王艷霓 管養(yǎng)洪 彭 飛 陳秀娟 葉喜德*

（1江西德安縣中醫(yī)院藥劑科，德安330400；2浙江衢州市衢化醫(yī)院，衢州324004；3江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南昌330006）

HPLC法測(cè)定決明子中橙黃決明素和大黃素的含量

王艷霓1管養(yǎng)洪2彭 飛3陳秀娟3葉喜德3*

（1江西德安縣中醫(yī)院藥劑科，德安330400；2浙江衢州市衢化醫(yī)院，衢州324004；3江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南昌330006）

目的采用HPLC法測(cè)定決明子中橙黃決明素和大黃素的含量。方法Diamonsil C18色譜柱（200×4.6 mm，5 μ），流動(dòng)相為乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫，流速：1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：284 nm。結(jié)果此批次決明子中橙黃決明素含量為0.077%，大黃素含量為0.0032%，橙黃決明素在2～160 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（r=0.999）；大黃素在0.4～3.5 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（r=0.999），結(jié)論本批次市場(chǎng)購(gòu)置的決明子含量低于《藥典》含量。

HPLC；決明子；橙黃決明素；大黃素；中藥化學(xué)

決明子來(lái)源于豆科決明Cassia obtusifolia L．或小決明Cassia tora L．植物的干燥成熟種子[1]。決明子性微寒，味甘、苦、咸，入肝、大腸經(jīng)；具清肝明目，潤(rùn)腸通便之功。臨床主要用于肝火上炎所致目赤腫痛，頭暈?zāi)垦?，羞明流淚，視物昏花及大便秘結(jié)等多種病證[2]。主含萘并吡喃酮類和葸醌類、脂肪酸類、氨基酸和無(wú)機(jī)元素等多種成分[3]，具有降血脂、降壓、抗氧化、保肝、抗菌、潤(rùn)腸通便等多種藥理作用[4]。臨床應(yīng)用有生品和炒制品，文獻(xiàn)對(duì)決明子的研究較多[5]，但由于決明子中所含有的主要成分為蒽醌類化合物，易受來(lái)源、生長(zhǎng)環(huán)境等因素的影響。因此，因地制宜選擇適宜的檢測(cè)方法，對(duì)決明子的深入研究具有一定的借鑒意義?；诖耍疚牟捎肏PLC法對(duì)其所含橙黃決明素和大黃素成分進(jìn)行檢測(cè)，目的是為深入研究決明子提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 材料乙腈為HPLC級(jí)，甲醇、乙酸乙酯、氯仿為分析醇（天津永大化學(xué)試劑有限公司），水為雙蒸水。藥材：決明子購(gòu)自安徽亳州藥材市場(chǎng)，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定組鑒定為決明子。

1.2 儀器HPLC（Waters-510型），996 PDA檢測(cè)器，Milennium2010(v2.0)色譜管理系統(tǒng)，十萬(wàn)分之一電子天平(德國(guó)Sartorius)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件采用Diamonsil C18色譜柱（200× 4.6mm，5 μ），流動(dòng)相乙腈（A）-0.1%磷酸水（B）梯度洗脫：[0 min，A-B(30∶70)；15 min，A-B(40∶60)；40 min，A-B(60∶40)]。流速：1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：284 nm，柱溫：30℃，進(jìn)樣量10 μL[6]。色譜圖見圖1和圖2。

圖1 決明子橙黃決明素和大黃素標(biāo)準(zhǔn)品HPLC圖譜

圖2 決明子萃取后供試品HPLC圖譜

2.2標(biāo)準(zhǔn)品制備精密稱取對(duì)照品橙黃決明素2 mg，大黃素0.8 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，稀釋至刻度線制成混合對(duì)照品，超聲除去氣泡，過(guò)0.45 μm濾膜后備用。

2.3 供試品制備將決明子藥材粉碎過(guò)120目篩，精密稱取1 g決明子粉末置于250 mL圓底燒瓶中，加入甲醇50 mL，水浴加熱回流90 min，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)眉状枷礈烊危喜V液。濾液水浴加熱回收甲醇，殘?jiān)尤?0 mL蒸餾水溶解，超聲五min后氯仿：乙酸乙酯（1∶1）10 mL萃取，萃取層用水浴鍋加熱回收溶劑，殘?jiān)眉状既芙猓?次移至10 mL容量瓶中，定容至刻度線，過(guò)0.45 μm的濾膜后備用。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍

（1）取2.2對(duì)照品配置4 mL稀釋至10 mL容量瓶中，用甲醇定容，過(guò)0.45 μm濾膜。精密量取稀釋液分別為20，10，8，4，2 μL，在‘2.1’色譜條件下進(jìn)樣分析，繪制橙黃決明素的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y）得：y=7000000 x+30220，r=0.999。結(jié)果表明橙黃決明素在2～160 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

（2）取（1）稀釋混合對(duì)照品1 mL，置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，過(guò)0.45 μm濾膜。精密量取稀釋液20，15，10，8，4 μL，在‘2.1’色譜條件下進(jìn)樣分析，繪制大黃素的標(biāo)準(zhǔn)曲線。以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），得：y=4000000x-2489.5，r=0.999。結(jié)果表明大黃素在0.4～3.5 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.5 重復(fù)性考察按2.3方法平行制備5份樣品，分別進(jìn)樣，記錄40 min色譜圖，以橙黃決明素為參照峰，計(jì)算其共有峰相對(duì)峰面積為1.2%，表明重復(fù)性良好。

2.6 精密度考察取2.3制備的同一供試品連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄40 min色譜圖，以橙黃決明素為參照峰，計(jì)算各共有峰相對(duì)峰面積的RSD為1.1%，表明儀器的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性考察取2.3制備的2號(hào)樣品分別在0，2，4，6，8，12 h進(jìn)樣，記錄色譜圖，以橙黃決明素為參照峰，計(jì)算共有峰面積RSD為1.0%，表明供試品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 樣品含量測(cè)定精密稱取決明子粉0.2 g，按照2.3項(xiàng)下要求制備供試品，精密稱取10 μL，依照2.1色譜條件下進(jìn)行樣品測(cè)定，計(jì)算橙黃決明素和大黃素的含量，結(jié)果見下表。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=5）

3 結(jié)果與討論

精密稱取本次決明子細(xì)粉末0.3 g，按2.3項(xiàng)下操作方法制備供試品樣品溶液，橙黃決明素含量為0.077%，大黃素含量為0.0032%，低于《藥典》標(biāo)準(zhǔn)[1]。在摸索HPLC測(cè)定條件時(shí)發(fā)現(xiàn)，由于決明子成分含量較多，不同極性間差異較大，色譜圖中雜質(zhì)峰與測(cè)定指標(biāo)分離度較差，且雜質(zhì)峰較多。為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，減少雜質(zhì)干擾，本實(shí)驗(yàn)在測(cè)定成分之前，先采用乙酸乙酯和氯仿（1∶1）比例的混合溶劑進(jìn)行萃取[2]。結(jié)果表明，萃取后色譜圖中雜質(zhì)峰較少，基線分離較好。在用HPLC測(cè)定決明子中橙黃決明素和大黃素含量時(shí)，本研究考察了不同流動(dòng)相（乙腈-水；甲醇-水），比較了不同的流動(dòng)相比列，結(jié)果顯示乙腈（A）-0.1%磷酸水（B）梯度洗脫[0 min，A-B(30∶70)；15 min，A-B(40∶60)；40 min，A-B(60∶40)]，分離度最好。

決明子在我國(guó)分布范圍廣泛，但由于中藥飲片質(zhì)量規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)研究還處于研究階段，雖然現(xiàn)有文獻(xiàn)對(duì)決明子含量成分研究報(bào)道較多[7]，但研究?jī)?nèi)容分散。決明子主要有效成分含量，由于受產(chǎn)地、加工炮制、存儲(chǔ)運(yùn)輸?shù)榷喾矫娴挠绊?，造成其成分含量差異變化不一[8]。同時(shí)，在現(xiàn)有管理體制方面，由于市場(chǎng)還沒(méi)有形成對(duì)中藥飲片監(jiān)管相應(yīng)的完善機(jī)制，致使中藥飲片質(zhì)量難于得到根本性的保障，臨床療效受到影響。因此，建立中藥飲片規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)研究及一致性評(píng)價(jià)體系，對(duì)于提高中藥飲片質(zhì)量、確保臨床安全用藥具有重要意義。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010．

[2]蘇黎燕.決明子的藥理成分、應(yīng)用與進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)信息，2015，28(8)：347．

[3]盧金清，黎強(qiáng)，李肖爽，等.決明子研究進(jìn)展[J].湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，16(4)：124-126．

[4]董曉強(qiáng)，尹占芳.決明子的化學(xué)成分及藥理作用研究[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2013，20(7)：18-19．

[5]梁朔，張振秋，米寶麗，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定決明子中6種蒽醌類成分[J].中成藥，2013，35(3)：584-588．

[6]紀(jì)亞明.不同產(chǎn)地決明子的有效成分含量差異與品質(zhì)評(píng)價(jià)[J].中醫(yī)藥信息，2012，29(6)：24-26．

[7]王青，張偉東，宋小妹，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地決明子中12種蒽醌類成分的含量[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2012，28(6)：502-505．

[8]楊美麗，張少杰，楊金蕊，等.決明子的特征圖譜研究及質(zhì)量分析[J].中國(guó)藥業(yè)，2015，24(22)：75-77．

Determination on Content of Aurantio Obtusin and Emodin in Cassiae by HPLC

WANG Yanni1,GUAN Yanghong2,PENG Fei3,CHEN Xiujuan2,YE Xide3*
(1.Department of Pharmacy,De'an Hospital of Traditional Chinese Medicine,Jiangxi Province,De'an 330400,China; 2.Quzhou Quhua Hospital,Zhejiang Province,Quzhou 324004,China; 3.College of Pharmacy,Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine,Nanchang 330004,China)

Objective To determine the contents of aurantio obtusin and emodin in cassiae by HPLC.Methods Diamonsil C18 column(200 x,4.6 mm,5),mobile phase:acetonitrile(A)-0.1%phosphoric acid solution(B),gradient elution,flow rate:1 mL/ min,detection wavelength:284 nm.ResultsThe content of aurantio obtusin and emodin of this batch cassiae was 0.077%and 0.0032%,respectively.The content of aurantio obtusin was in 2-160 g/mL range which is a good linear relationship(r=0.999), while the content of emodin in 0.4-3.5 g/mL range,a good linear relationship(r=0.999).Conclusion The content of this batch cassiae is lower than the standard content of Traditional Chinese Medicine Codex.

HPLC;cassiae;aurantio obtusin;emodin;chemistry of Chinese materia medica

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.24.065

1672-2779（2016）-24-0143-02

張文娟本文校對(duì)：鐘凌云

2016-09-27）

*通訊作者：552376722@qq.com