王秋華， 李睿君， 蘇接瑜， 廖黎黎， 張馨文， 曾 蕓

(1.廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 ， 廣西南寧530005 ; 2.南寧市馨宇蛇類養(yǎng)殖基地 ， 廣西南寧530225)

眼鏡蛇肌肉注射鹽酸左氧氟沙星血藥濃度變化規(guī)律的初步研究

王秋華1， 李睿君1， 蘇接瑜1， 廖黎黎1， 張馨文2， 曾 蕓1

(1.廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 ， 廣西南寧530005 ; 2.南寧市馨宇蛇類養(yǎng)殖基地 ， 廣西南寧530225)

為了給臨床防治蛇病合理應(yīng)用左氧氟沙星提供理論依據(jù)，本試驗(yàn)采用微生物法測定眼鏡蛇肌肉注射鹽酸左氧氟沙星后的血藥濃度變化。 結(jié)果顯示： 眼鏡蛇肌肉注射鹽酸左氧氟沙星后0.25 h可以檢測到藥物， 平均血藥濃度為0.78 μg/mL， 0.5 h為0.88 μg/mL， 1 h為0.81 μg/mL， 2 h之后血藥濃度逐漸下降， 24 h未能檢測到血液中含有藥物； 藥物代謝動(dòng)力學(xué)主要參數(shù)為： 達(dá)峰時(shí)間Tmax為0.417±0.118， 峰濃度Cmax為0.902±0.049 μg/mL， 半衰期t1/2λ為13.812±1.864 h。試驗(yàn)表明：眼鏡蛇肌肉注射鹽酸左氧氟沙星吸收快， 消除緩慢。建議蛇臨床應(yīng)用鹽酸左氧氟沙星的方法為肌肉注射， 給藥劑量10 mg/kg， 給藥間隔時(shí)間48 h。

鹽酸左氧氟沙星 ； 眼鏡蛇 ； 血藥濃度

蛇類在我國有著長期的應(yīng)用歷史，其在食用，藥用，生態(tài)平衡保護(hù)中有著廣泛的作用。隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)的發(fā)展，我國對蛇類產(chǎn)品需求日益增加，而野生蛇類資源有限，因此人工養(yǎng)殖蛇類是解決目前對蛇類產(chǎn)品需求緊張的重要途徑。人工養(yǎng)殖實(shí)行高密度養(yǎng)殖模式導(dǎo)致蛇抗病能力降低，發(fā)病率增高，有報(bào)道認(rèn)為，75%蛇病是由細(xì)菌感染引起的[1]，臨床抗菌藥不合理應(yīng)用造成細(xì)菌耐藥性增加，導(dǎo)致蛇病越來越復(fù)雜，因此合理使用抗菌藥物是解決人工養(yǎng)殖蛇類細(xì)菌性疾病的有效措施。本研究在日常接診蛇病例工作基礎(chǔ)上，研究左氧氟沙星在眼鏡蛇體內(nèi)血藥濃度變化規(guī)律，為臨床治療蛇病合理應(yīng)用該藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要藥品及儀器 鹽酸左氧氟沙星粉由廣西獸藥制劑工程研究中心提供，含量90.7%；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，購自北京陸橋生物技術(shù)有限責(zé)任公司；超凈工作臺(tái)(蘇凈安泰，AIRTECHA)；恒溫培養(yǎng)箱(天津市泰斯特儀器有限公司，WP25)。

1.2 菌種及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 彭氏變形桿菌由廣西大學(xué)動(dòng)科院基礎(chǔ)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室提供，是實(shí)驗(yàn)室臨床分離保存的蛇源性細(xì)菌；眼鏡蛇購自廣西南寧市馨宇蛇類養(yǎng)殖基地。

1.3 5%鹽酸左氧氟沙星溶液配制 精確稱取左氧氟沙星粉，加入注射用水，加熱溶解，冷卻至室溫，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值在5.0～6.0之間，定容，用0.65 μm濾膜精濾，100 ℃熱壓30 min，無菌分裝備用。

1.4 藥敏紙片制備 用無菌小鑷子取滅菌的空白濾紙片浸入相應(yīng)濃度的藥液或血液樣品0.5 min，取出沿管壁輕輕去掉多余的液體，60 ℃烘干，備用。

1.5 含菌培養(yǎng)基制作 在超凈工作臺(tái)中，取經(jīng)無菌檢查合格的普通營養(yǎng)瓊脂，用滅菌棉簽沾取一定量的彭氏變形桿菌懸液(1.5×109CFU/mL)，均勻涂布于營養(yǎng)瓊脂上，靜置，待培養(yǎng)基表面無泛光液體即可使用。

1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 精密稱取左氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品適量，用0.1 mol/L鹽酸溶解后定容制成5 120 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，再用0.1 mol/L鹽酸稀釋至濃度為0.125、0.25、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。取滅菌空白濾紙片浸入上述各濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液制備對應(yīng)濃度藥敏紙片，將藥敏紙片平貼在含菌培養(yǎng)基上，每個(gè)濃度做3個(gè)重復(fù)，靜置10分鐘，于37 ℃恒溫倒置培養(yǎng)18～24 h，用游標(biāo)卡尺測量藥敏紙片的抑菌圈直徑。以抑菌圈直徑平方為橫坐標(biāo)，藥物濃度的對數(shù)值為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

1.7 血液藥物濃度測定 取6條健康眼鏡蛇，給藥前1 d抽取血樣作為空白對照。按4 mg/kg體重劑量，肌肉注射5%鹽酸左氧氟沙星溶液，分別于給藥后 0.25、0.5、1、1.5、2、3、5、7、9、12、24 h尾靜脈采血 0.1 mL，按1.4和1.6方法制作血液含藥紙片并測定。

1.8 數(shù)據(jù)處理 采用非房室模型統(tǒng)計(jì)矩理論并借助Windows Microsoft (R) Excel版本2007計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，同時(shí)以血藥濃度平均值和時(shí)間繪制藥時(shí)曲線。

2 結(jié)果

2.1 血液藥物濃度檢測結(jié)果 藥物在0.125～8 μg/mL濃度范圍內(nèi)，抑菌圈直徑平方和濃度對數(shù)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性方程為y=0.008 9x-1.773 1(R2=0.987)。眼鏡蛇單劑量肌肉注射鹽酸左氧氟沙星后，血藥濃度在0.5 h達(dá)到峰值 0.88±0.067 μg/mL。達(dá)到峰濃度后，其在體內(nèi)的分布、消除分兩相，在0.5～3 h消除較快，3～12 h消除較緩慢，給藥后24 h在血液中檢測不出藥物。各時(shí)間點(diǎn)采集血液藥物濃度結(jié)果見表1，藥時(shí)曲線見圖1。

表1 眼鏡蛇肌肉注射鹽酸左氧氟沙星溶液后血藥濃度 (μg/mL，n=6)

注： ND 為not detectable，即檢測不到藥物

圖1 鹽酸左氧氟沙星藥時(shí)曲線圖

2.2 主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算結(jié)果 眼鏡蛇肌肉注射鹽酸左氧氟沙星溶液后，藥動(dòng)學(xué)主要參數(shù)見表2。

表2 鹽酸左氧氟沙星主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù) (n=6)

3 討論

3.1 抗生素測定方法種類很多，微生物檢定法作為國際通用、經(jīng)典的抗生素測定方法，具有方便、經(jīng)濟(jì)、容易操作的優(yōu)點(diǎn)，有研究報(bào)道，抗生素微生物檢定法在藥代動(dòng)力學(xué)分析及抗生素殘留檢測中可以取得較好效果[2-3]。本研究選用該方法的最主要原因是眼鏡蛇很難采血，一次采血量最多只有 0.2 mL。

3.2 本試驗(yàn)中鹽酸左氧氟沙星在給藥后吸收迅速而良好，Tmax為0.417±0.118 h，Cmax為0.902±0.049 μg/mL。有文獻(xiàn)報(bào)道，狗口服4 mg/kg甲磺酸左氧氟沙星后，其Tmax為2.60 h，Cmax為1.73 mg/mL[4]；單峰駝肌肉注射4 mg/kg左氧氟沙星后，其Tmax為1.51±0.61 h，Cmax為1.90±0.73 μg/mL[5]；泌乳山羊肌肉注射4 mg/kg左氧氟沙星后，其Tmax為1.78±0.32 h，Cmax為3.16±0.46 μg/mL[6]。本研究中鹽酸左氧氟沙星在眼鏡蛇體內(nèi)達(dá)峰時(shí)間快，血藥濃度較低，消除緩慢，消除半衰期為13.812±1.864 h，MRT為18.652±2.770 h，而在其他動(dòng)物的消除比較快，都在10 h以內(nèi)[7-11]。由此可見，左氧氟沙星在不同動(dòng)物體內(nèi)的代謝過程存在種屬差異。

3.3 氟喹諾酮類藥物是一種劑量依賴性殺菌藥，理想的殺菌濃度為0.1～10 μg/mL，一般認(rèn)為Cmax/MIC≥10～12或AUC0～24 h/MIC≥100～125，其抗菌效果最好[12]，而且Cmax/MIC的值越高，細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的幾率越小[13]。V.K. Dumka建議左氧氟沙星治療牛的呼吸道、胃腸道、尿道和其他感染的用法為每12h給藥1次，劑量為3 mg/kg體重[8]。根據(jù)計(jì)算Cmax/MIC和AUC/MIC，預(yù)測有效的抑菌劑量，A.Goudah建議當(dāng)MIC≤0.12 μg/mL，左氧氟沙星在治療單駝峰的細(xì)菌感染的臨床推薦劑量為 5 mg/kg 體重[5]。本試驗(yàn)中眼鏡蛇肌肉注射鹽酸左氧氟沙星溶液的劑量是根據(jù)成人一次口服200 mg，按50 kg體重計(jì)算為4 mg/kg，如果按鹽酸左氧氟沙星對本課題組分離蛇源彭氏變形桿菌的MIC為0.16 μg/mL來計(jì)算，則血藥峰濃度需達(dá)到1.6～1.92 μg/mL，給藥劑量應(yīng)為10 mg/kg體重左右。因此，在本試驗(yàn)中，將5%鹽酸左氧氟沙星溶于蛇臨床的推薦劑量為10 mg/kg體重，肌肉注射，間隔 48 h 給藥1次。

[1] 閆振貴,王春璈.蛇病防治研究進(jìn)展[J]. 動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)，2000,17(2):49-51.

[2] 楊建鳴,張福華. 一種適用于微生物法測定抗生素血藥濃度的新標(biāo)準(zhǔn)曲線[J]. 中國藥學(xué)雜志, 1992, 9: 013.

[3] 李延華,王偉軍,張?zhí)m威,等.微生物法檢測牛乳中β-內(nèi)酰胺類抗生素殘留的對比研究[J].中國抗生素雜志,2009,34(1):63-S1.

[4] 任喬林,張宇. 甲碘酸左氧氟沙星的藥代動(dòng)力學(xué)研究[J]. 中國抗生素雜志, 1999, 24(3): 205-207.

[5] Goudah A. Pharmacokinetics of levofloxacin in male camels (Camelus dromedarius)[J]. Journal of veterinary pharmacology and therapeutics, 2009, 32(3): 296-299.

[6] Goudah A,Abo‐El‐Sooud K. Pharmacokinetics, urinary excretion and milk penetration of levofloxacin in lactating goats[J]. Journal of veterinary pharmacology and therapeutics, 2009, 32(1): 101-104.

[7] Giraud E,Baucheron S,Cloeckaert A. Resistance to fluoroquinolones in Salmonella: emerging mechanisms and resistance prevention strategies[J]. Microbes and Infection, 2006, 8(7): 1937-1944.

[8] Dumka V,Srivastava A. Disposition kinetics, urinary excretion and dosage regimen of levofloxacin formulation following single intravenous administration in crossbred calves[J]. Veterinary research communications, 2007, 31(7): 873-879.

[9] Destache C J,Pakiz C B,Larsen C,etal.Cerebrospinal fluid penetration and pharmacokinetics of levofloxacin in an experimental rabbit meningitis model[J]. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 2001, 47(5): 611-615.

[10] Albarellos G A,Ambros L,Landoni M. Pharmacokinetics of levofloxacin after single intravenous and repeat oral administration to cats[J]. Journal of veterinary pharmacology and therapeutics, 2005, 28(4): 363-369.

[11] Aboubakr M,Soliman A. Comparative Pharmacokinetics of Levofloxacin in Healthy and Renal Damaged Muscovy Ducks following Intravenous and Oral Administration[J]. Veterinary medicine international, 2014(1):390875.

[12] Hopkins K L,Davies R H,Threlfall E J. Mechanisms of quinolone resistance in Escherichia coli and Salmonella: recent developments[J]. International journal of antimicrobial agents, 2005, 25(5): 358-373.

[13] Gazew H,Abdouslam N,Hawkey P. Incidence of class 1 integrons in squatemary ammonium compound-polluted enviroment[J]. Antimicrob Agents Chemother, 2005, 49(5): 1802-1807.

Stuy on Plasma Concentration ofLevofloxacin Hydrochloride in Cobrawith Intramuscular Injection

WANG Qiu-hua1, LI Rui-jun1, SU Jie-yu1, LIAO Li-li1, ZHANG Xin-wen2, ZENG Yun1

(College of Animal Science and Technology , Guangxi University , Nanning 530005 , China)

In the study,microbiological assay was conducted to detect plasma concentration of levofloxacin hydrochloride in cobra with intramuscular injection. The results showed that after administration,levofloxacin was detected and the average plasma concentration was 0.78 μg/mL at 0.25 hour, 0.88 μg/mL at 0.5 hour,and 0.81 μg/mL at 1 hour. Plasma concentration was decreased at 2 hour and could not be detected at 24 hour;TheTmaxwas 0.417±0.118, Cmaxwas 0.902±0.049 μg/mL,and t1/2λwas 13.812±1.864 h。 The experimental results indicated that drug absorption of levofloxacin hydrochloride was quikly and elimination was slowly in cobra.Data suggest that clinical application of levofloxacin hydrochloride in snakes is at a dosage of 10 mg/kg every 48 hours by intramuscular injection.

levofloxacin hydrochloride; cobra ; plasma concentration

ZENG Yun

2015-10-21

南寧科技局項(xiàng)目(20142085)

王秋華(1981-)，女，實(shí)驗(yàn)師，碩士,主要從事獸醫(yī)藥理與毒理學(xué)研究工作，E-mail:345526457@qq.com

曾蕓，E-mail:yzeng323@163.com

.S859.79

A

0529-6005(2016)11-0110-03