ⅱ誘導(dǎo)組：給予Ang Ⅱ(10-7mol·L-1)誘導(dǎo)；Ac-SDKP干預(yù)組：Ang Ⅱ(10-7mol·L-1)誘導(dǎo)前1 h給予Ac-SDKP(10-8mol·L-1)預(yù)處理。纈沙坦(valsartan)干預(yù)組：空白培養(yǎng)基，Ang Ⅱ(10-7mol·L-1)誘導(dǎo)前1 h給予纈沙坦(10-6mol·L-1)預(yù)處理。二丁酰環(huán)磷酸腺苷(dibutyryl cyclic adenosine monophosphate，db-cAMP)干預(yù)組：空白培養(yǎng)基，Ang Ⅱ(10-7mol·L-1)誘導(dǎo)前1 h給予db-cAMP(10-4mol·L-1)預(yù)處理。

1.3 主要試劑

SiO2購(gòu)置于美國(guó)Sigma公司；波形蛋白(vimentin)兔單克隆抗體(Abcam公司)；α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(smooth muscle actin，α-SMA)兔單克隆抗體(Abcam公司)；Gαs鼠單克隆抗體(Santa Cruz公司)；Gαi兔多克隆抗體(Santa Cruz公司)；cAMP EIA試劑盒(Cayman公司)；Ⅰ型膠原(博士德公司)；GAPDH兔多克隆抗體(Santa Cruz公司);HRP標(biāo)記羊抗兔IgG(KPL公司)；HRP標(biāo)記羊抗鼠IgG(KPL公司)；ECL顯色試劑盒(GE Healthcare公司)。

1.4 免疫熒光法檢測(cè)Gsα蛋白和vimentin在矽肺組織中的差異定位與共表達(dá)

大鼠肺組織石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，血清封閉15 min，甩去血清后直接滴加Gsα/vimentin混合一抗(1∶200稀釋)，4 ℃過(guò)夜，次日加FITC/TRITC混合熒光二抗，37 ℃孵育1 h，甘油封片。Olympus圖像掃描系統(tǒng)采集圖像。

1.5 Western blot法檢測(cè)Gαs、Gαi、vimentin和Ⅰ型膠原在肺組織和Ang Ⅱ誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞中的表達(dá)

常規(guī)提取組織和細(xì)胞蛋白，經(jīng)考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白濃度后上樣(20 μg·泳道-1)，常規(guī)電泳和電轉(zhuǎn)。孵育一抗(1∶500)4 ℃過(guò)夜，加二抗(1∶5 000)37 ℃ 1 h后ECL發(fā)光顯色，采用Image-Lab 5.1軟件定量分析條帶，以相應(yīng)內(nèi)參的比值作為目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.6 EIA試劑盒檢測(cè)大鼠肺組織和Ang Ⅱ誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞中cAMP活性

成纖維細(xì)胞經(jīng)0.1 mol·L-1HCl預(yù)處理20 min，提取蛋白，1 000×g離心10 min，取上清用于檢測(cè)；冰凍組織稱量后加入5%的三氯乙酸(10 g·ml-1)，組織充分勻漿后以1 500×g離心10 min，加入飽和乙醚提取三氯乙酸蛋白混合液，提上清于新離心管中，加熱至70 ℃ 5 min，蒸發(fā)殘余乙醚。Bradford法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，以每孔50 μl加樣，設(shè)3個(gè)復(fù)孔，后續(xù)操作按EIA-cAMP試劑盒說(shuō)明書測(cè)定cAMP含量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 Ac-SDKP對(duì)矽肺大鼠Gαs、Gαi和cAMP表達(dá)的調(diào)節(jié)作用

免疫熒光結(jié)果所示，對(duì)照組4、8周大鼠的肺泡壁細(xì)胞中可見(jiàn)Gαs蛋白(紅色熒光)呈點(diǎn)狀陽(yáng)性表達(dá)，綠色熒光標(biāo)記的間質(zhì)表型標(biāo)志物vimentin亦有微弱表達(dá)(藍(lán)色熒光DAPI標(biāo)記細(xì)胞核)；矽肺模型組4、8周可見(jiàn)vimentin綠色熒光強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)于矽結(jié)節(jié)區(qū)域、間質(zhì)纖維化區(qū)域和肺泡壁增寬區(qū)域，較為特異性地標(biāo)記巨噬細(xì)胞和(肌)成纖維細(xì)胞，而Gαs蛋白則在矽結(jié)節(jié)和間質(zhì)纖維化區(qū)域表達(dá)缺失，在纖維化周邊正常肺泡壁細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)標(biāo)記Gαs的紅色熒光。與矽肺模型組8周相比，Ac-SDKP抗纖維化治療和預(yù)防治療組矽結(jié)節(jié)明顯減小，Gαs和vimentin陽(yáng)性表達(dá)特點(diǎn)與對(duì)照組和矽肺模型組較為一致，但染色強(qiáng)度和范圍明顯較少。見(jiàn)圖1。

Westernblot檢測(cè)矽肺大鼠肺組織Gαs、Gαi、cAMP和纖維化相關(guān)指標(biāo)α-SMA、Ⅰ型膠原表達(dá)，結(jié)果(表1、圖2)顯示，與對(duì)照組4、8周相比，Gαs和cAMP在矽肺模型組表達(dá)明顯減少，其中Gαs下調(diào)至相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組的25.68%和10.60%，cAMP下調(diào)至34.38%和11.25%；Ac-SDKP抗纖維化治療和預(yù)防治療后Gαs表達(dá)分別上調(diào)為矽肺模型組8周的8.88倍和9.44倍，cAMP分別上調(diào)為4.78倍和4.67倍。α-SMA、Ⅰ型膠原和Gαi表達(dá)在矽肺模型組分別較相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組上調(diào)，其中α-SMA、Ⅰ型膠原和Gαi在矽肺4周組表達(dá)是對(duì)照4周組的3.48倍、1.96倍和3.45倍，矽肺模型組8周α-SMA、Ⅰ型膠原和Gαi表達(dá)是對(duì)照組8周的3.92倍、1.53倍和4.34倍。而Ac-SDKP抗纖維化治療和預(yù)防治療組α-SMA分別下調(diào)為矽肺模型組8周的27.45%和33.99%，Ⅰ型膠原分別下調(diào)為矽肺模型組8周的37.68%和56.52%，Gαi在Ac-SDKP抗纖維化治療和預(yù)防治療組表達(dá)分別是矽肺模型組8周的34.54%和32.12%。以上結(jié)果經(jīng)方差分析，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

EIA結(jié)果(圖2)顯示cAMP在矽肺模型組4、8周表達(dá)分別為對(duì)照組的37.85%和37.20%，而Ac-SDKP抗纖維化治療和預(yù)防治療后，cAMP表達(dá)為矽肺模型組8周的1.48倍和1.56倍，經(jīng)方差分析，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 Ac-SDKP在Ang Ⅱ誘導(dǎo)的肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過(guò)程中對(duì)Gαs/Gαi-cAMP信號(hào)的調(diào)節(jié)作用

Westernblot結(jié)果(圖2，表2)顯示，AngⅡ誘導(dǎo)組與對(duì)照組相比vimentin、Ⅰ型膠原和Gαi表達(dá)分別上調(diào)了2.22倍、2.16倍和17.88倍，給予Ac-SDKP、valsartan和db-cAMP預(yù)處理后與AngⅡ誘導(dǎo)組相比，Ⅰ型膠原的表達(dá)分別下調(diào)了68.52%、74.07%和62.96%，α-SMA的表達(dá)分別是AngⅡ誘導(dǎo)組的60.0%、58.33%和58.33%，Gαi表達(dá)在Ac-SDKP、valsartan和db-cAMP預(yù)處理表達(dá)被別下降為AngⅡ誘導(dǎo)組的76.92%、63.63%和42.66%，經(jīng)方差分析，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

C4.對(duì)照組4周；S4：矽肺模型組4周；C8：對(duì)照組8周；S8：矽肺模型組8周；Ac-post：Ac-SDKP抗纖維化治療組；Ac-pre：Ac-SDKP預(yù)防治療組

圖1 vimentin和Gαs在矽肺大鼠肺組織中的定位和表達(dá)(免疫熒光染色 ×400)

C4.control 4 weeks; S4:silicosis 4 weeks; C8:control 8 weeks; S8:silicosis 8 weeks; Ac-post:Ac-SDKP post-treatment; Ac-pre:Ac-SDKP pre-treatment

Fig 1 The co-expression of vimentin and Gαsin lung tissue of silicotic rats(immunofluorescence ×400)

表1 Ac-SDKP對(duì)矽肺大鼠肺內(nèi)Gαi、Gαs、α-SMA和Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)

Tab 1 The effect of Ac-SDKP on regulating Gαi，Gαs，α-SMA and collagen type Ⅰ in silicotic rats

組 別n相對(duì)表達(dá)量GαiGαsα-SMAⅠ型膠原對(duì)照組4周40.48±0.271.48±0.240.42±0.110.48±0.08矽肺模型組4周41.70±0.29a0.38±0.13a1.46±0.22a0.94±0.08a對(duì)照組8周40.38±0.201.51±0.200.39±0.090.45±0.10矽肺模型組8周41.65±0.26b0.16±0.07b1.53±0.42b0.69±0.39bAc-SDKP抗纖維化治療組40.57±0.29c1.42±0.16c0.42±0.09c0.26±0.09cAc-SDKP預(yù)防治療組40.53±0.34c1.51±0.21c0.52±0.12c0.39±0.15cF值19.22149.70727.6866.557

與對(duì)照組4周比較，aP<0.05；與對(duì)照組8周比較，bP<0.05；與矽肺模型組8周比較，cP<0.05

與對(duì)照組4周比較，aP<0.05；與對(duì)照組8周比較，bP<0.05；與矽肺模型組8周比較，cP<0.05。與對(duì)照組比較，dP<0.05；與Ang Ⅱ誘導(dǎo)組比較，eP<0.05

圖2 Gαs、Gαi、cAMP、α-SMA和Ⅰ型膠原在肺組織和Ang Ⅱ誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞中的表達(dá)

Compared with control 4 weeks group，aP<0.05; compared with control 8 weeks group，bP<0.05; compared with silicosis 8 weeks group，cP<0.05.Compared with control group，dP<0.05; compared with Ang Ⅱ treatment group，eP<0.05

Fig 2 The expression of Gαs，Gαi，cAMP，α-SMA and collagen type Ⅰ in lung and in fibroblasts induced by Ang Ⅱ

EIA結(jié)果(圖2)顯示，Ang Ⅱ誘導(dǎo)組cAMP表達(dá)下調(diào)至對(duì)照組的50.26%，而Ac-SDKP、valsartan和db-cAMP預(yù)處理組與Ang Ⅱ誘導(dǎo)組相比cAMP表達(dá)上調(diào)了1.69倍、1.48倍和1.55倍，經(jīng)方差分析，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

Ac-SDKP能夠調(diào)節(jié)cAMP活化的交換蛋白(exchange protein directly activated by cAMP，Epac)信號(hào)，發(fā)揮抑制矽肺大鼠肌成纖維細(xì)胞分化和膠原沉積的作用[9]。然而，Ac-SDKP是否能夠活化cAMP信號(hào)并發(fā)揮相應(yīng)的抗纖維化作用，目前仍未所知。根據(jù)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果[10]，本研究采用vimentin標(biāo)記矽結(jié)節(jié)和間質(zhì)纖維化區(qū)域，觀察Gαs蛋白的表達(dá)特點(diǎn)和范圍，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Gαs蛋白可陽(yáng)性表達(dá)于結(jié)節(jié)周邊及正常的肺泡壁細(xì)胞中，而在vimentin強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)的矽結(jié)節(jié)內(nèi)Gαs幾乎無(wú)表達(dá)，提示其在矽結(jié)節(jié)及間質(zhì)纖維化區(qū)域中的缺失表達(dá)可能與矽肺纖維化的形成有關(guān)。Western Blot結(jié)果也顯示在矽肺大鼠模型中Gαs蛋白、cAMP含量表達(dá)下調(diào)，伴隨Gαi、α-SMA和Ⅰ型膠原表達(dá)上調(diào)，提示矽肺發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中可能伴隨了內(nèi)源性cAMP水平的降低。已有研究顯示，ADRB2-Gαi蛋白信號(hào)是心衰的主要發(fā)病機(jī)制之一，可引起心肌細(xì)胞肥大、凋亡、心肌重塑和纖維化病變，在多比柔星誘導(dǎo)的大鼠心衰模型中發(fā)現(xiàn)Gαi3蛋白表達(dá)的上調(diào)，而ADRB2-Gαs蛋白信號(hào)則通過(guò)增加心肌收縮力發(fā)揮抗心肌纖維化的作用[11-13]。在本研究中，給予Ac-SDKP抗纖維化治療和預(yù)防治療后能夠逆轉(zhuǎn)上述變化，提示Ac-SDKP能夠通過(guò)上調(diào)Gαs蛋白、抑制Gαi蛋白的表達(dá)促進(jìn)了cAMP水平的上調(diào)，從而抑制了膠原沉積和纖維化的進(jìn)展。

體外研究也顯示，Gαs偶聯(lián)受體激動(dòng)劑/Gαi偶聯(lián)受體拮抗劑、cAMP的類似物均具有抗器官纖維化的效應(yīng)，其中間環(huán)節(jié)是通過(guò)促進(jìn)cAMP表達(dá)水平的上調(diào)，從而抑制成纖維細(xì)胞的增殖、阻抑細(xì)胞外基質(zhì)的沉積和肌成纖維細(xì)胞的分化[7]。本課題組前期研究也顯示，Ac-SDKP能夠抑制矽肺大鼠Ang Ⅱ受體的表達(dá)，從而拮抗了Ang Ⅱ信號(hào)的活化[14]。Ang Ⅱ能夠通過(guò)上調(diào)Gαi蛋白的表達(dá)加速cAMP的降解，促進(jìn)了成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原、α-SMA、纖溶酶原激活物抑制劑和纖連蛋白表達(dá)的上調(diào)[15]。本研究結(jié)果也顯示，Ang Ⅱ能夠顯著誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化，同時(shí)伴隨了Gαi蛋白表達(dá)的上調(diào)和Gαs蛋白、cAMP含量的下調(diào)。而予以Ac-SDKP、AT1受體阻滯劑valsartan或cAMP類似物db-cAMP預(yù)處理，均能通過(guò)對(duì)cAMP信號(hào)的活化，促進(jìn)內(nèi)源性cAMP水平的上調(diào)，從而抑制了膠原合成和肌成纖維細(xì)胞分化?？傊?，Ac-SDKP能夠通過(guò)對(duì)Gαs/Gαi-cAMP信號(hào)通路的調(diào)節(jié)發(fā)揮抗矽肺大鼠肺纖維化的保護(hù)作用。

表2 Ac-SDKP對(duì)Ang Ⅱ誘導(dǎo)的肌成纖維細(xì)胞Gαi、Gαs、α-SMA和Ⅰ型膠原表達(dá)的調(diào)節(jié)

Tab 2 The effect of Ac-SDKP on regulating Gαi，Gαs，α-SMA and collagen type Ⅰ in fibroblasts induced by Ang Ⅱ

組 別n相對(duì)表達(dá)量GαiGαsα-SMAⅠ型膠原對(duì)照組40.08±0.010.23±0.060.27±0.090.25±0.05AngII誘導(dǎo)組41.43±0.21a0.03±0.01a0.60±0.07a0.54±0.11aAc-SDKP干預(yù)組41.10±0.21b0.33±0.08b0.36±0.05b0.37±0.06bvalsartan干預(yù)組40.91±0.30b0.36±0.07b0.35±0.08b0.40±0.10bbd-cAMP干預(yù)組40.61±0.20b0.41±0.09b0.35±0.09b0.34±008bF值23.41419.5009.4785.953

與對(duì)照組比較，aP<0.05；與Ang Ⅱ誘導(dǎo)組比較，bP<0.05

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Effect and mechanism of Ac-SDKP on inhibition of silicosisviaGαs/Gαi-cAMP pathway

GENG Yu-cong1，LI Hong-lei1，GAO Xue-min1，LI Shi-feng1，XUE Xin-xin1，YANG Yi1,XU Ding-jie2，XU Hong1，YANG Fang1

(1.MedicalResearchCenter，NorthChinaUniversityofScienceandTechnology，Tangshan063000，China; 2.InstituteofTraditionalChineseMedicine,NorthChinaUniversityofScienceandTechnology，Tangshan063000，China)

Objective:To explore the anti-fibrotic effect of Ac-SDKPviaGαs/Gαi-cAMP pathway in silicotic rats.Methods:Silicotic rats were constructed using bronchial instillation of SiO2，with Ac-SDKP post-treatment and pre-treatment.Myofibroblasts induced by Ang Ⅱ were pre-treated with Ac-SDKP，valsartan and db-cAMP.The distribution and co-expression of Gsαand vimentin were observed using immunofluorescence.The expression of Gαs，Gαi，α-SMA and collagen type I in lung tissue and fibroblasts were detected by Western blot.The level of cAMP was measured with EIA cAMP kit.Results:Compared with control group，the level of Gαsand cAMP were down-regulated in silicosis model，accompanied by up-regulated level of Gαi，α-SMA and collegan type I(P<0.05).Post-and pre-treatment with Ac-SDKP could suppress the changes induced by silica.In addition，Ac-SDKP，valsartan and db-cAMP efficiently ameliorated the down-regulation of Gαsand cAMP，myofibroblasts differentiation and collagen deposition in fibroblasts induced by Ang Ⅱ(P<0.05).Conclusion:Ac-SDKP inhibits silicosis and myofibroblasts differentiation by regulating Gαs/Gαi-cAMP signal pathway.

silicosis; myofibroblasts; N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline; pulmonary fiborosis; cAMP; rats

2016-03-20

2016-05-24

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81472953)；河北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(H201409115)；河北省研究生創(chuàng)新項(xiàng)目(2015S04)

耿玉聰(1989-)，女，河北保定人，在讀碩士研究生。E-mail：947979751@qq.com

楊方 E-mail:fangyang1955@163.com

耿玉聰，李紅壘，高學(xué)敏，等.Ac-SDKP通過(guò)Gαs/Gαi-cAMP信號(hào)通路抑制矽肺大鼠肺纖維化[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2016，35(5)：658-663.

R135.2; R-332

A

1671-6264(2016)05-0658-06

10.3969/j.issn.1671-6264.2016.05．003