胡紅美，郭遠(yuǎn)明，孫秀梅，朱敬萍，尤炬炬，何依娜，顧蓓喬

（浙江海洋大學(xué)海洋與漁業(yè)研究所，浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江省海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江舟山 316021）

超聲波萃取-PSA凈化-氣相色譜法測定水產(chǎn)品中氯霉素

胡紅美，郭遠(yuǎn)明，孫秀梅，朱敬萍，尤炬炬，何依娜，顧蓓喬

（浙江海洋大學(xué)海洋與漁業(yè)研究所，浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江省海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江舟山 316021）

建立了測定水產(chǎn)品中氯霉素的氣相色譜電子捕獲檢測方法(GC-ECD)。樣品通過乙酸乙酯超聲波萃取，正己烷初步凈化后，經(jīng)過適量的N-丙基乙二胺（PSA）固相吸附劑進(jìn)一步凈化，硅烷化試劑衍生，再采用GC-ECD法檢測，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，氯霉素在1.5～100 μg/L濃度范圍內(nèi)，組分含量與峰面積呈線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.9996，檢出限為0.1 μg·kg-1。氯霉素在不同基質(zhì)的水產(chǎn)品（鰻鱺、鱖魚、大管鞭蝦）中不同濃度水平的加標(biāo)回收率分別為92%～103%、86%～108%和78%～99%，相應(yīng)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSDs）分別為3.5%～4.2%、3.1%～4.6%和2.6%～3.9%（n=5）。本方法簡單快速，基體干擾小，線性范圍寬，靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度能滿足水產(chǎn)品中氯霉素的含量分析。

超聲波萃??；N-丙基乙二胺；氣相色譜電子捕獲檢測法；水產(chǎn)品；氯霉素

氯霉素（chloramphenicol，CAP）是一種廣譜抗菌藥，因其具有抑菌性和殺菌性被廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中細(xì)菌性疾病的預(yù)防和治療。氯霉素因其苯環(huán)上有硝基，故對人體有嚴(yán)重的副作用，會(huì)抑制骨髓造血功能，引起再生障礙性貧血[1]。約1/3 000的人對氯霉素過敏，從而引起貧血癥狀，此癥狀的出現(xiàn)與否與劑量無關(guān)，歐盟、美國等國規(guī)定在食品中氯霉素零容許量，即不得檢出，且檢出限的要求也越來越嚴(yán)格，歐盟由原來的10 μg/kg降至0.1～0.3 μg/kg，我國農(nóng)業(yè)部第235號(hào)公告也規(guī)定氯霉素及其鹽、酯在所有動(dòng)物性食品中不得檢出。氯霉素在食品中的殘留問題不僅關(guān)系到人類的健康，對國際食品貿(mào)易也有著巨大的影響。

目前，國內(nèi)外關(guān)于氯霉素殘留檢測方法已很成熟，主要采用酶聯(lián)免疫法[2-5]、氣相色譜法[6-10]、氣相色譜-質(zhì)譜法[11-13]、液相色譜法[14-16]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等[17-25]。酶聯(lián)免疫法使用酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)試劑盒，通常適合于大規(guī)模篩選，但由于抗體批次不同，測定結(jié)果將出現(xiàn)一定差異，重復(fù)性差，而且特異性很強(qiáng)，不能進(jìn)行多殘留檢測，試劑昂貴，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果[26-27]。氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法，一般需要衍生試劑進(jìn)行衍生化[28]，方法較煩瑣。液相色譜法靈敏度達(dá)不到要求[29]。高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，可通過第一級(jí)質(zhì)譜選擇出母離子，采用多離子反應(yīng)監(jiān)測技術(shù)極大地減少了背景干擾，降低噪音，提高靈敏度，是氯霉素殘留檢測的首選方法[30]，也是目前氯霉素檢測方法的研究熱點(diǎn)。但液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀價(jià)格昂貴，并未在一般實(shí)驗(yàn)室普及，2013年農(nóng)業(yè)部關(guān)于農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測能力驗(yàn)證中水產(chǎn)品中氯霉素殘留方法仍然規(guī)定的是氣相色譜法，由此可見，氣相色譜法仍是目前最易普及的方法，也是國際公認(rèn)的氯霉素類藥物定量檢測方法。

由于水產(chǎn)品基質(zhì)的組成成分十分復(fù)雜，樣品處理不當(dāng)，會(huì)對其中的氯霉素分析產(chǎn)生嚴(yán)重干擾。因此樣品的凈化至關(guān)重要。氯霉素類藥物分析中，常用的凈化方法主要是先用正己烷脫脂，再采用固相萃取法凈化。但采用固相萃取法，需要進(jìn)行萃取柱活化、上樣、淋洗、洗脫等過程，操作麻煩。本研究建立了采用超聲波萃取法，正己烷初步凈化，及PSA固相吸附劑再凈化，氣相色譜電子捕獲檢測法測定水產(chǎn)品中氯霉素殘留量的方法。

1 試驗(yàn)部分

1.1 材料與試劑

所有水產(chǎn)品（鰻鱺、鱖魚、黃鱔、草魚、鯽魚、鯉魚、鳊魚、甲魚、青蟹、大管鞭蝦）采集于江西瑞金市、南昌市、九江市等地的水產(chǎn)養(yǎng)殖基地。

正己烷、丙酮、乙酸乙酯、甲醇均為色譜純，氯霉素（純度98.5%），N,O-雙（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）：三甲基氯硅烷（TMCS）（99:1）（衍生化試劑）；其他試均為分析純。請?jiān)谙鄳?yīng)的試劑后補(bǔ)充生產(chǎn)廠家

1.2 儀器與設(shè)備

GC-450氣相色譜儀，配電子捕獲檢測器，Centrifuge 5810高速離心機(jī)，R-215旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)儀，KD200可視氮吹儀，配5 mL模塊，PSA吸附劑（N-丙基乙二胺，粒徑50 μm），C18吸附劑（粒徑50 μm）。

1.3方法

1.3.1 樣品前處理方法

魚，去鱗、去皮，沿脊背取肌肉；蟹、甲魚，取可食肌肉部分；蝦，去頭、去殼、去附肢，取可食肌肉部分。樣品切為不大于0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的小塊，用高速組織搗碎機(jī)勻質(zhì)，密封，標(biāo)明標(biāo)記，并將試樣于-18℃冷凍保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)，將樣品解凍，稱取5.00 g于50 mL離心管中，加入20 mL乙酸乙酯，渦旋2 min，以480 W功率30℃下連續(xù)超聲提取10 min，以6 000 r/min高速離心3 min，收集提取液于100 mL梨形瓶中，再往試樣中加入10 mL乙酸乙酯，重復(fù)上述過程，合并提取液，于40℃水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。殘?jiān)? mL甲醇溶解后，加入25 mL 4%氯化鈉溶液，渦旋30 s，再加入15 mL正己烷，渦旋2 min，以6 000 r/min高速離心3 min，棄去上層正己烷相，再用10 mL正己烷重復(fù)提取一遍（如果試樣含脂肪較多，可重復(fù)提取多遍）。水相中加入15 mL乙酸乙酯，渦旋2 min，以6 000 r/min高速離心3 min，吸取乙酸乙酯相，過無水硫酸鈉脫水過濾于50 mL梨形瓶中，再向水相中加入10 mL乙酸乙酯，重復(fù)上述操作。用少量乙酸乙酯淋洗無水硫酸鈉，合并提取液，于40℃水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。加入2 mL丙酮溶解提取物并轉(zhuǎn)移到5 mL具塞玻璃離心管中，用1 mL丙酮洗滌梨形瓶，合并丙酮溶解液，加入100 mg PSA吸附劑，渦旋30 s，以3 000 r/min高速離心3 min，吸取上清液于另一潔凈5 mL具塞玻璃離心管中，于50℃干浴中吹氮蒸發(fā)至近干，再用1 mL丙酮洗滌離心管壁并吹氮蒸發(fā)至干，再加入100 μL衍生化試劑，渦旋混合30 s，在70℃烘箱中反應(yīng)30 min后，再于50℃干浴中吹氮蒸發(fā)恰好至干。加入1 mL正己烷，渦旋混勻，取1 μL進(jìn)入氣相色譜分析。

1.3.2 色譜條件

DB-5MS毛細(xì)管氣相色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm，美國Varian公司）；不分流進(jìn)樣；載氣：高純氮?dú)猓?9.999%）；流速：2.0 mL/min；進(jìn)樣口溫度：260℃；ECD檢測器溫度：300℃；程序升溫條件：柱初始溫150℃，保持1.0 min，以15℃/min的升溫速度升至260℃，再以30℃·min-1的升溫速度升至280℃，保持5.0 min；總運(yùn)行時(shí)間24 min；進(jìn)樣體積：1 μL。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品0.005 0 g，用甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶中，配制成500 mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。再通過逐級(jí)稀釋，甲醇定容，配制成氯霉素濃度為100 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)使用液，4°C儲(chǔ)存。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別量取15、25、50、100、200、500、1 000 μL的標(biāo)準(zhǔn)使用液，于50℃干浴中吹氮蒸發(fā)至干，加入100 μL衍生化試劑，渦旋混合30 s，在70℃烘箱中反應(yīng)30 min后，再于50℃干浴中吹氮蒸發(fā)恰好至干。加入1 mL正己烷，渦旋混勻，配制成氯霉素濃度為1.5、2.5、5、10、20、50和100 μg/L的7個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，供GC-ECD分析。以峰面積為縱坐標(biāo)，氯霉素濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4 樣品定量分析公式

式中：ρ為測定結(jié)果，μg/kg；C為上機(jī)濃度，μg/L；V為樣品定容體積，mL；m為取樣質(zhì)量，g。本次試驗(yàn)V=1 mL，m=5.00 g。幾個(gè)量和公式不對應(yīng)，請核實(shí)

2 結(jié)果與討論

2.1 提取溶劑的選擇

氯霉素微溶于水，易溶于乙酸乙酯、甲醇、乙腈等有機(jī)溶劑。甲醇、乙腈對人體毒性較大，且乙腈在揮干時(shí)容易冒泡，揮干時(shí)間長[12]，通常用于奶制品的提取，甲醇的極性比較大，提取液含雜質(zhì)較多，而乙酸乙酯偏中性，提取液含雜質(zhì)較少，提取效率高，毒性小[8]，容易揮干。本實(shí)驗(yàn)采用乙酸乙酯作為提取溶劑可以最大限度的從水產(chǎn)品中提取出有效成分并使共萃取的干擾物較少。

2.2 PSA凈化條件的確定

對于某些樣品，經(jīng)正己烷去除脂質(zhì)和類脂后，無需進(jìn)一步凈化便可滿足分析方法要求，但對于凈化不完全的樣品需要進(jìn)行進(jìn)一步凈化。文獻(xiàn)報(bào)道比較多的是采用C18固相萃取柱[6-7,19]，硅膠固相萃取柱[14]，HLB固相萃取柱[25]，或者多種固相萃取柱相結(jié)合[13]的方法進(jìn)行再凈化。雖然固相萃取法能達(dá)到較好的凈化效果，但使用固相萃取法步驟較多，需要進(jìn)行萃取柱活化、上樣、淋洗、洗脫等過程，過柱時(shí)間較長，過柱和洗脫過程中流速控制不當(dāng)容易造成樣品損失，而且固相萃取柱的成本也較高，不利于大批量樣品的檢測。本實(shí)驗(yàn)比較了PSA吸附劑、C18吸附劑在不同有機(jī)溶劑（正己烷、乙酸乙酯、甲醇、丙酮）中的凈化效果，結(jié)果表明，C18吸附劑在不同有機(jī)溶劑（正己烷、乙酸乙酯、甲醇、丙酮）中的凈化效果均不明顯，PSA吸附劑在正己烷、乙酸乙酯中，會(huì)使目標(biāo)化合物被完全吸附，最終檢測不到任何氯霉素，PSA吸附劑在甲醇和丙酮中凈化效果均較好。這說明采用PSA吸附劑凈化時(shí)，吸附劑所處的溶劑影響很大，PSA吸附劑在非極性或若極性環(huán)境中會(huì)吸附氯霉素，而在極性環(huán)境中能起到較好凈化效果。此外，若氯霉素衍生完畢后再采用PSA凈化，結(jié)果表明隨著PSA劑量的增大，當(dāng)使用50 mg PSA時(shí)，便檢測不出衍生反應(yīng)產(chǎn)物。考慮到最終定容試劑為正己烷，本試驗(yàn)先凈化后衍生。另一方面，PSA吸附劑與C18吸附劑凈化效果的差異，可能是因?yàn)镻SA吸附劑能有效的去除食品中影響農(nóng)殘檢測的碳水化合物、脂肪酸、有機(jī)酸、酚類、一些極性色素，以及糖類等干擾，C18吸附劑主要用于去除脂肪和酯類等非極性干擾物，而在上一步正己烷凈化中已除去大部分的脂質(zhì)和類脂，因此，C18吸附劑吸附效果不佳?？紤]到甲醇毒性較大，且沸點(diǎn)也較高，選擇用丙酮溶解提取物，在丙酮中用PSA吸附劑凈化。此外，考察了不同量（0～200 mg）的PSA吸附劑對凈化效果的影響。結(jié)果表明，隨著PSA吸附劑量的增加，凈化效果有所增加，但由于PSA吸附劑會(huì)吸附一定的丙酮，用的越多，回收率會(huì)有所下降，最終選擇使用100 mg PSA吸附劑，此時(shí)既能達(dá)到較好的凈化效果，又能保證較高的回收率。

2.3 衍生條件的確定

由于氯霉素結(jié)構(gòu)中，含有羥基、氨基、硫?；皝啺坊?，都有很強(qiáng)的極性、熱穩(wěn)定性差、難揮發(fā)，在采用氣相色譜法分析此類化合物時(shí)，需對其極性官能團(tuán)進(jìn)行酯化、硅烷化或?；蔁岱€(wěn)定性和易揮發(fā)的衍生物。本實(shí)驗(yàn)利用硅烷化試劑將氯霉素的羥基硅烷化衍生成易揮發(fā)熱穩(wěn)定的物質(zhì)。由于衍生化試劑遇水易分解，會(huì)造成目標(biāo)化合物衍生不成功，因此，必須保證衍生過程中無受潮。同時(shí)，衍生完畢后，多余的衍生溶液必須通過吹氮蒸發(fā)恰好至干，過頭或未干，均會(huì)影響衍生效果。因此，本實(shí)驗(yàn)選用可視氮吹儀，隨時(shí)觀察氮吹過程。

2.4 方法評價(jià)

2.4.1 方法的線性范圍及檢出限

將配制好的7個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)系列，按照樣品分析相同的色譜條件進(jìn)行GC-ECD分析。用外標(biāo)法繪制出濃度-峰面積校正曲線。氯霉素在1.5～100 μg/L濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。各組分的線性范圍、線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)見表1，根據(jù)三倍信噪比測得氯霉素檢出限分別為0.1 μg/kg。氯霉素的標(biāo)準(zhǔn)氣相色譜圖如圖1。

圖1 氯霉素（20 μg/L）標(biāo)準(zhǔn)色譜圖Fig.1 Standard chromatogram of 20 μg/L of CAP

表1 回歸方程，線性范圍，相關(guān)系數(shù)和檢出限Tab.1 Regression equation,linear range and detection limit(S/N=3)

2.4.2 方法的精密度和回收率

為考察基體效應(yīng)以及驗(yàn)證方法準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，分別準(zhǔn)確稱取鰻鱺、鱖魚、大管鞭蝦樣品5.00 g，按照前述處理方法三次平行測定，均未檢出氯霉素，再分別往5.00 g鰻鱺、鱖魚、大管鞭蝦樣品中各加入15 μL、75 μL和200 μL的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，配制成低（0.3 μg/kg）、中（1.5 μg/kg）和高（4 μg/kg）3種濃度的加標(biāo)樣品，分別進(jìn)行5次平行測定，精密度及回收率結(jié)果見表2。結(jié)果表明，鰻鱺、鱖魚、大管鞭蝦樣品加標(biāo)回收率為分別為92%～103%、86%～108%和78%～99%，RSD范圍分別為3.5%～4.2%、3.1%～4.6%和2.6%～3.9%（n=5）。結(jié)果表明，該方法基體效應(yīng)可以忽略，精明度和準(zhǔn)確度滿足分析方法要求。圖2為大管鞭蝦樣品和加標(biāo)大管鞭蝦樣品氣相色譜圖。

圖2 大管鞭蝦樣品（A）和加標(biāo)大管鞭蝦樣品（CAP：1.5 μg/kg）（B）氣相色譜圖Fig.2 Chromatogram of(A)Solenocera melantho and (B)spiked Solenocera melantho with 1.5 μg/kg of CAP

表2 鰻鱺、鱖魚、大管鞭蝦中氯霉素的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)及方法的精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=5）Tab.2 Results of recoveries and RSDs(n=5)of CAP in spiked eel,mandarin fish,and Solenocera melantho by the proposed method

2.5 實(shí)際樣品分析

取采集于江西瑞金市、南昌市、九江市等地的水產(chǎn)養(yǎng)殖基地的鰻鱺、鱖魚、黃鱔、草魚、鯽魚、鯉魚、鳊魚、甲魚、青蟹、大管鞭蝦，分別進(jìn)行氯霉素含量測定，所有樣品中均未檢出氯霉素，滿足我國以及歐盟、美國等國對水產(chǎn)品中氯霉素限量的要求。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用超聲波萃取，PSA凈化和氣相色譜電子捕獲檢測法技術(shù)，對水產(chǎn)品中氯霉素進(jìn)行了測定。該方法簡單、靈敏、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高、回收率令人滿意，基體干擾小，能滿足水產(chǎn)品中氯霉素的分析要求，并進(jìn)一步應(yīng)用到其他食品中氯霉素的檢測。

[1]TURTON J A,HAVARD A C,ROBINSON S,et al.An assessment of chloramphenicol and thiamphenicol in the induction of aplastic anaemia in the BALB/c mouse[J].Food and Chemical Toxicology,2000,38(10):925-938.

[2]郝 凱,過世東,胥傳來.水產(chǎn)品中甲砜霉素殘留的ELISA檢測方法研究[J].食品工業(yè)科技,2006,2(2):186-189.

[3]周宏琛,朱 濤,閆秋成,等.競爭酶聯(lián)免疫吸附方法檢測氯霉素假陽性原因和質(zhì)量控制的探討[J].水產(chǎn)科學(xué),2007,26(2): 123-124.

[4]彭運(yùn)平,齊 維,唐海波,等.應(yīng)用酶聯(lián)免疫法檢測魚肉、蜂蜜中氯霉素的殘留量[J].現(xiàn)代食品科技,2010,26(12):1 414-1 417.

[5]譚 慧,麥 琦.酶聯(lián)免疫分析法測定水產(chǎn)品中氯霉素殘留量[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2010,20(7):1 649-1 650.

[6]PFENNINGA P,MADSON M R,ROYBAL J E,et al.Simultaneous determination of chloramphenicol,florfenicol,and thiamphenicol residues in milk by gas chromatography with electron capture detection[J].Journal of AOAC International,1998,81 (4):714-720.

[7]PFENNING A P,ROYBAL J E,RUPP H S,et al.Simultaneous determination residues of chloramphenicol,florfenicol,florfenicolamine,and thiamphenicol in shrimp tissue by gas chromatography with electron capture detection[J].Journal of AOAC International,2000,83(1):26-30.

[8]王建華,陳世山.同時(shí)測定魚肉中氯霉素和甲砜霉素殘留量的毛細(xì)管氣相色譜法[J].分析測試學(xué)報(bào),2001,20(3):89-91.

[9]DING S Y,SHEN J Z,ZHANG S X,et al.Determination of chloramphenicol residue in fish and shrimp tissues by gas chro－matography with a microcell electron capture detector[J].Journal of AOAC International,2005,88(1):57-60.

[10]吳明媛,楊姝麗,黎小正,等.毛細(xì)管電子捕獲氣相色譜法同時(shí)測定水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素殘留[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,40(5):567-570.

[11]NAGATA T,OKA H.Detection of residual chloramphenicol,florfenicol,and thiamphenicol in yellowtail fish muscles by capillary gas chromatography-mass spectrometry[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,1996,44(5):1 280-1 284.

[12]康繼韜,俞雪鈞,謝東華,等.氣相色譜/質(zhì)譜測定水產(chǎn)品中氯霉素殘留量[J].分析實(shí)驗(yàn)室,2005,24(7):38-40.

[13]謝孟峽,劉 媛,邱月明,等.固相萃取-氣相色譜質(zhì)譜測定動(dòng)物組織中氯霉素殘留量[J].分析化學(xué),2005,33(1):1-4.

[14]NAGATA T,SAEKI M.Simultaneous determination of thiamphenicol,florfenicol,and chloramphenicol residues in muscles of animals and cultured fish by liquid chromatography[J].Journal of?Liquid?Chromatography,1992,15(12):2 045-2 056.

[15]楊 方,余孔捷,黃建生.高效液相色譜法檢測鰻魚中氟苯尼考?xì)埩袅縖J],分析試驗(yàn)室,2005,24(2):44-46.

[16]占春瑞,郭 平,陳振桂,等.超高效液相色譜法測定水產(chǎn)品中甲砜霉素和氟甲砜霉素殘留[J].分析化學(xué),2008,36(4): 525-528

[17]HIRSCH R,TERNES T A,HABERER K,et al.Determination of antibiotics in different water compartments via liquid chromatography eleetrospray tandem mass spectrometry[J].Journal of Chromatography A,1998,815(2):213-223.

[18]VAN DE RIET J M,POTTER R A,CHRISTIE-FOUGERE M,et al.Simultaneous determination of residues of chloramphenicol,thiamphenicol,florfenicol,and florfenicol amine in farmed aquatic species by liquid chromatography/mass spectrometry[J]. Journal of AOAC international,2003,86(3):510-514.

[19]彭 濤,李淑娟,儲(chǔ)曉剛,等.高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定蝦中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素殘留量[J].分析化學(xué),2005,33(4):463-466.

[20]楊 方,余孔捷,黃建生.高效液相色譜法檢測鰻魚中氟苯尼考?xì)埩袅縖J].分析試驗(yàn)室,2005,24(2):44-46.

[21]SHERIDAN R,POLICASTRO B,THOMAS S,et al.Analysis and occurrence of 14 sulfonamide antibacterials and chloramphenicol in honey by solid-Phase extraction followed by LC/MS/MS analysis[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2008,56(10):3 509-3 516.

[22]劉艷琴,王 浩,殷曉燕,等.高效液相色譜-電噴霧離子阱質(zhì)譜測定乳品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素殘留的研究[J].食品科學(xué),2008,29(4):344-346.

[23]張鳳清,王巖松,范世華,等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定動(dòng)物肌肉組織中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅縖J].食品科學(xué),2010,31(8):248-251.

[24]羅輝泰,黃曉蘭,吳惠勤,等.QuEChERS/液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定魚肉中30種激素類及氯霉素類藥物殘留[J].分析測試學(xué)報(bào),2011,30(12):1 329-1 337.

[25]萬譯文,鄧克國,劉 麗.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素的殘留量[J]，分析試驗(yàn)室,2013,32(5):84-87.

[26]POSYNIAK A,ZMUDZKI J,NIEDZIELSKA J.Evaluation of sample preparation for control of chloramphenicol residues in porcine tissues by enzyme-linked immunosorbent assay and liquid chromatography[J].Analytica Chimica Acta,2003,483(1/2): 307-311.

[27]沈美芳,趙文亞,費(fèi)志良,等.用酶聯(lián)免疫法測定水產(chǎn)品中氯霉素的殘留量[J].南京師范大學(xué)學(xué)報(bào):工程技術(shù)版,2003,3 (2):1-4.

[28]莊 宛,葉 玫.動(dòng)物性食品中氯霉素(CAP)殘留檢驗(yàn)方法概述[J],福建畜牧獸醫(yī),2004,26(1):8-10.

[29]戴 軍,陳尚衛(wèi),顧小紅.HPLC測定牛奶和蝦仁中氯霉素殘留[J].無錫輕工大學(xué)學(xué)報(bào),2003,11(22):81-84.

[30]GIKAS E,KORMALI P,TSIPI D.Development of a rapid and sensitive SPE-LC-ESI MS/MS method for the determination of chloramphenicol in seafood[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2004,52(5):1 025-1 030.

Determination of Chloramphenicol and Florfenicol in Fishery Products by Gas Chromatography Combined with Ultrasonic Extraction and PSA Purification

HU Hong-mei,GUO Yuan-ming,SUN Xiu-mei,et al
(Institute of Marine and Fisheries of Zhejiang Ocean University, Key Laboratory of Mariculture and Enhancement of Zhejiang Province,Marine Fishery Institute of Zhejiang Province,Zhoushan 316021,China)

A simple,efficient,sensitive,and low matrix interference method for determination of chloramphenicol(CAP)in fishery products using gas chromatography-electron capture detector(GC-ECD)has been developed.The samples were treated by ultrasonic extraction with ethyl acetate and n-hexane purification.Further purification of the extracts was processed by a moderate amount of primary secondary amine (PSA)sor－bent.Then the purified solutions were derivatized with slilyl reagents.The linearity of the method ranged from 1.5 to 100 μg/L for CAP,with correlation coefficient of 0.999 6.The limits of detection was 0.1 μg·kg-1.The recoveries of spiked CAP with external calibration method at different concentration levels in different matrix of samples(eel,mandarin fish,and Solenocera melantho)were 92%-103%,86%-108%,and 78%-99%,respectively,and with relative standard deviations of 3.5%-4.2%,3.1%-4.6%,and 2.6%-3.9%(n=5),respectively.It is concluded that this method can be successfully applied for the determination of CAP in fishery products.

ultrasonic extraction;primary secondary amine;gas chromatography-electron capture detector;fisher products;choramphenicol

S859.84

A

1008－830X(2016)03－0222－06

2016-03-20

國家自然科學(xué)基金（21407127）；浙江省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2016F30021；2016F50040）

胡紅美（1986-），女，工程師，碩士，研究方向：漁業(yè)環(huán)境與水產(chǎn)品質(zhì)量安全.E-mail:huhm@zju.edu.cn

顧蓓喬（1963-），男，上海市人，研究方向：水域環(huán)境及食品加工.E-mail:gbq@zjou.edu.cn