王 健,姜洪波

(1.新鄉(xiāng)市食品藥品檢驗所，河南 新鄉(xiāng) 453000;2.新鄉(xiāng)醫(yī)學院第三附屬醫(yī)院營養(yǎng)科, 河南 新鄉(xiāng) 453000)

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HPLC法測定羥乙磺酸噴他脒的含量

王 健1,姜洪波2

(1.新鄉(xiāng)市食品藥品檢驗所，河南 新鄉(xiāng) 453000;2.新鄉(xiāng)醫(yī)學院第三附屬醫(yī)院營養(yǎng)科, 河南 新鄉(xiāng) 453000)

目的：建立高效液相色譜法測定羥乙磺酸噴他脒的含量的方法。方法:C18色譜柱，甲醇—醋酸銨溶液(30g/L醋酸銨水溶液，用三乙胺調pH為7.5)(50 ：50)，流速1.0mL/min，檢測波長265nm。結果：羥乙磺酸噴他脒在9.98～99.66μg/mL濃度范圍內呈良好的線性關系。結論:測定方法簡便，重現(xiàn)性好。

羥乙磺酸噴他脒；HPLC法；含量測定

羥乙磺酸噴他脒 別名： 戊烷脒、英文名：Pentamidine Isethionate 為無色結晶性粉末，無臭、味苦。可溶于水或甘油，微溶于乙醇，幾乎不溶于氯仿、丙酮、乙醚。 藥理和應用： 本品為芳香雙脒類藥物。本品作用機制尚不夠清楚，可能干擾核苷酸生物合成和DNA的復制，也可干擾葉酸鹽的轉換。對利什曼原蟲有直接殺滅作用。是治療癌艾滋病并發(fā)卡氏肺孢子蟲肺炎的首選藥[1]，是治療黑熱病的有效藥物，但因其毒副作用較嚴重，故臨床僅用于銻劑無效或對銻劑過敏等不宜用銻劑的患者。本品還可用于非洲錐蟲病的早期治療。本文采用HPLC法測定其含量，方法簡便快捷，準確[2]，重現(xiàn)性及穩(wěn)定性好，測定結果滿意。

1 儀器與試藥

Waters2695高效液相色譜儀,2996PDA檢測器，Empower數據處理軟件。羥乙噴他脒對照品(SIGMA公司)，色譜甲醇(天津四友)，醋酸銨(分析純)。供試品：羥乙磺酸噴他脒(河南龍泉藥業(yè)) 。

2 實驗方法

2.1 色譜條件

色譜柱：C18(4.6×250mm)；流動相：甲醇—醋酸銨溶液(30g/L醋酸銨水溶液，用三乙胺調pH為7.5)(50 ：50)，流速1mL/min；檢測波長265nm；理論板數：7000。

圖1 羥乙磺酸噴他脒對照品色譜圖

2.2 線性關系考察[3]

精密稱取干燥至恒重的羥乙磺酸噴他脒對照品適量，加流動相溶解并定量稀釋成每1mL中含羥乙磺酸噴他脒9.98～9.66μg的溶液；分別精密量取上述溶液各10μL，注入液相色譜儀。

2.3 精密度實驗[4]

精密稱定羥乙磺酸噴他脒對照品適量于100mL容量瓶中，加流動相使其溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得(40μg/mL)，作為供試品溶液；精密量取10μL，注入液相色譜儀。

2.4 回收率實驗

精密量取0.08229g、0.10701g、0.12205g的羥乙磺酸噴他脒對照品各三份，分別置100mL容量瓶中，加流動相使其溶解，并稀釋至刻度，搖勻。各精密吸取2mL于50mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻作為供試品溶液；另取0.10701g 的羥乙磺酸噴他脒對照品置100mL容量瓶中，加流動相使其溶解，并稀釋至刻度。精密吸取2mL于50mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻作為對照品溶液。分別精密量取供試品溶液與對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀。

2.5 穩(wěn)定性實驗[5]

精密稱定羥乙磺酸噴他脒對照品適量于100mL容量瓶中，加流動相使其溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得(40μg/mL)， 作為供試品溶液。 在規(guī)定時間精密量取供試品溶液10μL注入液相色譜儀， 進樣三次測定。

2.6 樣品含量測定

分別精密稱取3批樣品各兩分，每份約0.1g于100mL量瓶中，加流動相40mL后使完全溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻。移取此溶液2mL，用流動相稀釋定容至50mL，搖勻，作為供試品溶液。精密量取10μL，注入液相色譜儀，進樣兩次，記錄色譜圖；另取干燥至恒重的羥乙磺酸噴他脒對照品兩份。每份0.1g，同法測定。

3 實驗結果

3.1 線性關系

按“2.2”實驗方法，記錄色譜圖，量取峰面積，平行三次，結果取平均值，見表1。

表1 含量HPLC法線性考察結果

以濃度χ(μg/mL)對峰面積Y進行回歸的線性方程為：у=28518χ-8787.4 г=1.0000

結果表明：本法在9.98～99.66μg/mL范圍內呈良好的線性關系。

3.2 精密度實驗

按“2.3”實驗方法，記錄色譜圖，量取峰面積，平行測定6次，見表2。

表2 含量進樣精密度測定結果

結果表明：進樣精密度(RSD)小于2.0%，符合規(guī)定。

表3 回收率實驗結果

樣品NO．對照品加入量(g)峰面積回收率(%)對照品10．10701122509320．10701122529030．10701121549580%10．0822992656799．2320．0822992647499．2230．0822993312999．93100%40．107011216227100．1650．107011219776100．4560．107011221555100．60120%70．122051385016100．0180．12205138407699．9490．122051384900100．00

3.3 回收率實驗

按“2.4”實驗方法，記錄色譜圖，量取峰面積，求回收率，平均回收率=99.95% RSD=0.47%,見表3。

3.4 穩(wěn)定性實驗

按“2.5”實驗方法，記錄色譜圖，峰面積取平均值，見表4。

表4 供試品溶液穩(wěn)定性考察結果

峰面積RSD%為：0.13%，結果表明：本品溶液在8h內基本穩(wěn)定。

3.5 樣品含量測定

按“2.6”實驗方法，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，含量結果(以羥乙磺酸噴他脒計)，見表5。

表5 含量測定結果(%)

4 討論

曾采用甲醇—水和乙腈—水按不同比例為流動相進行實驗[6]，結果色譜圖峰形較差，經多次實驗，流動相中加入一定量醋酸銨，并用三乙胺調pH到7.5，以甲醇—醋酸銨溶液(30g/L醋酸銨水溶液，用三乙胺調pH為7.5)(50 ：50)為流動相結果峰形良好，理論板數高。通過上述試驗表明，采用本文的HPLC法測定羥乙磺酸噴他脒的含量，方法簡便，結果準確，重復性好，其專屬性較好，可用于羥乙磺酸噴他脒的質量控制，為藥品的注冊申報提供依據。

[1]陳紅. 噴他脒治療卡氏肺孢子蟲肺炎的最新見解[J].新藥與臨床，1990,9(5)：309-310

[2]沈德鳳，張啟星，計瑩，等. HPLC法測定止瀉片中穿心蓮內酯的含量 [J].黑龍江醫(yī)藥科學，2006,29(1)：38

[3]王海英. 高效液相色譜法測定更昔洛韋凝膠的含量[J].黑龍江醫(yī)藥科學，2009,32(3)：26

[4]王健. HPLC梯度法測定復方氯霉素咪康唑乳膏中氯霉素和硝酸咪康唑的含量 [J].黑龍江醫(yī)藥科學，2008,31(5)：21-22

[5]王海英. HPLC法測定鼻炎糖漿中黃芩苷的含量 [J].黑龍江醫(yī)藥科學，2009,32(2)：22

[6]丁立新，韓寧，高金波. 美沙拉嗪腸溶片質量標準研究[J].黑龍江醫(yī)藥科學，2007,30(2)：24

王健(1980～)男，黑龍江佳木斯人，本科，雙學士學位，主管藥師。

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1008-0104(2016)06-0127-02

2016-07-12)