蒙明姜，王剛林，楊巧虹，李 麗

（重慶醫(yī)療器械質(zhì)量檢驗中心，重慶 401147）

含吲哚美辛硅橡膠宮內(nèi)節(jié)育器中吲哚美辛的載藥量及在模擬宮腔液中的釋放研究*

蒙明姜，王剛林，楊巧虹，李 麗

（重慶醫(yī)療器械質(zhì)量檢驗中心，重慶 401147）

目的 測定含吲哚美辛硅橡膠宮內(nèi)節(jié)育器中吲哚美辛的載藥量及其在模擬宮腔液中的釋放量。方法 采用高效液相色譜（HPLC）法，色譜柱為SB－C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm），流動相為0．1 mol／L冰醋酸－乙腈（1∶1），流速為1．0 mL／min，檢測波長為228 nm，檢測溫度為37℃。結(jié)果 吲哚美辛載藥量均在標示量的±10%范圍內(nèi)；吲哚美辛在模擬宮腔液中的釋放速率起初較快，3～14 d后逐漸遞減，最后基本趨于緩慢、平穩(wěn)釋放，且在同一數(shù)量級（20～85 μg／d）。結(jié)論 HPLC法用于測定含吲哚美辛硅橡膠中吲哚美辛的載藥量及其在模擬宮腔液中的釋放量，測定結(jié)果準確、可靠，可滿足相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量檢測與控制。

宮內(nèi)節(jié)育器；含吲哚美辛硅橡膠；吲哚美辛；模擬宮腔液；載藥量；釋放量

宮內(nèi)節(jié)育器（IUD）是一種安全、有效、簡便、經(jīng)濟、可逆的長效避孕工具，僅通過作用于子宮局部而發(fā)揮避孕作用，對全身干擾較少，已被育齡婦女普遍接受，成為全球特別是亞洲地區(qū)使用最廣泛的避孕方法。我國是使用宮內(nèi)節(jié)育器最多的國家，其使用量約占全球的70%[1]。宮內(nèi)節(jié)育器最先由波蘭醫(yī)生Riehard Richter于1909年設計，由蠶腸線構(gòu)成。1974年出現(xiàn)了含銅的宮內(nèi)節(jié)育器，其抗生育效應明顯增強[1]。將吲哚美辛添加到硅橡膠中，再放入宮內(nèi)節(jié)育器中或緊密包裹宮內(nèi)節(jié)育器，所制成的含吲哚美辛硅橡膠宮內(nèi)節(jié)育器植入人體子宮后，可長時間地釋放吲哚美辛，從而達到減輕放置節(jié)育器初期疼痛和防治經(jīng)量增多的目的[2]。

對于硅橡膠中吲哚美辛的含量及其釋放量，目前尚無相關(guān)國家標準。剛出臺的推薦性行業(yè)標準中要求，生產(chǎn)企業(yè)應對產(chǎn)品中的吲哚美辛含量和在模擬宮腔液中的釋放量進行規(guī)定，但并未細化每種含吲哚美辛硅橡膠型號節(jié)育器中吲哚美辛含量和釋放量的具體值。目前，對節(jié)育器中吲哚美辛釋放量的相關(guān)研究較少[3－5]。為此，筆者選取了3種不同規(guī)格的市售含吲哚美辛硅橡膠宮內(nèi)節(jié)育器，采用高效液相色譜（HPLC）法檢測其硅橡膠中吲哚美辛的載藥量，并對其體外（模擬宮腔液中）釋放量進行考察，旨在為該類產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；CPA225D型電子天平（賽多利斯科學儀器＜北京＞有限公司）。

1．2 試藥與樣品

吲哚美辛標準品（中國食品藥品檢定研究院，編號為0258－9602）；冰乙酸、乙腈、甲醇為分析純。樣品1：元宮型含銅含吲哚美辛宮內(nèi)節(jié)育器（煙臺計生器械有限公司）；樣品2：圓形含銅含吲哚美辛宮內(nèi)節(jié)育器（上海醫(yī)用縫合針廠）；樣品3：γCu含吲哚美辛記憶合金宮內(nèi)節(jié)育器（上海醫(yī)用縫合針廠）。

2 方法與結(jié)果

2．1 硅橡膠中吲哚美辛載藥量測定

2．1．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗[6]

色譜柱：SB－C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm）；流動相：0．1 mol／L冰醋酸－乙腈（1∶1）；流速：1．0 mL／min；檢測波長：228 nm；檢測溫度：37℃；進樣量：20 μL。在此色譜條件下，吲哚美辛的理論板數(shù)不低于2 000，色譜峰與相鄰峰的分離度大于1．5。色譜圖見圖1。

2．1．2 溶液制備

稱取吲哚美辛標準品25．3 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，以25 mL甲醇溶解，再以甲醇定容至刻度，制成質(zhì)量濃度為253 μg／mL的溶液，即得吲哚美辛標準貯備液。

圖1 吲哚美辛高效液相色譜圖

取含銅含吲哚美辛宮內(nèi)節(jié)育器1只，取出全部含吲哚美辛硅橡膠，仔細切碎（無損耗），置100 mL圓底燒瓶中，加甲醇25 mL，水浴加熱回流1．5 h，放冷至室溫，將溶液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中；再加甲醇25 mL至圓底燒瓶中，繼續(xù)水浴回流1．5 h，放冷至室溫，將溶液轉(zhuǎn)移至上述100 mL容量瓶中；用甲醇洗滌圓底燒瓶數(shù)次，洗滌液合并入上述100 mL容量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品貯備液。同法不加樣品單獨制備空白溶液。

2．1．3 方法學考察

線性關(guān)系考察：按一定梯度精密量取吲哚美辛標準貯備液適量，分別置100 mL容量瓶內(nèi)，用50%甲醇溶液（甲醇－水＝1∶1，V∶V）依次稀釋成質(zhì)量濃度為1．012，2．024，20．240，50．600，101．200，151．800 μg／mL的系列標準溶液，用HPLC法測定吸收峰面積，以質(zhì)量濃度(X，μg／mL)為橫坐標，峰面積(Y)為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程 Y＝65．564 97 X－1．051 80，r＞0．999 9（n＝6）。結(jié)果表明，吲哚美辛質(zhì)量濃度在 1．012～151．800 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密吸取同一質(zhì)量濃度標準品溶液20 μL，連續(xù)進樣6次，測定峰面積積分值。結(jié)果的 RSD為0．71%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取樣品2，依法平行制備供試品溶液6份，精密吸取20 μL注入高效液相色譜儀，計算載藥量。結(jié)果平均載藥量為51．82%，RSD為1．14%（n＝6），表明方法重復性良好。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一供試品溶液（樣品2），分別于0，3，6，9，12，24 h時進樣測定峰面積。結(jié)果的RSD為0．87%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗：取樣品2已測定質(zhì)量濃度的同一份供試品貯備液（測得質(zhì)量濃度為105．22 μg／mL）2 mL，置10 mL容量瓶中，再精密加入吲哚美辛標準貯備液2 mL，用50%甲醇溶液稀釋至刻度，同法制備同一質(zhì)量濃度的供試品溶液6份，進樣測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 吲哚美辛硅橡膠加樣回收試驗結(jié)果（n＝6）

2．1．4 樣品含量測定

平行配置2份供試品貯備液。精密量取一定量的供試品貯備液，置25 mL容量瓶中，用50%甲醇溶液稀釋至刻度，作為供試品溶液，使其質(zhì)量濃度在標準溶液質(zhì)量濃度線性范圍內(nèi)，搖勻，精密量取20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，代入標準曲線回歸方程中，計算吲哚美辛的含量。取2份供試品溶液含量測定結(jié)果的平均值，按廠家標示含量值計算節(jié)育器載藥量的 RSD，詳見表2。

表2 3種樣品硅橡膠中吲哚美辛含量測定結(jié)果

2．2 硅橡膠中吲哚美辛體外釋放量測定

模擬宮腔液配制：用去離子水分別溶解4．97 g氯化鈉、0．224 g氯化鉀、0．167 g氯化鈣、0．25 g碳酸氫鈉、0．50 g葡萄糖和 0．072 g二水合磷酸二氫鈉，置1 000 mL容量瓶中，再用去離子水稀釋至980 mL，并用1．0 mol／L的稀HCl溶液或1．0 mol／L的稀NaOH溶液將pH調(diào)至7．0±0．1，用去離子水定容，作為模擬宮腔液。

吲哚美辛標準貯備液制備：按2．1．2項下方法制備吲哚美辛標準貯備液，質(zhì)量濃度為297 μg／mL。

線性關(guān)系考察：按2．1．3項下方法試驗，結(jié)果見表3。吲哚美辛的標準曲線回歸方程為 Y＝65．838 18X－2．362 71，r＞0．999 9（n＝5），質(zhì)量濃度線性范圍為2．376～178．200 μg／mL。

表3 吲哚美辛測定方法學考察結(jié)果（n＝5）

樣品浸提液制備與檢測：隨機抽取含銅含吲哚美辛宮內(nèi)節(jié)育器5只，分別置50 mL具塞細口瓶中，每瓶加入50 mL模擬宮腔液，并使樣品全部浸入介質(zhì)中，將細口瓶置（37±0．5）℃的恒溫條件下。同時另取模擬宮腔液，作為空白對照溶液。浸提樣品時，第1周內(nèi)前4 d每天換液，第5～14 d換液時間分別為第7天、第10天和第14天。將更換下來的浸提液按2．1項下方法測定其吸收峰面積，代入標準曲線回歸方程，計算浸提液中吲哚美辛日均釋放量。結(jié)果見表4。

表4 3種樣品硅橡膠中吲哚美辛釋放量測定結(jié)果

3 討論

選取的含吲哚美辛硅橡膠宮內(nèi)節(jié)育器樣品中，吲哚美辛載藥量的 RSD均在標示量±10%范圍內(nèi)，載藥量符合推薦性行業(yè)標準——《含銅宮內(nèi)節(jié)育器用含吲哚美辛硅橡膠技術(shù)要求與試驗方法》[6]中載藥量±15%的要求。

硅橡膠中吲哚美辛D的釋放量與硅橡膠條（片）的加工工藝、載藥量、載藥濃度、浸提介質(zhì)、浸提介質(zhì)的pH、浸提溫度等多種因素有關(guān)[6]。與包裹在鋼絲中的硅橡膠相比，直接裸露的硅橡膠中吲哚美辛的初始釋放速率大10倍左右，其釋放過程均符合零級動力學規(guī)律，起初的釋放速率較快，3～14 d后釋放速率逐漸遞減，基本趨于緩慢平穩(wěn)釋放且在同一數(shù)量級，但總的有效作用時間尚無定論，有待進一步研究。

節(jié)育器作為我國計劃生育政策中廣泛應用的計劃生育醫(yī)療器械，使用量大、面廣，雖已投入市場使用超過30年，但是對于產(chǎn)品的相關(guān)化學物質(zhì)溶出和生物學評價方面的研究，近幾年才開始得到關(guān)注和重視。本研究是按行業(yè)標準在模擬宮腔液中進行，便于試驗操作和具有可重復性，但模擬宮腔液只能模擬子宮內(nèi)的pH、電解質(zhì)和溫度環(huán)境，無法模擬人體復雜的生物學結(jié)構(gòu)，在執(zhí)行行業(yè)標準的同時，希望可以建立動物試驗的相關(guān)試驗模型，進行進一步研究。

含銅宮內(nèi)節(jié)育器用含吲哚美辛硅橡膠的行業(yè)標準將于2017年1月1日起實施，生產(chǎn)企業(yè)將在產(chǎn)品使用說明書中標示產(chǎn)品的載藥量和在模擬宮腔液中的釋放速率，臨床醫(yī)生可根據(jù)使用者的實際情況選擇不同吲哚美辛載藥量和釋放速率的節(jié)育器，在避孕的同時能更好地發(fā)揮含吲哚美辛硅橡膠在節(jié)育器中的消炎作用。

[1]范光升 ．宮內(nèi)節(jié)育器歷史回顧[J]．中國計劃生育學雜志，2009，17（4）：251－252．

[2]修瑞杰，顧向應．含吲哚美辛宮內(nèi)節(jié)育器中吲哚美辛的作用及其機制[J]．國際生殖健康 ／計劃生育雜志，2011，30（6）：454－457．

[3]高 潔，李 瑛，劉建平，等．活性元宮型藥銅365宮內(nèi)節(jié)育器體外釋放吲哚美辛的研究[J]．生殖與避孕，2006，26（10）：602－605．

[4]梁金英，李 瑛，劉建平，等．宮內(nèi)節(jié)育器（Cu－IUD）體外釋放Cu2＋以及含藥Cu－IUD體外釋放吲哚美辛的研究[J]．生殖與避孕，2008，28（1）：22－25．

[5]何澤文，牟善松．吲哚美辛載藥量對宮內(nèi)節(jié)育器基體材料性能及銅離子釋放的影響[J]．暨南大學學報：自然科學與醫(yī)學版，2010，31（4）：378－380．

[6]YY／T 1471－2016，含銅宮內(nèi)節(jié)育器用含吲哚美辛硅橡膠技術(shù)要求與試驗方法[S]．

Determination of Indomethacinin in the Intrauterine Device of Indomethacin Containing Silicone Rubber and Its Release in the Uterine Cavity Fluid Simulation Test

Meng Mingjiang，Wang Ganglin，Yang Qiaohong，Li Li
（Chongqing Quality Testing and Inspection Center for Medical Devices，Chongqing，China 401147）

Objective To determine the content of indomethacin in the intrauterine device of indomethacin containing silicone rubber and its release in the uterine cavity fluid simulation test．M ethods HPLC method was used．The chromatographic column was SB－C18column（4．6 mm×150 mm，5 μm），acetonitrile－0．1mol／L glacial acetic acid（1∶1）was used as the mobile phase at rate of 1．0 mL／min．The detection wavelength was 228 nm and the column temperature was 37℃．Results The drug loading of indomethacin in indomethacin rubber used for IUD was in the range of±10% of labelled amount．The initial rate of release in simulated uterine fluid was faster，after 3 to 14 d，the initial rate was gradually decreased，released slowly and steadily in the same order of magnitude（20－85 μg／d）．Conclusion The established method is accurate，reliable，and can satisfy the detection of the most forms of products on the market．

IUD；indomethacin rubber；simulated uterine fluid；drug loading capacity；release capacity

R194．5

A

1006－4931(2016)10－0020－04

蒙明姜（1981－），女，大學本科，工程師，主要從事無源醫(yī)療器械檢驗工作，（電話）023－67786719（電子信箱）mmj－1217＠163．com；王剛林（1975－），男，重慶云陽人，大學本科，高級工程師，主要從事醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗及產(chǎn)品標準化工作，本文通訊作者，（電話）023－67786713（電子信箱）494382568＠qq．com。

2016－01－10；

2016－02－15)

*全國計劃生育器械標準化技術(shù)委員會資助課題，項目編號：N2014066－T－sh。