梁沛余， 尹磊晶， 華欠桑多 ， 吳 穹

(青海大學醫(yī)學院，青海西寧 810001)

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藏藥十八味訶子利尿丸對高原糖尿病大鼠血糖的影響*

梁沛余， 尹磊晶， 華欠桑多 ， 吳 穹

(青海大學醫(yī)學院，青海西寧 810001)

目的:探討十八味訶子利尿丸對高原糖尿病早期大鼠的血糖及胰島、腎組織形態(tài)學的影響。方法:取大鼠24只，隨機分為藏藥組、模型組和對照組，每組8只。藏藥組和模型組采用多次腹腔注射四氧嘧啶法建立高原(2 295 m)糖尿病大鼠模型，對照組注射等量生理鹽水。建模后藏藥組灌胃十八味訶子利尿丸，模型組和對照組給予等量生理鹽水。灌胃5 d后觀察各組大鼠血糖變化，并取出胰腺和腎臟用蘇木精-伊紅染色(hematoxylin eosin，HE)染色觀察胰島和腎組織的損傷情況。結果:藏藥組血糖比模型組降低(P<0.05)；胰腺HE染色顯示藏藥組相比于模型組胰島損傷較輕；腎臟HE染色顯示3組腎組織均良好，無明顯損傷。結論：十八味訶子利尿丸有明顯的降糖作用，可能與促進胰島B細胞的修復有關，使用四氧嘧啶短期建立糖尿病模型對腎組織損傷較小。

十八味訶子利尿丸；糖尿病大鼠；血糖

十八味訶子利尿丸由訶子、熊膽、紅花、小檗皮、余甘子等十八味藥材制成，收錄于《衛(wèi)生部藥品標準·藏藥》，是經反復篩選總結而得出的具有益腎固精及利尿功效的處方。十八味訶子利尿丸可應用于腎病、尿頻、腰背酸痛、遺精、糖尿病等病癥，是藏醫(yī)臨床上常用的降糖藥物之一。為了闡明其藏醫(yī)理論和臨床用藥基礎，本課題擬通過動物實驗研究，觀察十八味訶子利尿丸對四氧嘧啶高原糖尿病大鼠的降糖作用，為高原藏藥的進一步推廣提供理論依據。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物 清潔級雄性SD大鼠，體質量170～350 g，由青海大學醫(yī)學院病理生理學教研室提供，動物合格證號：SCXK(甘)2009-0004。動物于實驗前適應性喂養(yǎng)3 d，自由攝食、飲水，自然光照。

1.1.2藥品與試劑 十八味訶子利尿丸由青海大學附屬醫(yī)院藏醫(yī)門診提供；四氧嘧啶由北京索萊寶科技有限公司提供，批號：830B024；0.9 %氯化鈉注射液由湖南科倫制藥有限公司提供，批號：G150122D；50 %葡萄糖注射液由湖南科倫制藥有限公司提供，批號：C140425A；羅氏活力型血糖試紙，批號：23471421。

1.1.3儀器 羅康全活力型血糖儀購自羅氏診斷產品中國有限公司；PL3002電子天平購自梅特勒-托利多儀器中國有限公司。

1.2方法

1.2.1大鼠稱重及測量正?？崭寡菍嶒炂陂g各組大鼠均給予普通飼料喂養(yǎng)且自由飲水。將大鼠禁食不禁水12 h即刻稱重并剪尾取血測量空腹血糖值。

1.2.2四氧嘧啶糖尿病大鼠模型的建立 取SD大鼠24只，隨機分為3組，每組8只，依次為藏藥組、模型組和對照組。根據文獻[1]使用改進的建模方法建立糖尿病模型。各組大鼠在給藥前禁食不禁水12 h,藏藥組和模型組腹腔注射四氧嘧啶100 mg/kg，對照組腹腔注射等量生理鹽水，24 h后藏藥組和模型組補注四氧嘧啶100 mg/kg，空白對照組補注等量生理鹽水，且各組每次給藥2.5 h、5 h時均灌胃50 %葡萄糖注射液1 mL/150g。末次給藥72 h后，各組測空腹血糖，若符合糖尿病標準(>11.1 mmol/L)[2]，則表示建模成功。

1.2.3各組灌胃給藥 藏藥組每日灌胃十八味訶子利尿丸350 mg/kg，模型組和空白對照組每日灌胃等量生理鹽水，連續(xù)灌胃給藥5 d。

1.2.4大鼠稱重、血糖測定及組織蘇木精-伊紅染色(hematoxylin eosin，HE)觀察 連續(xù)灌胃5 d后，各組大鼠均禁食不禁水12 h,稱重，同時測定各組大鼠空腹血糖。將各組大鼠斷頭處死，快速剖取胰腺和腎臟，采用HE染色觀察胰島和腎組織損傷情況。

2 結果

2.1大鼠體重比較 模型組實驗后體重減輕，與建模前比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，模型組實驗后體重輕于其他兩組(P<0.05)；藏藥組實驗后體重減少，但與建模前比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；藏藥組處死前體重與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組大鼠實驗前后體重變化

2.2各組大鼠血糖測定比較 與空白對照組比較，藏藥組、模型組糖尿病模型建立成功(P<0.05)；與模型組相比，藏藥組降糖效果好(P<0.05)。見表2。

表2 十八味訶子利尿丸對大鼠血糖的影響

2.3胰島組織形態(tài)學觀察 正常胰島組織呈現團索狀，胰島較大，細胞漿豐富，無空泡樣變性，島內細胞形態(tài)飽滿；與對照組相比，模型組胰島萎縮，細胞漿減少，細胞皺縮，部分胰島細胞出現空泡樣變性；藏藥組與模型組相比，胰島增大，細胞空泡樣變較模型組減輕。見圖1。

3 討論

四氧嘧啶對胰島B細胞有特異的毒性作用，通過產生自由基損傷胰島B細胞脫氧核糖核酸，并且可激活多聚腺苷二磷酸核糖體合成酶的活性，使輔酶Ⅰ的含量下降，從而導致信使核糖核酸受損，胰島素合成減少，最終造成糖尿病的產生。十八味訶子利尿丸中的小檗皮[3]、余甘子[4]等藥物成分根據現代研究均具有降糖作用，作為藏醫(yī)臨床的常用藥物，闡明其藥效理論基礎，對于高原藏藥的推廣具有重大意義。

本實驗研究發(fā)現十八味訶子利尿丸可改善糖尿病癥狀，減緩體重的持續(xù)性下降，并且具有良好的降糖效果。通過3組胰腺HE染色形態(tài)學觀察可知藏藥組相比于模型組胰島面積較大，島內細胞空泡樣變性程度減輕，損傷較輕，推測十八味訶子利尿丸可以促進胰島的修復，減輕四氧嘧啶對胰島B細胞的損傷，其降糖作用與其對胰島保護修復密切相關。根據文獻[5]四氧嘧啶建立糖尿病模型會造成血尿素氮、肌酐的改變，而本實驗腎臟HE染色形態(tài)學觀察發(fā)現3組無明顯差異，說明四氧嘧啶建立糖尿病模型時對腎臟有損傷，但損傷在短時間內對機體的影響較小，并不能造成顯著的形態(tài)學改變。

綜上所述，本實驗結果為十八味訶子利尿丸在臨床上的降糖作用提供了理論依據，但其具體的作用機制仍有待于進一步研究。

[1] 于竹芹，李曉丹，徐新穎，等.海帶在四氧嘧啶糖尿病大鼠模型中的降糖作用[J].中國藥理學通報，2011，27(5)：651-655.

[2] 張峰，高永峰，張繼國.四葉參多糖對糖尿病大鼠血糖及免疫功能的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2012，18(2):184-186.

[3] 張燕，孟憲麗，岳麗珺，等.藏藥小檗皮對糖尿病模型小鼠血糖水平影響的初步研究[J].現代生物醫(yī)學進展，2013，19(13)：3619-3622.

[4] 郭志英，黃玉香，王國權.余甘子治療糖尿病及其并發(fā)癥的研究進展[J].海峽藥學，2014,26(12)：1-4.

[5] 陳紅艷，楊新波，王建華，等.四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的制備及影響因素[J].軍事醫(yī)學科學院院刊，2005,29(6)：535-537.

Effect of Shibawei Keziliniao pills on blood glucose of rats with plateau diabetes

LIANG Peiyu, YIN Leijing, Huaqiansangduo, WU Qiong

(MedicalCollegeofQinghaiUniversity,Xining810001,China)

Objective:To explore the effect of Shibawei Keziliniao (Eighteen-flavor myrobalan diuretic) pills on blood glucose, pancreas and kidney of rats with early plateau diabetes. Methods:24 rats were randomly divided into Tibetan medicine group, model group and blank control group, 8 rats in each group. In the Tibetan medicine group and model group, the method of multiple abdominal injection of alloxan was adopted to establish the plateau (2 295 meters) diabetic rat model, and the rats in the blank control group received the same amount of saline solution by abdominal injection. After the model was established, the rats in the Tibetan medicine group were given Shibawei Keziliniao pills by gavage, and those in the model group and blank control group were given the equivalent saline. The change of blood glucose was observed 5 days after gavage, and the pancreas and kidney were removed to observe their damages by hematoxylin-eosin (HE) staining. Results:The blood glucose in the Tibetan group, compared with that in the model group, significantly reduced (P<0.05); HE staining showed that pancreatic injury condition in the Tibetan medicine group was better than that in the model group, and that the renal tissues of the three groups were good without obvious damage. Conclusion:Shibawei Keziliniao pills have obvious hypoglycemic effect, and may be related to the promotion of the restoration of β cells in pancreatic islet; using alloxan to establish short-term diabetes model has less damage to the kidney.

Shibawei Keziliniao pills; Diabetic rats; Blood glucose

教育部“春暉計劃”合作科研項目(Z2012079)；2014年青海大學醫(yī)學院大學生科技創(chuàng)新基金項目

吳 穹

2015-12-18)