于靜，張曉瑩，房愛菊，戴宗燕，石冉冉，程鳳鳳

(1齊魯醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所，濟(jì)南250031；2山東省交通醫(yī)院)

乳腺癌組織CD10、MMP-3蛋白表達(dá)及其臨床意義

于靜1，張曉瑩2，房愛菊2，戴宗燕1，石冉冉1，程鳳鳳2

(1齊魯醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所，濟(jì)南250031；2山東省交通醫(yī)院)

目的 觀察乳腺癌組織CD10、基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)表達(dá)，探討其臨床意義。方法 采用免疫組化SP法檢測乳腺癌組織(乳腺導(dǎo)管原位癌23例、微小浸潤乳腺癌16例、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌81例)和對照組乳腺組織(健康人16例、乳腺良性疾病24例)CD10和MMP-3表達(dá)，分析乳腺癌組織CD10、MMP-3表達(dá)及二者共表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系，以及二者的相關(guān)性。結(jié)果 導(dǎo)管原位癌、微小浸潤乳腺癌、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CD10陽性表達(dá)率分別為39.1%、43.8%、92.6%，MMP-3陽性表達(dá)率分別為34.8%、37.5%、86.4%，均高于對照乳腺組織的12.5%、10.0%(P均<0.05)；乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中二者陽性表達(dá)率均高于乳腺導(dǎo)管原位癌及微小浸潤乳腺癌(P均<0.05 )。乳腺癌組織CD10、MMP-3表達(dá)和二者共表達(dá)均與患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)類型相關(guān)(P均<0.05)。乳腺癌組織中CD10和MMP-3表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.436，P<0.05)。結(jié)論 乳腺癌組織CD10、MMP-3表達(dá)增加，二者的表達(dá)變化參與乳腺癌的浸潤轉(zhuǎn)移。

乳腺癌；CD10；基質(zhì)金屬蛋白酶3

乳腺癌是危害女性健康的常見惡性腫瘤之一，其浸潤與轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后的主要原因。CD10是一種具有中性金屬內(nèi)肽酶活性的細(xì)胞表面酶，具有降解基底膜及基質(zhì)的作用，表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞時(shí)參與多種腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移?；|(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)又稱基質(zhì)分解素1，是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)家族中功能最活躍的成員之一，不僅與腫瘤生長有關(guān)，還可破壞周圍正常組織的基質(zhì)結(jié)構(gòu)而便于腫瘤細(xì)胞增殖，導(dǎo)致周圍纖維結(jié)締組織結(jié)構(gòu)松弛而利于腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。本研究檢測乳腺癌組織CD10、MMP-3表達(dá)，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2012年1月～2015年6月濟(jì)南齊魯醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所、山東省交通醫(yī)院手術(shù)切除的女性乳腺癌組織標(biāo)本120例(觀察組)，患者年齡28～88歲，中位年齡 52 歲；其中乳腺導(dǎo)管原位癌23例、微小浸潤乳腺癌16例、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌81例，低中分化72例、高分化48例；雌激素受體(ER)陽性88例、陰性32例，孕激素受體(PR)陽性89例、陰性31例，原癌基因人類表皮生長因子受體2(Her-2)++/+++52例、-/+68例；入組前均未接受任何治療，均無腫瘤家族史。另選對照乳腺組織40例(對照組)，患者年齡27～88歲、中位年齡52歲，包括健康人16例、乳腺纖維腺瘤12例、乳腺增生癥12例。兩組年齡具有可比性。

1.2 乳腺組織CD10、MMP-3表達(dá) 乳腺組織均用10%中性甲醛固定，石蠟包埋，3 μm厚連續(xù)切片。采用免疫組化SP法檢測CD10、MMP-3表達(dá)，抗原修復(fù)用pH 8.0的乙二胺四乙酸，均設(shè)立陽性對照及陰性對照，具體步驟參照試劑盒(福建邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)說明書。陽性對照為良性乳腺組織內(nèi)呈花環(huán)狀連續(xù)環(huán)繞于小導(dǎo)管周圍CD10陽性的肌上皮細(xì)胞，陰性對照為以PBS代替一抗。

CD10表達(dá)于癌周間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜及基質(zhì)，MMP-3表達(dá)于腫瘤細(xì)胞質(zhì)；兩者均以細(xì)胞質(zhì)和(或)基質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)清晰均勻的棕黃色或褐色顆粒同時(shí)背景無非特異性著色為陽性。免疫組化結(jié)果以染色強(qiáng)度評分與陽性細(xì)胞百分比評分之和綜合判斷[1]。染色強(qiáng)度：不顯色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細(xì)胞百分比：無陽性細(xì)胞為0分，陽性細(xì)胞≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。兩項(xiàng)得分相加：0分為陰性(-)，1～2分為低表達(dá)(+)，3～4分為中表達(dá)(++)，5～6分為高表達(dá)(+++)。中、高表達(dá)判定為過度表達(dá)。CD10、MMP-3表達(dá)均為+～+++，判定為二者共同表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。各組乳腺組織中CD10、MMP-3表達(dá)比較采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，其中兩個(gè)獨(dú)立樣本比較應(yīng)用Mann-Whitney檢驗(yàn)，多個(gè)獨(dú)立樣本比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。乳腺癌組織CD10、MMP-3表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD10、MMP-3表達(dá) 40例正常及良性乳腺組織中5例間質(zhì)細(xì)胞及基質(zhì)中CD10弱陽性表達(dá)，4例旺熾性增生的導(dǎo)管上皮細(xì)胞質(zhì)中MMP-3弱陽性表達(dá)。120例乳腺癌組織中，91例間質(zhì)細(xì)胞陽性表達(dá)CD10；84例腫瘤細(xì)胞表達(dá)MMP-3；76例二者共表達(dá)。觀察組乳腺導(dǎo)管原位癌、微小浸潤乳腺癌、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織及對照組CD10陽性表達(dá)率分別為39.1%、43.8%、92.6%、12.5%，過度表達(dá)率分別為13.0%、37.5%、67.9%、0；MMP-3陽性表達(dá)率分別為34.8%、37.5%、86.4%、10.0%，過度表達(dá)率分別為0、37.5%、69.1%、0；觀察組各組織CD10、MMP-3陽性表達(dá)率及過度表達(dá)率均高于對照組(P均<0.05)；浸潤性導(dǎo)管癌組織中二者陽性表達(dá)率及過度表達(dá)率均高于乳腺導(dǎo)管原位癌和微小浸潤乳腺癌組織(P均<0.05)。見表1。

表1 各乳腺組織CD10、MMP-3表達(dá)(例)

2.2 乳腺癌組織CD10、MMP-3表達(dá)及二者共表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 乳腺癌組織CD10、MMP-3表達(dá)及二者共表達(dá)均與患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)類型有關(guān)(P均<0.05)，與腫瘤直徑、組織學(xué)分級、TNM分期、ER、PR、Her-2表達(dá)情況等均無關(guān)(P均>0.05)。見表2。

2.3 乳腺癌組織CD10和MMP-3表達(dá)的相關(guān)性 乳腺癌組織中CD10和MMP-3表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.436，P<0.05)。見表3。

3 討論

在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的過程中，腫瘤間質(zhì)形成了有利于其生長的微環(huán)境。表達(dá)CD10的間質(zhì)細(xì)胞屬于肌纖維母細(xì)胞，是腫瘤間質(zhì)的主要成分，其表達(dá)的CD10可通過降解基底膜及改變基質(zhì)癌周環(huán)境進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移擴(kuò)散，同時(shí)在復(fù)發(fā)過程中發(fā)揮重要作用[2,3]。Gnemmi等[4]研究發(fā)現(xiàn)，CD10表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移致胰腺癌相關(guān)；周春輝等[5]研究顯示，CD10陽性表達(dá)在胰腺癌的發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后中發(fā)揮重要作用；間質(zhì)CD10表達(dá)亦與結(jié)腸癌、食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生有關(guān)[6,7]；Iwaya等[8]觀察到浸潤性導(dǎo)管癌中間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)CD10，在導(dǎo)管原位癌中未見CD10表達(dá)；Makretsov等[9]研究發(fā)現(xiàn)，438例浸潤性導(dǎo)管癌和15例導(dǎo)管原位癌患者中間質(zhì)細(xì)胞均表達(dá)CD10；這些實(shí)驗(yàn)說明CD10參與了腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移，并與患者預(yù)后密切相關(guān)。

表2 乳腺癌組織CD10、MMP-3表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

表3 乳腺癌組織CD10、MMP-3表達(dá)的相關(guān)性(例)

MMPs是參與修飾和降解細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白酶家族中的一類，是介導(dǎo)乳腺間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵因素，能夠通過促進(jìn)上皮細(xì)胞與周圍組織分離、調(diào)節(jié)細(xì)胞信號通路等途徑提高乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移能力。MMP-3是MMPs中功能最活躍的成員之一，可破壞內(nèi)皮衍生的基底膜蛋白多糖，降解細(xì)胞外基質(zhì)。MMP-3在胃腸道腫瘤、肝臟腫瘤等腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá)[10,11]。Lochter等[12]研究發(fā)現(xiàn)，表達(dá)MMP-3的乳腺上皮細(xì)胞會發(fā)生細(xì)胞表型的改變，導(dǎo)致乳腺癌癌前病變及惡性腫瘤形成，且對細(xì)胞外基質(zhì)的降解作用會促進(jìn)癌細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移。

腫瘤細(xì)胞的浸潤是影響乳腺癌患者預(yù)后的主要原因之一[13]，乳腺間質(zhì)的侵犯可使其直接擴(kuò)展。Lagios等[14]研究發(fā)現(xiàn)，21%的高級別乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌有隱性浸潤灶，即使切片中未發(fā)現(xiàn)可疑浸潤灶，乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌有微小浸潤灶的可能性依然存在，這可能是某些未見浸潤的乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌患者腋下出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的原因。Rosen等[15]曾對18例肉眼可見的乳腺腫瘤范圍以外的微小浸潤進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)11%有乳腺浸潤性癌存在，另有22%有乳腺原位癌存在。Page等[16]曾對25例乳腺導(dǎo)管原位癌患者隨訪3年以上，7例發(fā)展為同側(cè)浸潤性乳腺癌。超微結(jié)構(gòu)觀察也證實(shí)，當(dāng)導(dǎo)管內(nèi)癌尤其是高級別導(dǎo)管內(nèi)癌本身體積達(dá)到一定程度時(shí)，基底膜出現(xiàn)缺損，周圍間質(zhì)細(xì)胞異染并伴明顯纖維化[17，18]。上述研究結(jié)果提示，乳腺導(dǎo)管原位癌在發(fā)展為微小浸潤、浸潤性乳腺癌的過程中[19]，間質(zhì)細(xì)胞發(fā)揮了重要作用。

目前，國內(nèi)關(guān)于間質(zhì)CD10和MMP-3在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義尚未見報(bào)道。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CD10和MMP-3在乳腺導(dǎo)管原位癌、微小浸潤乳腺癌、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中表達(dá)陽性率明顯高于正常及良性乳腺組織，且二者共表達(dá)均與乳腺癌組織學(xué)類型密切相關(guān)，即隨乳腺癌進(jìn)展，CD10和MMP-3表達(dá)陽性率及過度表達(dá)率增高，此觀點(diǎn)與國外文獻(xiàn)報(bào)道[9]結(jié)果一致；另外，在乳腺癌組織中二者表達(dá)呈正相關(guān)，提示間質(zhì)CD10和MMP-3可能共同參與了乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展；二者共表達(dá)程度隨乳腺癌組織學(xué)類型進(jìn)展而升高，推測間質(zhì)CD10和MMP-3共表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤與轉(zhuǎn)移，并在乳腺導(dǎo)管原位癌向乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的轉(zhuǎn)化過程中可能起到關(guān)鍵作用。

本研究我們發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中CD10和MMP-3表達(dá)與患者年齡密切相關(guān)，且不同年齡組間表達(dá)程度差異明顯，<35歲的青年乳腺癌患者腫瘤間質(zhì)細(xì)胞 CD10和MMP-3均呈中高表達(dá)，無低表達(dá)，表達(dá)陽性率均明顯高于其他年齡組。既往多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道，青年乳腺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高，預(yù)后差[20～23]。本研究13例青年乳腺癌患者中8例出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，提示過度表達(dá)的間質(zhì)CD10和MMP-3可能與青年乳腺癌患者易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。但本研究此類病例數(shù)少，某些觀點(diǎn)有待擴(kuò)大樣本后進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，乳腺癌組織CD10、MMP-3表達(dá)增加，二者的表達(dá)變化參與乳腺癌的浸潤轉(zhuǎn)移。

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Expression and clinical significance of CD10 and MMP-3 in breast carcinoma tissues

YUJing1,ZHANGXiaoying,FANGAiju,DAIZongyan,SHIRanran,CHENGFengfeng

(1QiluClinicalLaboratory,Jinan250000,China)

Objective To detect the expression and clinical significance of CD10 and matrix metalloproteinase 3 (MMP-3) in breast cancer tissues. Methods The expression of CD10 and MMP-3 was detected in breast cancer tissues(23 cases of ductal carcinoma in situ, 16 cases of microinvasive breast carcinoma, 81 cases of invasive ductal carcinoma and), the control breast tissues (16 cases of normal tissues from healthy people and 24 cases of benign breast tissues) by immunohistochemistry. The correlations between CD10 and MMP-3 and between their co-expression and clinicopathological parameters were analyzed. Results The positive rates of CD10 expression in the ductal carcinoma in situ, microinvasive breast carcinoma and invasive ductal carcinoma were 39.1%, 43.8% and 92.6%, the positive rates of MMP-3 were 34.8%, 37.5%, and 86.4%, which were significantly higher than those of the control breast tissues (12.5% and 10.0%, allP<0.05). The positive rates of CD10 and MMP-3 expression in the invasive ductal carcinoma were higher than those of the ductal carcinoma in situ and microinvasive breast carcinoma (allP<0.05). The (both) positive rates of CD10 and MMP-3 expression were associated with age, histological type and lymph node involvement (allP<0.05). The expression of CD10 and MMP-3 was positively correlated with each other in the breast carcinoma tissues (r=0.436,P<0.05). Conclusion The CD10 and MMP-3 expression is increased in the breast cancer tissues, and the expression changes of CD10 and MMP-3 are involved in the development and metastasis of breast carcinoma.

breast carcinoma; CD10; matrix metalloproteinase 3

山東省交通運(yùn)輸廳科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013B24)。

于靜(1985-)，女，住院醫(yī)師，研究方向?yàn)槟[瘤病理。E-mail: yujing555666@126.com

簡介：程鳳鳳(1978-)，女，主治醫(yī)師，研究方向?yàn)槟[瘤病理。E-mail: 13210557720@126.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.44.004

R737.9

B

1002-266X(2016)44-0012-04

2016-04-12)